绵羊主要组织相容性复合体ELISA试剂盒使用步骤.docx

绵羊主要组织相容性复合体ELISA试剂盒使用步骤使用目的:本试剂盒用于测定绵羊血清、血浆及相关液体样本中主要组织相容性复合体（MHC）含量。 试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml X 1 瓶7终止液6ml x 1 瓶2酶标试剂6ml X 1 瓶8标准品(3200ng/L)0.5ml X 1 瓶3酶标包被板12孔X 8条9标准品稀释液1.5ml X 1 瓶4样品稀释液6ml x 1 瓶10说明书1份5显色剂A液6ml x 1 瓶11封板膜：2张6显色剂B液6ml x 1/瓶12密封袋1个标本要求1 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20 C保存，但应避免反复冻融2 .不能检测含 NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1 .标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。1600 ng/L5号标准品150 d的原倍标准品加入150 M标准品稀释液800 ng/L4号标准品150 d的5号标准品加入150 M标准品稀释液400 ng/L3号标准品150 d的4号标准品加入150 M标准品稀释液200 ng/L2号标准品150 d的3号标准品加入150 M标准品稀释液100 ng/L1号标准品150 d的2号标准品加入150 M标准品稀释液2 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50 M,待测样品孔中先加样品稀释液 40 M,然后再加待测样品10 M （样品最终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3 .温育:用封板膜封板后置 37 c温育30分钟。4 .配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸储水 30倍稀释后备用5 .洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶标试剂 50 4，空白孔除外。7 .温育:操作同3。8 .洗涤：操作同5。9 . 显色：每孔先加入显色剂 A50U,再加入显色剂 B50M,轻轻震荡混匀，37c避光显色 15分钟.10 终止：每孔加终止液 50口终止反应（此时蓝色立转黄色）。11 .测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。保存条件及有效期1 .试剂盒保存：；2-8 C。2 .有效期：6个月34 5