大鼠实验性牙移动过程牙周组织中Ⅰ型胶原的表达变化.doc

作者：曹阳 , 刘楚大鼠实验性牙移动过程牙周组织中I型胶原的表达 变化 08-11-07 14:48:00 峰 ,编辑： studa20【摘要】【目的】 研究正畸力作用下大鼠牙周膜中I型胶原的表达变化，探讨正畸牙移动过程中牙周组织的改建机理。【方法】利用SD雄性大鼠建立实验性牙移动模型，采用免疫组织化学染色技术分别观察了大鼠牙周膜中I型 胶原在机械力刺激下的免疫阳性表达变化及相互关系。【结果】 大鼠牙齿加力 后，实验组与对照组牵张区之间的染色统计学上具有显著性差异（ P< 0.05 ）， 两实验组压缩区与牵张区染色强度差异有统计学意义（P< 0.05），牵张区染色强度明显高于压缩区。牵张区13 d开始强表达，一直持续到14 d ;压缩区1 d后开始表达减弱，7 d后开始回升。另外发现相当于50150 g质量的正畸力 对大鼠牙周组织无明显破坏。【结论】机械力作用下，大鼠牙周膜I型胶原代谢发生变化 : 牵张区表达增强，压缩区表达减弱，且与时间密切相关。相当于 50150 g 质量的机械力范围是正畸用力的安全范围。【关键词】正畸牙移动；I型胶原；免疫组织化学1材料和方法1.1 动物模型的建立选取（200± 20） g的8周龄健康雄性SD大鼠共56只，随机分为七个 时间组，每组 8 只，根据临床常用的正畸力值将各组进一步分成轻加力（50 g ）组、重加力（150 g ）组（按同等质量的重力牵引）每小组 4只。采 用盐酸氯胺酮（4 mL/L）肌注麻醉。将大鼠一侧上颌第一磨牙和前牙间用结扎 丝拴正畸用 Ni-Ti 螺旋弹，测力计测力，建立不同大小正畸力作用下的牙移动 模型。对侧未做处理的磨牙作为对照。分别于加力后3、 6、 12、 24 h 和 3、7、 14 d 定期处死。1.2 标本的制备固定与脱钙：按相应时间段将大鼠肌注麻醉， 40 g/L 多聚甲醛左心室 灌注处死。解剖上颌骨，保留上颌第一磨牙及周围组织，多聚甲醛溶液固定 12 h。 19 g/L EDTA（pH 7.4 ）脱钙液中脱钙 30 d 。洗净脱钙液，梯度酒精脱水， 石蜡包埋。组织切片厚度控制在 5卩m裱于玻片（含20 g/L APES的纯丙酮 液处理）上。1.3 免疫组织化学染色大鼠的上颌骨冰冻切片，常规 LSAB法。主要试剂：第一抗体：兔抗大 鼠I型胶原多克隆抗体 Boster公司（BA0352;正常山羊血清工作液（中山公司 SP9001）;第二抗体：生物素化羊抗兔IgG （中山公司SP9001）;辣根酶标记链霉 卵白素工作液 （中山公司 SP9001 ）;胰蛋白酶（ Trypsin ）（Difco 88-03-28）;DAB 显色液（Sigma公司5627）。阴性对照试验：空白对照,用0.01 mol/L PBS（pH 7.4） 取代一抗; 血清对照 ,用正常羊血清取代一抗。1.4 统计学处理为保证实验结果的可比性，不同组采集的样本均保存至同一时间，由同 一实验员在相近时间段和相同条件下进行免疫组化染色。采用 Image-Pro Plus 图像分析软件对各组牙周膜染色强度进行测量，分析操作由同一实验员在同一 时间内采用统一标尺测得，测量次数为 3 次。在牵张区和压缩区牙周膜根中下 1/2区随机选择三个视野，测量其积分光密度值（IOD值），采用SPSS10.0统 计软件，将结果进行t检验和双因素方差分析，并采用 LSD法进行验后多重比 较（ Post Hoc Multiple Comparisons ）。2 结 果在未加力正常对照组，1型胶原呈束状排列，整齐一致、无断裂，染色 均匀，主要在细胞间质着色（图1A）。实验组压缩区，1型胶原纤维排列紊 乱，染色不均， 3 d 后压缩侧可见明显的骨吸收陷窝和多核破骨细胞（图1E）。实验组牵张区，1型胶原束明显增宽，胶原纤维排列整齐（图1C）。实验组与对照组牵张区之间的染色统计学上具有显著性差异（表 1） ,但实验组 压缩区与对照组压缩区之间，两对照组压缩区与牵张区之间染色强度统计学上 无显著性差异。两实验组压缩区与牵张区染色强度统计学上有显著性差异，牵张区染色 强度明显高于压缩区，并与时间有关（表 1）：在牵张区实验组加力后 3、 6 h 的I型胶原染色强度与对照组比较无明显差异；12 h、1 d开始染色阳性反应信号逐渐增强，第 3天达到高峰，第 7天、 14天的染色阳性信号强度仍高于对 照组，但开始逐渐下降。而在压缩区实验组加力第1天的I型胶原染色强度开始降低，到第 7 天，染色强度开始逐渐回升。