xiap及ca spase-3在年龄相关性听力减退c57bl6j小鼠初级听皮层中的表达及其意义.doc

耳鼻咽喉科学专业优秀论文 XIAP及CASPASE-3在年龄相关性听力减退C57BL/6J小鼠初级听皮层中的表达及其意义关键词：老年性耳聋 X染色体连锁凋亡抑制蛋白 初级听皮层 听觉细胞凋亡 半胱氨酸基天冬氨酸 特异性蛋白酶-3 发病机制摘要：目的： 老年性聋( presbycusis)是由于年龄增长引起的听觉器官衰老、退变而出现的双耳对称、缓慢进行性感音神经性听力减退。临床研究显示老年性聋可能是外周听觉系统和中枢系统功能联合降低衰变的结果，听力生理学的研究提示中枢的改变参与了老年性聋的发展。随着研究的深入，发现老年性聋与听觉细胞的凋亡有关。在细胞凋亡的过程中，半胱氨酸基天冬氨酸.特异性蛋白酶3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3)被认为是此过程的必经之路，是细胞凋亡中的关键酶，在细胞凋亡分子机制网络中居核心地位。而凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of apoptosis protein，IAP)是哺乳动物体内唯一的内源性凋亡抑制因子，IAP通过抑制CASPASE等多种途径而发挥抗凋亡作用。其中X染色体连锁凋亡抑制蛋白( X-Iinked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)的结构最典型，作用最强，功能最全面。本实验旨在通过测定年龄相关性听力减退小鼠听皮层XIAP、Caspase-3含量的变化及对初级听皮层细胞凋亡情况的检测，初步探讨老年性聋与听皮层细胞凋亡的关系及初级听皮层细胞凋亡与XIAP、Caspase-3之间的关系，深入认识老年性耳聋发病机制，并为老年性耳聋的临床治疗提供新的思路。 材料和方法： 1、分别选取15只2月龄C57BL/6J小鼠(15-20克)和15只10月龄C57BL/6J小鼠(50-60克)，检测两组C57BL/6J小鼠听性脑干反应(Auditory brainstem response，ABR)。 2、采用免疫组织化学法，分别染色检测两组C57BL/6J小鼠初级听皮层XIAP、Caspase-3的表达情况。 3、采用末端转移酶介导的原位缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)染色技术与透射电镜技术检测两组实验动物初级听皮层细胞凋亡状况。 结果： 1、2月龄组小鼠ABR检测2KHz、4KHz听力阈值分别为64.33±8.49dB SPL、58.33±8.80dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值分别为76.33±7.89dBSPL、74.67±5.16dB SPL，10月龄组较2月龄组听力阈值有所提高。与此同时2月龄组小鼠ABR检测8KHz、16KHz、32KHz听力阈值平均为17.33±4.95dB SPL、25.67±2.28dB SPL、36.33±7.67dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值平均为68.00±9.78dB SPL、52.67±7.53dB SPL、80.33±6.11dB SPL。两组的听力阈值在各频率都有明显差异(P<0.05)，但是在高频部分10月龄龄组听力阈值提高较低频部分更明显一些。 2、在2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目较多，经图像分析系统计数，2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为476.33±57.35，10月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为402.00±23.75，两者比较有统计学意义(P<0.01)。在2月龄组中，可见Caspase-3的表达数目略少，经图像分析系统计数，2月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为856.67±62.60，10月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为937.13±81.01，两者比较有统计学意义(P<0.01) 3、与2月龄组C57BL/6J小鼠相比，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层中细胞凋亡数目明显增多。经图像分析系统计数，2月龄组中初级听皮层中细胞凋亡数为997.60±66.62，10月龄组中初级听皮层细胞凋亡数为1978.13±101.76，两者比较有统计学意义(P<0.01)。 4、透射电镜下形态学观察，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层细胞细胞核，较多出现凋亡改变，表现为染色体破碎、边集；2月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层神经元细胞核完整，较少表现出凋亡改变 结论： 1、随年龄增长C57BL/6J小鼠的听力减退，同时C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层细胞凋亡数量增多，小鼠初级听皮层细胞的凋亡，可能是老年性耳聋的发病机制中一个重要因素。 2、随年龄增长C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层中Caspase-3的表达显著增多，凋亡抑制蛋白XIAP的表达减少，XIAP、Caspase-3的表达可能在小鼠老年性耳聋的发生、发展过程中起重要作用，它们可能参与了小鼠初级听皮层神经元的凋亡调控过程。