实验室常用菌株的特点.doc

1 : DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。 E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体 转化时，可与载体编码的 卩-半乳糖苷酶氨基端实现 a-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别 重组菌株。基因型：F-, 0 80dlacZ A M15 A (lacZYA-argF)U169 , deoR , recAI , endA1 , hsdR17(rk- , mk+) , phoA , supE44 ,入,thi-1 , gyrA96 , relA12: BL21(DE3)菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体 T7启动子的表达载体(如 pET系列) 的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于 入噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。 该菌适合表达非毒性蛋白。基因型：F-, ompT , hsdS (rBB-mB -), gal, dcm (DE3 )3 : BL21(DE3) pLysS 菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的 基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒 性蛋白和非毒性蛋白。基因型：F-, ompT hsdS (rBB-mB ), gal, dcm (DE3 , pLysS , Camr 4: JM109 菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行 DNA转化或用M13 phage载体进行转 染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZA M15进行a-互补，从 而显示卩-半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1 , endA1 , gyrA96 , thi 1 , hsdR17 , supE44 , relA1 , A (lac proAB ) /F ' traD36 proAB+ , lacIq , lacZ A M155: TOP10 菌株该菌株适用于高效的 DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。基因型：F- , mcrAA (mrr-hsd RMS-mcrBC) ,0 80 , lacZ A M15 lac X 74 ,recA1 , ara A 139 A (arsleu)7697 , galU , galK , rps , (Strr) endA1 , nupG 6: HB101 菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44 , hsdS20 (rB-mB ), recA13 , ara 14, proA2 , lacY1 , galK2 , rpsL20 , xyl-5 , mtl-1 , leuB6 , thi-17: M110 或 SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在 CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。常用的菌株都会产生 dam,dcm，从而受到甲基化的影响.部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割，如FbaI和Mbol等，一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响，如XbaI, BclI等。而且甲基化只发生在特定序列，以Xbal为例，只有在位点序列旁出现GA或TC，该Xbal位才会被甲基化。而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法：(1) 选用上述酶的同功酶，女口Sau3AI，DNA识别切割位点与 Mbol相同；但 不受甲基化影响；(2) 利用甲基化酶缺失的受体细胞进行 DNA的制备，女口 E.coli JM110和链霉 菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶， 从这些细 胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。8: E.coli JM110要排除dam,dcm 甲基化的影响，需要用特定的 dam-,dcm-的菌株，如JM110 如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒， 则不会被甲基化各种感受态细胞的区别用途特征XI1-Blue 菌株基因型：endA1 gyrA96( naIR) thi-1 recA1 relA1 lac gl nV44 FT n10 proAB+ lacIqA (lacZ)M15 hsdR17(rK - mK+)。特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和质粒提取。BL21(DE3)菌株基因型：F -ompT gal dcm Ion hsdSB(rB- mB-)入(DE3 lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5)。特点：该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于 入噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于 BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达。BL21(DE3)ply 菌株基因型：F- ompT gal dcm Ion hsdSB(rB- mB- )入(DE3) pLysS(cmR)。特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达DH5a菌株基因型：F- endAI glnV44 thi- 1 recAI relAI gyrA96 deoR nupG 80dlacZ A M15A (lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-,入-特点：一种常用于质粒克隆的菌株。其80dlacZ A M15基因的表达产物与 pUC载体编码的卩-半乳糖苷酶氨基端实现 a互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变 有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒 DNA的提取。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。JM109菌株基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ A (lac-proAB) e14- F traD36 proAB+ lacIq lacZ A M15hsdR17(rKmK+)。特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达，可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。DH10B菌株基因型：F- mcrA A (mrr-hsdRMS- mcrBC) 80dlacZ A M15 A lacX74 endA1 recA1 deoRA (ara,leu)7697 araD139 galU galK nupG rpsL - 入The most widely used E. coli strain for BAC clo ning is DH10B。host for pUC and other-compleme ntati on vectors; pBR322useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues , useful for plasmid rescue procedures 。ELECTROMAX DH10B T1 CELLS说明：DH10B细胞是高转化效率的 E. coli，可以完美应用于大多数实验应用。DH10B基因型具有以下特点：? lacZ A M15用于重组克隆的蓝/白斑筛选?消除了 mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系统，允许构建更多具有代表性的基因组文库(1,2)? endA1突变，可以增加质粒产量和数量?高效率转化大小为150 kb的质粒，用于产生cDNA或基因组文库DH10B?可以表达tonA的基因型，tonA能够提供对T1和T5噬菌体感染的抗性(DH10B?T1R)。DH10B?的基因型：F mcrA A (i-hsdRMS- mcrBC) 0 80lacZ A M15 A lacX74 recAI endAI araD139 A (ara, leu)7697 galU galK入 rpsL (StrR) nupGDH10B? T1R 的基因型：F mcrA A (rMrsdRMS- mcrBC) 0 80lacZ A M15 A lacX74 recA1 endA1 araD139 A (ara, leu)7697 galU galK入 rpsL (StrR) nupG tonA