戊二醛固定液的配制.doc

Step 1:0.2M 磷酸缓冲液的配制：磷酸二氢钠( NaH2PO4.H2O)2.6 克磷酸氢二钠 (Na2HPO4.12H2O)29 克双蒸馏水 加至 500 毫升 pH 调至 7.4Step 2: 戊二醛固定液的配制：25% 戊二醛1ml双蒸馏水4ml0.2mol/L 磷酸缓冲液5ml戊二醛最终浓度2.5%pH 值 7.3-7.4戊二醛固定剂的配方：( a) 磷酸缓冲液的配方：A 液： 0.2M 磷酸氢二钠贮备液：Na2HPO4 9H2O17.81 克或：Na2HPO4 7H2O26.83 克或：Na2HPO4 7H2O35.82 克加双蒸水至500 毫升B 液： 0.2M 磷酸二氢钠贮备液NaH2PO4 H2O13.8 克或: NaH2PO4 2H2O15.61 克加双蒸水至600 毫升PH7.4)使用时将A液40.5毫升和B液9.5毫升混合成0.2M磷酸缓冲液。(b)2.5 %戊二醛固定液的配方：0.2M 磷酸缓冲液50 毫升25 %戊二醛溶液10毫升加双蒸水至100 毫升具体步骤如下：离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定(2%多聚甲醛+ 2.5 %戊二醛。双醛固定对免疫电镜更加适合。)30min, PBS漂洗两遍，1%锇 酸固定1h, PBS青洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或 小的离心管中，然后常规梯度脱水，浸透，包埋。把细胞离心取沉淀细胞,然后拿PBS液漂洗两遍后，倒去上清,直接加 2.5%戊二醛固定后 , 送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察