正文内容 目的： 老年性聋( presbycusis)是由于年龄增长引起的听觉器官衰老、退变而出现的双耳对称、缓慢进行性感音神经性听力减退。临床研究显示老年性聋可能是外周听觉系统和中枢系统功能联合降低衰变的结果，听力生理学的研究提示中枢的改变参与了老年性聋的发展。随着研究的深入，发现老年性聋与听觉细胞的凋亡有关。在细胞凋亡的过程中，半胱氨酸基天冬氨酸.特异性蛋白酶3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3)被认为是此过程的必经之路，是细胞凋亡中的关键酶，在细胞凋亡分子机制网络中居核心地位。而凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of apoptosis protein，IAP)是哺乳动物体内唯一的内源性凋亡抑制因子，IAP通过抑制CASPASE等多种途径而发挥抗凋亡作用。其中X染色体连锁凋亡抑制蛋白( X-Iinked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)的结构最典型，作用最强，功能最全面。本实验旨在通过测定年龄相关性听力减退小鼠听皮层XIAP、Caspase-3含量的变化及对初级听皮层细胞凋亡情况的检测，初步探讨老年性聋与听皮层细胞凋亡的关系及初级听皮层细胞凋亡与XIAP、Caspase-3之间的关系，深入认识老年性耳聋发病机制，并为老年性耳聋的临床治疗提供新的思路。 材料和方法： 1、分别选取15只2月龄C57BL/6J小鼠(15-20克)和15只10月龄C57BL/6J小鼠(50-60克)，检测两组C57BL/6J小鼠听性脑干反应(Auditory brainstem response，ABR)。 2、采用免疫组织化学法，分别染色检测两组C57BL/6J小鼠初级听皮层XIAP、Caspase-3的表达情况。 3、采用末端转移酶介导的原位缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)染色技术与透射电镜技术检测两组实验动物初级听皮层细胞凋亡状况。 结果： 1、2月龄组小鼠ABR检测2KHz、4KHz听力阈值分别为64.33±8.49dB SPL、58.33±8.80dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值分别为76.33±7.89dBSPL、74.67±5.16dB SPL，10月龄组较2月龄组听力阈值有所提高。与此同时2月龄组小鼠ABR检测8KHz、16KHz、32KHz听力阈值平均为17.33±4.95dB SPL、25.67±2.28dB SPL、36.33±7.67dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值平均为68.00±9.78dB SPL、52.67±7.53dB SPL、80.33±6.11dB SPL。两组的听力阈值在各频率都有明显差异(P<0.05)，但是在高频部分10月龄龄组听力阈值提高较低频部分更明显一些。 2、在2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目较多，经图像分析系统计数，2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为476.33±57.35，10月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为402.00±23.75，两者比较有统计学意义(P<0.01)。在2月龄组中，可见Caspase-3的表达数目略少，经图像分析系统计数，2月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为856.67±62.60，10月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为937.13±81.01，两者比较有统计学意义(P<0.01) 3、与2月龄组C57BL/6J小鼠相比，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层中细胞凋亡数目明显增多。经图像分析系统计数，2月龄组中初级听皮层中细胞凋亡数为997.60±66.62，10月龄组中初级听皮层细胞凋亡数为1978.13±101.76，两者比较有统计学意义(P<0.01)。 4、透射电镜下形态学观察，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层细胞细胞核，较多出现凋亡改变，表现为染色体破碎、边集；2月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层神经元细胞核完整，较少表现出凋亡改变 结论： 1、随年龄增长C57BL/6J小鼠的听力减退，同时C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层细胞凋亡数量增多，小鼠初级听皮层细胞的凋亡，可能是老年性耳聋的发病机制中一个重要因素。 2、随年龄增长C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层中Caspase-3的表达显著增多，凋亡抑制蛋白XIAP的表达减少，XIAP、Caspase-3的表达可能在小鼠老年性耳聋的发生、发展过程中起重要作用，它们可能参与了小鼠初级听皮层神经元的凋亡调控过程。目的： 老年性聋( presbycusis)是由于年龄增长引起的听觉器官衰老、退变而出现的双耳对称、缓慢进行性感音神经性听力减退。临床研究显示老年性聋可能是外周听觉系统和中枢系统功能联合降低衰变的结果，听力生理学的研究提示中枢的改变参与了老年性聋的发展。随着研究的深入，发现老年性聋与听觉细胞的凋亡有关。在细胞凋亡的过程中，半胱氨酸基天冬氨酸.特异性蛋白酶3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3)被认为是此过程的必经之路，是细胞凋亡中的关键酶，在细胞凋亡分子机制网络中居核心地位。而凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of apoptosis protein，IAP)是哺乳动物体内唯一的内源性凋亡抑制因子，IAP通过抑制CASPASE等多种途径而发挥抗凋亡作用。其中X染色体连锁凋亡抑制蛋白( X-Iinked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)的结构最典型，作用最强，功能最全面。本实验旨在通过测定年龄相关性听力减退小鼠听皮层XIAP、Caspase-3含量的变化及对初级听皮层细胞凋亡情况的检测，初步探讨老年性聋与听皮层细胞凋亡的关系及初级听皮层细胞凋亡与XIAP、Caspase-3之间的关系，深入认识老年性耳聋发病机制，并为老年性耳聋的临床治疗提供新的思路。 材料和方法： 1、分别选取15只2月龄C57BL/6J小鼠(15-20克)和15只10月龄C57BL/6J小鼠(50-60克)，检测两组C57BL/6J小鼠听性脑干反应(Auditory brainstem response，ABR)。 2、采用免疫组织化学法，分别染色检测两组C57BL/6J小鼠初级听皮层XIAP、Caspase-3的表达情况。 3、采用末端转移酶介导的原位缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)染色技术与透射电镜技术检测两组实验动物初级听皮层细胞凋亡状况。 结果： 1、2月龄组小鼠ABR检测2KHz、4KHz听力阈值分别为64.33±8.49dB SPL、58.33±8.80dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值分别为76.33±7.89dBSPL、74.67±5.16dB SPL，10月龄组较2月龄组听力阈值有所提高。与此同时2月龄组小鼠ABR检测8KHz、16KHz、32KHz听力阈值平均为17.33±4.95dB SPL、25.67±2.28dB SPL、36.33±7.67dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值平均为68.00±9.78dB SPL、52.67±7.53dB SPL、80.33±6.11dB SPL。两组的听力阈值在各频率都有明显差异(P<0.05)，但是在高频部分10月龄龄组听力阈值提高较低频部分更明显一些。 2、在2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目较多，经图像分析系统计数，2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为476.33±57.35，10月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为402.00±23.75，两者比较有统计学意义(P<0.01)。在2月龄组中，可见Caspase-3的表达数目略少，经图像分析系统计数，2月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为856.67±62.60，10月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为937.13±81.01，两者比较有统计学意义(P<0.01) 3、与2月龄组C57BL/6J小鼠相比，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层中细胞凋亡数目明显增多。经图像分析系统计数，2月龄组中初级听皮层中细胞凋亡数为997.60±66.62，10月龄组中初级听皮层细胞凋亡数为1978.13±101.76，两者比较有统计学意义(P<0.01)。 4、透射电镜下形态学观察，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层细胞细胞核，较多出现凋亡改变，表现为染色体破碎、边集；2月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层神经元细胞核完整，较少表现出凋亡改变 结论： 1、随年龄增长C57BL/6J小鼠的听力减退，同时C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层细胞凋亡数量增多，小鼠初级听皮层细胞的凋亡，可能是老年性耳聋的发病机制中一个重要因素。 2、随年龄增长C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层中Caspase-3的表达显著增多，凋亡抑制蛋白XIAP的表达减少，XIAP、Caspase-3的表达可能在小鼠老年性耳聋的发生、发展过程中起重要作用，它们可能参与了小鼠初级听皮层神经元的凋亡调控过程。目的： 老年性聋( presbycusis)是由于年龄增长引起的听觉器官衰老、退变而出现的双耳对称、缓慢进行性感音神经性听力减退。临床研究显示老年性聋可能是外周听觉系统和中枢系统功能联合降低衰变的结果，听力生理学的研究提示中枢的改变参与了老年性聋的发展。随着研究的深入，发现老年性聋与听觉细胞的凋亡有关。在细胞凋亡的过程中，半胱氨酸基天冬氨酸.