新试验一芦丁的提取分离与鉴定.docx
实验一芦丁的提取、精制与鉴定、实验目的与要求l 、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法;2 、掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苜，苜元和糖部分的鉴定方法。R=-glu-rha 芦丁R=H 能皮素4芦丁溶解度：冷水1： 8000 热水1: 200冷乙醇1: 300热乙醇1: 30难溶丁乙酸乙酯、丙酮，不溶丁苯、氯仿、乙酰、及石油酰等溶剂。能皮素溶解度：冷乙醇1: 650热乙醇1: 60可溶丁甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、毗噬，不溶丁石油酰、 乙酰、氯仿和水中。二、实验原理本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质， 用热水提取和 精制；芸香苜届丁苜类化合物，可被稀酸水解成能皮素（苜元） ，葡萄糖和鼠李 糖。芦丁和能皮素通过化学反应，色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。三、实验内容（一）提取分离和纯化1、芦丁的提取：2、精制（重结晶）：3、芦丁的水解：流程图如下:槐米（20g）研碎，丁 500ml烧杯中，加 350, 250ml水煮沸 15min,10min棉花过滤提取液放置1-1.5h,抽滤滤液（弃去）沉淀物（粗品芦丁）水解精制1/2粗品芦丁1/2粗品芦丁150ml, 1%b6O80倍水|加热溶解，趁热抽滤直火加热水解30min放冷IU抽滤J沉淀水洗项中性不溶物（弃去）滤液iJ放置11-1.5h ,抽滤滤液粗品能皮素精品芦丁氢氧化钙调pH至中性杜过滤滤渣（弃去）水解液（水浴浓缩至2ml）（二）鉴定l、化学检识取芦丁和能皮素少量，置2支试管中分别加乙醇8ml使溶解（1）盐酸一镁粉反应：取芦丁和能皮素乙醇液 0.5ml，置2支试管中分别加浓 盐酸5滴，再加少量镁粉，观察颜色变化。（2）Molish反应：取芦丁和能皮素乙醇液 0.5ml,置2支试管中分别加10%x 蔡酚0.5ml摇匀，倾斜试管，沿管壁缓缓滴加浓硫酸 0.5ml,静置，观察二层 溶液界面处颜色变化，并比较芦丁和能皮素的区别。（3）FeCL3反应：取芦丁和能皮素乙醇液 0.5ml,置2支试管中分别加1%E氯 化铁乙醇液几滴，观察颜色变化。（4）AlCl3反应：取芦丁和能皮素乙醇液 0.5ml，置2支试管中分别加1%E氯 化铝乙醇液几滴，先置可见光下观察后，置紫外灯下观察颜色变化。(5) Mg(Ac) 2反应：取芦丁和榔皮素乙醇液 0.5ml，置2支试管中分别加1忍 酸镁乙醇液几滴，观察颜色变化。2、色谱鉴定(1) 梅f皮素和芦丁的纸色谱鉴定点样：取圆形滤纸，距圆心1厘米处用铅笔划一同心圆，为起始线，间隔 1 厘米处点样品(a,b,c,d )。将点好样品的滤纸置于培养皿中分别用展开剂、 径向展开。a自制芦丁乙醇液b芦丁对照品乙醇液c自制榔皮素乙醇液d榔皮素对照品乙醇液。展开剂：正丁醇一醋酸一水(4 : 1: 5,上层)正丁醇一醋酸一水(4 : 1: 5,下层)显色：可见光下观察色斑。喷1%A1C13乙醇液，再置紫外灯下观察荧光。(2) 糖的纸层析鉴定点样：取圆形滤纸，同上法点样和展开(e,f,g )。e 水解液f葡萄糖对照品水溶液 g鼠李糖对照品水溶液展开剂：正丁醇一醋酸一水(4 : 1: 5,上层)显色：喷洒苯胺-邻苯二甲酸，电炉上加热烘烤至色斑出现。四，分析讨论1, 芦丁酸水解时有何现象，如何解释?2, 榔皮素和芦丁纸色谱鉴定时，用 BAW (4: 1: 5)上层和下层展开后，解释 两者的相对比移值大小关系？3, 葡萄糖和鼠李糖的纸层析鉴定时，用 BAW (4: 1: 5)上层展开后，何者相 对比移值较大，为什么？芦丁，榔皮素鉴定（二）一，榔皮素衍生物的制备榔皮素五乙酰化物的制备：取榔皮素结晶 200 mg,置于十燥三角锥形瓶中，加5ml醋酊，用毛细管滴加农硫酸一小滴，振摇使完全溶解，水浴上加热30分钟（注意应避免反应过程中引入水份），放冷后将反应液在搅拌下倾入 100ml水 中，一直搅拌至油滴消失，且有固体沉淀析出为止，抽滤沉淀并洗涤，十燥后以 95%乙醇重结晶，即得榔皮素五乙酰化物无色结晶。二，芦丁的 UV, HPLC, IR 分析（一）芦丁的UV分析（实验地点，二号试验楼 A栋411室）：（二）芦丁的HPLC分析（实验地点，二号试验楼 A栋411室）：1, 色谱条件与系统适应性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-1% 冰乙酸溶液（ 32: 68）为流动相，检测波长为257nm,理论塔板数按芦丁峰计算 不低于20002, 对照品溶液的制备：精密称取在 120C十燥至恒重的芦丁对照品适量，加甲 醇制成每1ml含0.1 mg的溶液，即得。3, 供试品溶液的制备：取自制精制品约 g,精密称定，置ml容量瓶中，加入甲 醇溶液ml,超声处理30分钟，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，过 0.45从m微 孔虑膜，即得。4, 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 l ,注入液相色谱仪 中，测定，即得。（三）芦丁的IR分析（实验地点，二号试验楼 A栋2室）:
