结晶紫染色 细胞形态不清晰.doc

我做tranwell的时候，先用无水乙醇固定，之后用0.1%结晶紫染色20min，随后用1*PBS清洗。结果发现，细胞形态非常不清晰，基本上看不出来。更加难以区分细胞核和胞质。与苏木精伊红染色效果差很远。请问这是什么原因？谢谢因为，结晶紫染色是不会区分出细胞核和细胞质的。苏木精染细胞核成紫色，伊红染细胞质成粉色。这些是原理。细胞形态不清晰原因：没固定好，细胞破碎。改4%的中性多聚甲醛试试。2，染色时间长，改为10-15min。3，没清洗干净，多洗几遍，4，最重要的：结晶紫染色本身就不清晰，就是为了计算细胞数目，方便才这样。要是为了观察结构，就不要用结晶紫了。另附上我的图片一张。结晶紫(Cystalviolet)1.0g 95%乙醇20ml 1%草酸铵(NH4)2C2O4水溶液80ml ,将结晶紫溶解于95%乙醇中后，与草酸铵溶液相混合，静置48 小时使用。此染液稳定，置密闭的棕色瓶中可储存数月。3 j: G( r/ n4 E3 T(1) 吸去培养液，用棉签轻轻擦除上室聚碳酸酯膜内侧面贴壁细胞，用0.01MPBS1 Q) N% 0 uE& 3 Go9 i; g$ v漂洗两次，4%多聚甲醛固定10 分钟；$ _# G+ o+ q( 6 |(2) 吸去固定液，将膜风干，每孔加0.6ml 0.1%结晶紫染液，室温中放置20 分钟；(3) 轻轻甩去染色液，用蒸馏水洗涤各孔，将上室取出，从聚碳酸酯膜内侧面用吸, G: K" h J- o# O3 k$ h0 # r; L- 水纸吸干水分，自然干燥；(4) 测定前，将各实验组上室置入新的24 孔板中，每孔加0.6ml 33醋酸脱色，充分振荡，每组设定5 复孔；同时设置调零孔（33醋酸）；( E( d$ % j1 S# A(5) 比色：每孔取脱色液150l 加入96 孔板中，在570nm 处测定OD 值。细胞侵袭实验用的结晶紫染色方法1、甲醇固定510min。2、水洗3次。3、结晶紫染510min，水洗3次。4、75%乙醇5min。5、95%乙醇5min。6、无水乙醇5min。7、二甲苯10min。8、树胶封片。