特异性蛋白酶3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3)被认为是此过程的必经之路，是细胞凋亡中的关键酶，在细胞凋亡分子机制网络中居核心地位。而凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of apoptosis protein，IAP)是哺乳动物体内唯一的内源性凋亡抑制因子，IAP通过抑制CASPASE等多种途径而发挥抗凋亡作用。其中X染色体连锁凋亡抑制蛋白( X-Iinked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)的结构最典型，作用最强，功能最全面。本实验旨在通过测定年龄相关性听力减退小鼠听皮层XIAP、Caspase-3含量的变化及对初级听皮层细胞凋亡情况的检测，初步探讨老年性聋与听皮层细胞凋亡的关系及初级听皮层细胞凋亡与XIAP、Caspase-3之间的关系，深入认识老年性耳聋发病机制，并为老年性耳聋的临床治疗提供新的思路。 材料和方法： 1、分别选取15只2月龄C57BL/6J小鼠(15-20克)和15只10月龄C57BL/6J小鼠(50-60克)，检测两组C57BL/6J小鼠听性脑干反应(Auditory brainstem response，ABR)。 2、采用免疫组织化学法，分别染色检测两组C57BL/6J小鼠初级听皮层XIAP、Caspase-3的表达情况。 3、采用末端转移酶介导的原位缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)染色技术与透射电镜技术检测两组实验动物初级听皮层细胞凋亡状况。 结果： 1、2月龄组小鼠ABR检测2KHz、4KHz听力阈值分别为64.33±8.49dB SPL、58.33±8.80dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值分别为76.33±7.89dBSPL、74.67±5.16dB SPL，10月龄组较2月龄组听力阈值有所提高。与此同时2月龄组小鼠ABR检测8KHz、16KHz、32KHz听力阈值平均为17.33±4.95dB SPL、25.67±2.28dB SPL、36.33±7.67dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值平均为68.00±9.78dB SPL、52.67±7.53dB SPL、80.33±6.11dB SPL。两组的听力阈值在各频率都有明显差异(P<0.05)，但是在高频部分10月龄龄组听力阈值提高较低频部分更明显一些。 2、在2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目较多，经图像分析系统计数，2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为476.33±57.35，10月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为402.00±23.75，两者比较有统计学意义(P<0.01)。在2月龄组中，可见Caspase-3的表达数目略少，经图像分析系统计数，2月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为856.67±62.60，10月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为937.13±81.01，两者比较有统计学意义(P<0.01) 3、与2月龄组C57BL/6J小鼠相比，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层中细胞凋亡数目明显增多。经图像分析系统计数，2月龄组中初级听皮层中细胞凋亡数为997.60±66.62，10月龄组中初级听皮层细胞凋亡数为1978.13±101.76，两者比较有统计学意义(P<0.01)。 4、透射电镜下形态学观察，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层细胞细胞核，较多出现凋亡改变，表现为染色体破碎、边集；2月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层神经元细胞核完整，较少表现出凋亡改变 结论： 1、随年龄增长C57BL/6J小鼠的听力减退，同时C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层细胞凋亡数量增多，小鼠初级听皮层细胞的凋亡，可能是老年性耳聋的发病机制中一个重要因素。 2、随年龄增长C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层中Caspase-3的表达显著增多，凋亡抑制蛋白XIAP的表达减少，XIAP、Caspase-3的表达可能在小鼠老年性耳聋的发生、发展过程中起重要作用，它们可能参与了小鼠初级听皮层神经元的凋亡调控过程。目的： 老年性聋( presbycusis)是由于年龄增长引起的听觉器官衰老、退变而出现的双耳对称、缓慢进行性感音神经性听力减退。临床研究显示老年性聋可能是外周听觉系统和中枢系统功能联合降低衰变的结果，听力生理学的研究提示中枢的改变参与了老年性聋的发展。随着研究的深入，发现老年性聋与听觉细胞的凋亡有关。在细胞凋亡的过程中，半胱氨酸基天冬氨酸.特异性蛋白酶3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3)被认为是此过程的必经之路，是细胞凋亡中的关键酶，在细胞凋亡分子机制网络中居核心地位。而凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of apoptosis protein，IAP)是哺乳动物体内唯一的内源性凋亡抑制因子，IAP通过抑制CASPASE等多种途径而发挥抗凋亡作用。其中X染色体连锁凋亡抑制蛋白( X-Iinked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)的结构最典型，作用最强，功能最全面。本实验旨在通过测定年龄相关性听力减退小鼠听皮层XIAP、Caspase-3含量的变化及对初级听皮层细胞凋亡情况的检测，初步探讨老年性聋与听皮层细胞凋亡的关系及初级听皮层细胞凋亡与XIAP、Caspase-3之间的关系，深入认识老年性耳聋发病机制，并为老年性耳聋的临床治疗提供新的思路。 材料和方法： 1、分别选取15只2月龄C57BL/6J小鼠(15-20克)和15只10月龄C57BL/6J小鼠(50-60克)，检测两组C57BL/6J小鼠听性脑干反应(Auditory brainstem response，ABR)。 2、采用免疫组织化学法，分别染色检测两组C57BL/6J小鼠初级听皮层XIAP、Caspase-3的表达情况。 3、采用末端转移酶介导的原位缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)染色技术与透射电镜技术检测两组实验动物初级听皮层细胞凋亡状况。 结果： 1、2月龄组小鼠ABR检测2KHz、4KHz听力阈值分别为64.33±8.49dB SPL、58.33±8.80dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值分别为76.33±7.89dBSPL、74.67±5.16dB SPL，10月龄组较2月龄组听力阈值有所提高。与此同时2月龄组小鼠ABR检测8KHz、16KHz、32KHz听力阈值平均为17.33±4.95dB SPL、25.67±2.28dB SPL、36.33±7.67dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值平均为68.00±9.78dB SPL、52.67±7.53dB SPL、80.33±6.11dB SPL。两组的听力阈值在各频率都有明显差异(P<0.05)，但是在高频部分10月龄龄组听力阈值提高较低频部分更明显一些。 2、在2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目较多，经图像分析系统计数，2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为476.33±57.35，10月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为402.00±23.75，两者比较有统计学意义(P<0.01)。在2月龄组中，可见Caspase-3的表达数目略少，经图像分析系统计数，2月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为856.67±62.60，10月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为937.13±81.01，两者比较有统计学意义(P<0.01) 3、与2月龄组C57BL/6J小鼠相比，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层中细胞凋亡数目明显增多。经图像分析系统计数，2月龄组中初级听皮层中细胞凋亡数为997.60±66.62，10月龄组中初级听皮层细胞凋亡数为1978.13±101.76，两者比较有统计学意义(P<0.01)。 4、透射电镜下形态学观察，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层细胞细胞核，较多出现凋亡改变，表现为染色体破碎、边集；2月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层神经元细胞核完整，较少表现出凋亡改变 结论： 1、随年龄增长C57BL/6J小鼠的听力减退，同时C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层细胞凋亡数量增多，小鼠初级听皮层细胞的凋亡，可能是老年性耳聋的发病机制中一个重要因素。 2、随年龄增长C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层中Caspase-3的表达显著增多，凋亡抑制蛋白XIAP的表达减少，XIAP、Caspase-3的表达可能在小鼠老年性耳聋的发生、发展过程中起重要作用，它们可能参与了小鼠初级听皮层神经元的凋亡调控过程。目的： 老年性聋( presbycusis)是由于年龄增长引起的听觉器官衰老、退变而出现的双耳对称、缓慢进行性感音神经性听力减退。临床研究显示老年性聋可能是外周听觉系统和中枢系统功能联合降低衰变的结果，听力生理学的研究提示中枢的改变参与了老年性聋的发展。随着研究的深入，发现老年性聋与听觉细胞的凋亡有关。在细胞凋亡的过程中，半胱氨酸基天冬氨酸.特异性蛋白酶3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3)被认为是此过程的必经之路，是细胞凋亡中的关键酶，在细胞凋亡分子机制网络中居核心地位。而凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of apoptosis protein，IAP)是哺乳动物体内唯一的内源性凋亡抑制因子，IAP通过抑制CASPASE等多种途径而发挥抗凋亡作用。