常用培养基的配方精修订.doc

常用培养基的LOGYOUR LO(某某广告设计有限么 专戒沁F倉电子谊目录木、产品动画设计、广告设计、发布、 An album of paintinjzs of calling card of the professional electron that make, electron, catalog product animation design, advertisant design, roloase, installs伊红美蓝培养基原理一般用来鉴定大肠杆菌。伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形 成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故 沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大 肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸， 菌体带H+,故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光 泽。用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌步骤如下： 制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。 用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1： 10稀释。 取0. 1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行 分离。 将划线后的培养皿倒置37°C温箱中培养1824小时。培养基中会出 现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。 将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。配置方法蛋白腺10g乳糖10g磷酸氢二钾2g琼脂2030g蒸憾水1000ml2%伊红水溶液20ml0. 5 %美蓝水溶液13ml储备培养基的制备先将琼脂加至900ml蒸憎水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋口 腺，混匀使之溶解，再以蒸懈水补足至1000ml,调整PH为7.27.4。趁热 用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽 灭菌器内以115°C灭菌20min,贮存于冷暗处备用。制法将蛋白陈、磷酸盐和琼脂溶解于蒸懈水中，校正PH,分装于烧瓶内，121°C高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50 55°C,加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。麦康凯培养基原理1. 全称麦康凯琼脂或是麦康凯2种用于分离鉴定的培养基，杆菌在其上呈红色或，有的菌落只是中间红 色。配置方法蛋白陈17g猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g氯化钠5g琼脂17g蒸憎水1000mL乳糖10g0.01%结晶紫水溶液10mL0. 5%中性红水5mL麦康凯-制法1将蛋口冻、陈、胆盐和氯化钠溶解于400mL中，校正pH7.2o将琼脂加入 600mL加热溶解。将两液合并,分装于烧瓶内,12KC灭菌15min备用。2临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至5055°C时，加入结晶紫和中性 红水溶液，摇匀后 倾注平板。注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。删喙试验耐喙（indol）试验有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培 养基中的色氨酸生成耐喙（靛基质），经与试剂中的对二中基氨基苯屮醛作 用，生成玫瑰眄卩朵而呈红色，是为耐喙试验阳性。LB培养基配方lg 提取物 0. oglgl. 5-2g 100mlLB培养基-LB培养基条件LB培养基-固态培养基LB固体培养基1L和液体一样，加1龍琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗 生素，并且倒好板。LB固体培养基倒板1. 配制：lOOmlLB培养基加入1.5g琼脂粉2. 抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55°C的水浴中， 待培养基温度降到35°C时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生 素失效，并充分摇匀。3. 倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下 照10-15分钟。4. 保存：用封口胶封边，并倒置放于4°C保存，一个月内使用。牛肉膏蛋白腺培养基（营养琼脂）配方10g； 3g ； 5g； 1520g； lOOOmL；制法将除琼脂以外的各成分溶解于蒸憎水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正 pH至7. 27. 4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121°C高压灭 菌 15mino注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计 数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。