中性粒细胞碱性磷酸酶染色.doc

中性粒细胞碱性磷酸酶染色检查的标准操作程序(SOP)实验室名称项 目编 号制定日期细胞室中性粒细胞碱性磷酸酶染色*年*月*日【目的】指导中性粒细胞碱性磷酸酶染色检查。【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。【用途】1） 鉴别白血病（低）和白血病样（高）反应。2） 鉴别淋巴瘤（高）和何杰金病。3） 鉴别细菌性感染（高）与病毒性感染。【染色原理】基质中甘油磷酸钠在碱性磷酸酶与触媒剂镁离子的存在下，水解成磷酸钠与甘油，磷酸钠再与氯化钙结合成不溶解的磷酸钙，再与硝酸钴形成磷酸钴，最后与硫化铵成为黑色的硫化钴沉淀。【分布】血细胞的碱性磷酸酶（简称“碱酶”）活性，主要见于成熟的中性粒细胞（故称NAP），定位于胞浆中。但当碱酶的活性极强时，由于扩散作用常可使黑色沉淀遮盖于胞核上。其他细胞系均为阴性反应。【试剂配置】1.作用液3%甘油磷酸钠 10ml2%巴比妥钠水溶液 10ml蒸馏水 20ml2%氯化钙 20ml2%硫酸镁 2ml PH9.2-9.5为适当。2. 2%硝酸钴（冰箱保存可用12个月）。3. 1%硫化铵（用时新配，每50ml分装1瓶，冰箱保存）。4. 0.5%伊红、1%藏红或2%甲绿溶液。【染色步骤】a) 新鲜干燥的涂片固定于95%酒精中10分钟。b) 水洗数次，晾干。c) 加入37作用液中，孵育46小时（作用液事先预温30分钟）。d) 自来水缓缓冲洗数次，待干。e) 2%硝酸钴5分钟。f) 水洗，待干。g) 1%硫化铵5分钟（此液只能用4小时）。h) 自来水冲洗，再用蒸馏水涮洗，待干。i) 0.5%伊红复染3分钟或2%甲绿复染10分钟。j) 水洗，晾干，镜检。【对照样本】选择已知酶活性强的标本与被检标本同时染色，如所染阳性样本未呈现应有的阳性反应，说明染色技术有问题。【结果判断】1.阳性颗粒呈棕黑色（与过氧化酶阳性颗粒相似，但粒小色淡），定位于成熟中性粒细胞胞浆内。2.计数方法，按碱酶活性强弱，分为5级。0级 胞浆呈原色，无颗粒。级 胞浆呈浅棕色和浅灰色，小颗粒占胞浆面积2550%级 胞浆呈棕色片状沉淀，小到中等颗粒约占胞浆面积的5075%。级 胞浆充满棕黑色沉淀，分布均匀，中到大颗粒占胞浆面积的75100%。级 胞浆充满深黑色致密的团块状沉淀，甚至遮盖胞核，中到大颗粒占胞浆面积的100每例的血片，均计数100个中性粒细胞，求出碱性磷酸酶阳性细胞的百分比（阳性率），并按碱酶活性的强弱不同，求得阳性指数（积分）。【临床意义】1.正常人：中性粒细胞的碱性磷酸酶活性较弱，阳性率为50%左右（2080%），阳性强度多为+，积分为80左右（60100）。2.炎症感染：各种化脓性感染，中性粒细胞的碱性磷酸酶活性显著增加。病毒感染，则变化较小。3.白血病样反应：碱酶活性增高最显著，阳性率为50100%。阳性强度全部为+或+，积分为200左右（80380）。4.白血病1）粒细胞性：急性、亚急性、慢性白血病和绿色瘤皆剧减，慢性之积分可降为0。接受治疗缓解时可恢复正常，复发时可再度降低。2）单核细胞：血涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶活性降低（积分多为0）。3）淋巴细胞性：急性白血病、淋巴肉瘤、中性粒细胞的碱性磷酸酶活性增强。5贫血：各种贫血，其中性粒细胞的碱性磷酸酶的活性皆增高，尤以再生障碍性贫血最显著。6. 其他疾患：如多发性骨髓瘤、原神经细胞瘤、风湿热、糖尿病、真性红细胞增多症，以及外科手术后，中性粒细胞的碱性磷酸酶活性都有所增高。【注意事项】1. 含有甘油磷酸钠的基质作用液必须新鲜配置，置冰箱中待用，两天内有 效。2. 作用液的PH值，必须在9.4左右（以1N或0.2mol/L NaOH纠正）。3. 每次实验应同时作阳性标本为对照。4. 中性粒细胞的碱性磷酸酶活性在不同状态下的改变：年龄：1岁以下的幼儿较高，60岁以上的老人较低。性别：女性较高。时间：清晨到中午逐渐增高，到下午6时以后又开始降低。当垂体、肾上腺皮质功能亢进时：中性粒细胞碱酶的活性剧增。在体温增高、代谢旺盛、妇女的经期及妊娠时：中性粒细胞的碱性磷酸酶活性均有所增高。操作人员 部门主管 质量负责人姓名 王烈 日期 04年07月15日