其中X染色体连锁凋亡抑制蛋白( X-Iinked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)的结构最典型，作用最强，功能最全面。本实验旨在通过测定年龄相关性听力减退小鼠听皮层XIAP、Caspase-3含量的变化及对初级听皮层细胞凋亡情况的检测，初步探讨老年性聋与听皮层细胞凋亡的关系及初级听皮层细胞凋亡与XIAP、Caspase-3之间的关系，深入认识老年性耳聋发病机制，并为老年性耳聋的临床治疗提供新的思路。 材料和方法： 1、分别选取15只2月龄C57BL/6J小鼠(15-20克)和15只10月龄C57BL/6J小鼠(50-60克)，检测两组C57BL/6J小鼠听性脑干反应(Auditory brainstem response，ABR)。 2、采用免疫组织化学法，分别染色检测两组C57BL/6J小鼠初级听皮层XIAP、Caspase-3的表达情况。 3、采用末端转移酶介导的原位缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)染色技术与透射电镜技术检测两组实验动物初级听皮层细胞凋亡状况。 结果： 1、2月龄组小鼠ABR检测2KHz、4KHz听力阈值分别为64.33±8.49dB SPL、58.33±8.80dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值分别为76.33±7.89dBSPL、74.67±5.16dB SPL，10月龄组较2月龄组听力阈值有所提高。与此同时2月龄组小鼠ABR检测8KHz、16KHz、32KHz听力阈值平均为17.33±4.95dB SPL、25.67±2.28dB SPL、36.33±7.67dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值平均为68.00±9.78dB SPL、52.67±7.53dB SPL、80.33±6.11dB SPL。两组的听力阈值在各频率都有明显差异(P<0.05)，但是在高频部分10月龄龄组听力阈值提高较低频部分更明显一些。 2、在2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目较多，经图像分析系统计数，2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为476.33±57.35，10月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为402.00±23.75，两者比较有统计学意义(P<0.01)。在2月龄组中，可见Caspase-3的表达数目略少，经图像分析系统计数，2月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为856.67±62.60，10月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为937.13±81.01，两者比较有统计学意义(P<0.01) 3、与2月龄组C57BL/6J小鼠相比，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层中细胞凋亡数目明显增多。经图像分析系统计数，2月龄组中初级听皮层中细胞凋亡数为997.60±66.62，10月龄组中初级听皮层细胞凋亡数为1978.13±101.76，两者比较有统计学意义(P<0.01)。 4、透射电镜下形态学观察，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层细胞细胞核，较多出现凋亡改变，表现为染色体破碎、边集；2月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层神经元细胞核完整，较少表现出凋亡改变 结论： 1、随年龄增长C57BL/6J小鼠的听力减退，同时C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层细胞凋亡数量增多，小鼠初级听皮层细胞的凋亡，可能是老年性耳聋的发病机制中一个重要因素。 2、随年龄增长C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层中Caspase-3的表达显著增多，凋亡抑制蛋白XIAP的表达减少，XIAP、Caspase-3的表达可能在小鼠老年性耳聋的发生、发展过程中起重要作用，它们可能参与了小鼠初级听皮层神经元的凋亡调控过程。目的： 老年性聋( presbycusis)是由于年龄增长引起的听觉器官衰老、退变而出现的双耳对称、缓慢进行性感音神经性听力减退。临床研究显示老年性聋可能是外周听觉系统和中枢系统功能联合降低衰变的结果，听力生理学的研究提示中枢的改变参与了老年性聋的发展。随着研究的深入，发现老年性聋与听觉细胞的凋亡有关。在细胞凋亡的过程中，半胱氨酸基天冬氨酸.特异性蛋白酶3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3)被认为是此过程的必经之路，是细胞凋亡中的关键酶，在细胞凋亡分子机制网络中居核心地位。而凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of apoptosis protein，IAP)是哺乳动物体内唯一的内源性凋亡抑制因子，IAP通过抑制CASPASE等多种途径而发挥抗凋亡作用。其中X染色体连锁凋亡抑制蛋白( X-Iinked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)的结构最典型，作用最强，功能最全面。