甲基红试验甲基红试验-化学属性甲基红（Methyl Red）试验肠杆菌科各菌属都能发酵，在分解葡萄糖过程中产生，进一步分解中，山于糖 代谢的途径不同，可产生乳酸，、醋酸和屮酸等大量酸性产物，可使培养基PH 值下降至PH4.5以下，使甲基红变红。甲基红试验-试验方法挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用培养基，培养于36±1° C或30° C （以30° C较好）3花天，从第二天起，每日取培养液lml,加甲基红指示剂1'2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黃色。迄至发现阳性或至第3 天仍为阴性、即可判定。甲基红为酸性指示剂，pH范圉为4.T6.0,其pK值为5.0。故在pH30以下， 随酸度而增强黄色，在PH5.0以上，则随碱度而增强黄色，在PH5.0或上下接 近时，可能变色不够明显，此时应延长培养，重复。尿素酶某些能产生尿素酶，分解尿素产生大量的氨，使培养基变碱。将待检菌接种于 含有尿素的培养基中，33C孵育18'24h,观察结果。红色为阳性，不变为阴 性。主要用于肠杆菌科变形、普罗威登菌属、克雷伯菌属及假单胞菌属的鉴 定。明胶液化gelaune liquefaction 指把的现象。 明胶液化-它的特征 这种能力可因细菌种类不同而有显着差异，因此很早以来就被用来作为、的一 种特征。明胶液化-适应范围、属均具有能力，而大肠杆菌就无这种液化能力。山于明胶是在热水中溶解 胶原(collagen)而成的，因此，它是山产生于体外的蛋白酶进行分解的。用 血清或蛋清清蛋白代替明胶也可看到大致相同的现象。VP试验vp试验-试验简介英VP test检验中常用的之一。某些在蛋白)冻水中能分解葡萄糖产生，丙酮酸缩合，脱竣 成乙酰屮基屮醇，后者在环境下，被空气中氧氧化为，二乙酰与蛋白腺中的生 成红色化合物，称VP ( + )反应。VP试验-试验方法1) o' Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36± 1c C培养48h,培养 液 lml 加 0" Meara 试剂(加有 0. 3%肌酸 Creatine 或肌酸Bf Creatinine 的 40% 氢氧化钠水溶液)lml,摇动试管静置于室温或36±1° C恒温箱，若 4h内不呈现伊红、即判定为阴性。亦有主张在48、50。C水浴放置2h后判定结 果者C2) Barritt氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36± 1J C培养4天、培养 液2. 5ml先加入5° Ca蔡酚(2-na-phthol)纯酒精溶液0. 6ml,再加40%氢氧 化钾水溶液0. 2ml,摇动2"5min,阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静 置于室温或36±1° C恒温箱，如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。3) 快速法：将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂 斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入蔡酚3滴，40%氢氧化钠水 溶液2滴，振动后放置5min,判定结果。不产酸的培养物不能使用。本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细 菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠 代替。生理盐水生理盐水就是0. 9%的氯化钠水溶液，因为它的渗透压值和正常人的、组织液都 是大致一样的，所以可以用作补液(不会降低和增加正常人体内钠离子浓度) 以及其他医疗用途，也常用作体外培养活组织、细胞。氯化钠：俗称盐、食盐。菌注射用水一般使用来溶解难溶于药物使用的，生理盐水就是我们静脉点滴常 用的0.9%的氯化钠注射液，外用具有一定的杀菌消毒作用。所以它们不是一 样的概念.。人体生活中所处环境的配方：需用生理盐水浓度是0. 9%o称取0.9克氯化钠，溶解在少量水中，稀释到100毫升。血琼脂平板 制法：取营养琼脂(PH7. 6),加热使其帑解待冷至45-50°C,以灭菌操作于 每100毫升加或血5-10毫升，轻轻摇匀，立即倾注于或分装，制成斜面备用。 血琼脂平板-用途用途：1. 一般棉拭子均接种此培养基。2. 尿液，脓液3. 分离标本用。胰蛋白腺胰蛋白豚水 成分 胰蛋口10g；蒸憎水lOOOmL： pH7.0制法将上述成分洛解，校正pH。分装试管，121°C高压灭菌lominoBairdParker氏培养基成分胰蛋白腺10g ；牛肉膏5g ；酵母膏lg ;丙酮酸钠10g ；甘氨酸 12g ；氯化锂(LiCl 6H20) 5g ；琼脂 20g :蒸馆水 950mL : PH7. 5。 增菌剂的配法30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚蹄酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内。 制法将各成分加到蒸憎水中，加热煮沸至完全溶解。冷至25°C,校正pH。分装 每瓶95mL, 121°C高压灭菌15mino临用时加热溶化琼脂，冷至50°C,每93mL 加入预热至50°C的卵黃亚蹄酸钾增菌剂5mL,摇匀后倾注平板。培养基应是致 密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h。血浆凝固酶血浆凝固酶-血浆凝固酶:是能使含有肝素等的人或兔血浆发生凝固的物质，致病株大多数能产生,是鉴别 有无的重要.