本实验旨在通过测定年龄相关性听力减退小鼠听皮层XIAP、Caspase-3含量的变化及对初级听皮层细胞凋亡情况的检测，初步探讨老年性聋与听皮层细胞凋亡的关系及初级听皮层细胞凋亡与XIAP、Caspase-3之间的关系，深入认识老年性耳聋发病机制，并为老年性耳聋的临床治疗提供新的思路。 材料和方法： 1、分别选取15只2月龄C57BL/6J小鼠(15-20克)和15只10月龄C57BL/6J小鼠(50-60克)，检测两组C57BL/6J小鼠听性脑干反应(Auditory brainstem response，ABR)。 2、采用免疫组织化学法，分别染色检测两组C57BL/6J小鼠初级听皮层XIAP、Caspase-3的表达情况。 3、采用末端转移酶介导的原位缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)染色技术与透射电镜技术检测两组实验动物初级听皮层细胞凋亡状况。 结果： 1、2月龄组小鼠ABR检测2KHz、4KHz听力阈值分别为64.33±8.49dB SPL、58.33±8.80dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值分别为76.33±7.89dBSPL、74.67±5.16dB SPL，10月龄组较2月龄组听力阈值有所提高。与此同时2月龄组小鼠ABR检测8KHz、16KHz、32KHz听力阈值平均为17.33±4.95dB SPL、25.67±2.28dB SPL、36.33±7.67dB SPL，10月龄组小鼠ABR检测相同频率听力阈值平均为68.00±9.78dB SPL、52.67±7.53dB SPL、80.33±6.11dB SPL。两组的听力阈值在各频率都有明显差异(P<0.05)，但是在高频部分10月龄龄组听力阈值提高较低频部分更明显一些。 2、在2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目较多，经图像分析系统计数，2月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为476.33±57.35，10月龄组中凋亡抑制蛋白XIAP的表达数目为402.00±23.75，两者比较有统计学意义(P<0.01)。在2月龄组中，可见Caspase-3的表达数目略少，经图像分析系统计数，2月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为856.67±62.60，10月龄组中Caspase-3表达阳性细胞个数为937.13±81.01，两者比较有统计学意义(P<0.01) 3、与2月龄组C57BL/6J小鼠相比，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层中细胞凋亡数目明显增多。经图像分析系统计数，2月龄组中初级听皮层中细胞凋亡数为997.60±66.62，10月龄组中初级听皮层细胞凋亡数为1978.13±101.76，两者比较有统计学意义(P<0.01)。 4、透射电镜下形态学观察，10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层细胞细胞核，较多出现凋亡改变，表现为染色体破碎、边集；2月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层神经元细胞核完整，较少表现出凋亡改变 结论： 1、随年龄增长C57BL/6J小鼠的听力减退，同时C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层细胞凋亡数量增多，小鼠初级听皮层细胞的凋亡，可能是老年性耳聋的发病机制中一个重要因素。 2、随年龄增长C57BL/6J小鼠大脑初级听皮层中Caspase-3的表达显著增多，凋亡抑制蛋白XIAP的表达减少，XIAP、Caspase-3的表达可能在小鼠老年性耳聋的发生、发展过程中起重要作用，它们可能参与了小鼠初级听皮层神经元的凋亡调控过程。目的： 老年性聋( presbycusis)是由于年龄增长引起的听觉器官衰老、退变而出现的双耳对称、缓慢进行性感音神经性听力减退。临床研究显示老年性聋可能是外周听觉系统和中枢系统功能联合降低衰变的结果，听力生理学的研究提示中枢的改变参与了老年性聋的发展。随着研究的深入，发现老年性聋与听觉细胞的凋亡有关。在细胞凋亡的过程中，半胱氨酸基天冬氨酸.特异性蛋白酶3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3)被认为是此过程的必经之路，是细胞凋亡中的关键酶，在细胞凋亡分子机制网络中居核心地位。而凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of apoptosis protein，IAP)是哺乳动物体内唯一的内源性凋亡抑制因子，IAP通过抑制CASPASE等多种途径而发挥抗凋亡作用。其中X染色体连锁凋亡抑制蛋白( X-Iinked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)的结构最典型，作用最强，功能最全面。本实验旨在通过测定年龄相关性听力减退小鼠听皮层XIAP、Caspase-3含量的变化及对初级听皮层细胞凋亡情况的检测，初步探讨老年性聋与听皮层细胞凋亡的关系及初级听皮层细胞凋亡与XIAP、Caspase-3之间的关系，深入认识老年性耳聋发病机制，并为老年性耳聋的临床治疗提供新的思路。 材料和方法： 1、分别选取15只2月龄C57BL/6J小鼠(15-20克)和15只10月龄C57BL/6J小鼠(50-60克)，检测两组C57BL/6J小鼠听性脑干反应(Auditory brainstem response，ABR)。 2、采用免疫组