化瘀祛痰对高尿酸血症大鼠肾脏有机阴离子转运蛋白作用-文档资料.ppt

一、国内外研究的新进展 健康人血 清尿酸值 男性 150380 mol/L 女性 100300 mol/L 原发性高尿 酸血症 高嘌呤食物 饮酒、剧烈 运动会一过 性上升在 通常饮食下 12周内重 复测定23 次,若持续超 416mol/L 嘌呤代谢紊乱 尿酸排泄减少 流行病学调查 高 尿酸血 症 痛风 结石 糖尿病 高血压 冠心病 高脂血症 肾功能不全 终末期肾脏病 肾功能进展的独立危险因素 西药治疗 寻求新的途径寻求新的途径 来有效治疗高来有效治疗高 尿酸血症尿酸血症 肾间质 明显损害 苯溴 马隆 别嘌 呤醇 西药 肾脏对尿酸盐的排泄过程 肾小球 100%滤过 大部分在近端 肾小管被重吸收 少部分又被重 新分泌入肾小管腔 滤过重吸收分泌 原发性高尿酸血症主要病因 尿酸排泄减少 占90% 主要原因 重吸收增加 分泌减少 肾脏有机阴离子转运蛋白OAT1、OAT3在 肾小管对尿酸的分泌中起着关键的作用 尿酸盐为极性分子，不能自由通过细胞膜，因此其在近曲肾小 管的重吸收和分泌过程有赖于离子通道。目前已发现有机阴离 子OAT1和OAT3均参与了近曲肾小管对尿酸盐的转运，负责将尿 酸从管周毛细血管转运到肾小管上皮细胞内，完成尿酸分泌的 第一步。 化瘀祛痰法与尿酸排泄的机制思考 临床及实验研究 机制研究思路 化瘀祛痰复方 临床取得较好疗效 何立群教授申请得 到了国家知识产权 局发明专利 车前子利水涤痰 留行子通络逐瘀 白芥子化痰散结 冬葵子活血利水 化瘀通络 祛痰降浊 中医化瘀祛痰法组 成的复方可以促进 尿酸排泄，推测化 瘀祛痰机制与促进 肾小管对尿酸的分 泌有关。本课题在 分子水平证实这一 构想 OAT1 OAT3 化瘀祛痰法 体内实验 课题思路 目的：以“化瘀祛痰”为治法的中药复方矢志方在有效调节高尿 酸血症大鼠尿酸代谢的基础上，探索其促进尿酸排泄 的主要分子机制是否通过调控肾脏有机阴离子转运蛋白 OAT1、OAT3的蛋白表达而促进肾小管对尿酸的分泌。 肾小管对尿酸分泌 的分子机制 正常组 1 1 模型组 2 2 中药组 3 3 动物实验及分组 苯溴马隆组 4 4 酵母粉灌胃合 并氧嗪酸钾腹 腔注射两周 治疗两周 二、研究工作主要内容 病理 状况 常规透射电镜 血清黄嘌呤氧化酶（XOD）活性 OAT1蛋白表达 OAT3蛋白表达 及酶活性 各组生化 UA、SCR、BUN、血脂、尿2 MG 观察内容 肾组织病理HE染色 有机 阴离 子转 运蛋 白 组别 n SUA（umol/l） 正常组 10 治疗前 64.7±5.4 治疗后 71.9±13.6 模型组 7 治疗前 233.2±23.9 治疗后 267.6±26.3 # 中药组 8 治疗前 198.9±20.2 治疗后 148.6±10.4 * 苯溴马隆组 7 治疗前 208.3±14.0 治疗后 153.1±10.8 * 各组大鼠尿酸（SUA）含量（umol/l）的比较 vs 正常组(治疗前),P0.05 1.结 果 各组大鼠尿尿酸及24h尿酸总排泄量的的比较 组别 n 24h尿量(ml) UUA（umol/l） 总排泄量（umol/24h） 正常组 10 10.0±0.78 204.06±17.4 2.05±0.23 模型组 7 13.0±0.65# 331.96±9.94# 4.31±0.22# 中药组 8 16.4±0.56* 427.44±23.7* 7.03±0.44* 苯溴马隆组 7 17.1±0.67* 426.27±5.47* 7.28±0.25* # vs正常组，P0.05 提示化瘀祛痰复方可以有效降低高尿酸血症模型大鼠血尿酸的 水平并可促进尿尿酸的排泄。为本课题从肾小管尿酸分泌角度 研究化瘀祛痰复方促进尿酸排泄的分子机制奠定基础。 结 果 各组大鼠肾功能（BUN、SCR）含量的比较 组别 n SCR（umol/l） BUN(mmol/l) 正常组 10 54.9 ±10.54 5.97 ±1.36 模型组 7 55.4±7.34 7.00±1.38 中药组 8 60.62±12.07 6.85±0. 71 苯溴马隆组 7 62.71±15.95 6.62±0. 88 提示该模型属于原发性高尿酸血症早期的病理阶段，未造成肾 组织严重损伤，同时提示该种造模方法导致大鼠肾功能异常的 时间规律尚值得深入研究。 因此该模型尚不能证实化瘀祛痰复方是否对大鼠肾功能具有保 护作用。 结 果 各组大鼠血清黄嘌呤氧化酶活力（XOD）的比较 # vs正常组，P0.05 组别 n XOD（U/l ） 正常组 10 10.27±1.16 模型组 7 13.60±0.53# 中药组 8 11.56±0.56* 苯溴马隆组 7 12.24±0.50* 本实验资料表明化瘀祛痰复方可能是通过抑制XOD的生物合成 ，从而降低血尿酸的生成； 而苯溴马隆组与模型组比较也有统计学差异，目前研究表明苯 溴马隆主要是通过抑制近端肾小管对尿酸的重吸收而促进尿酸 的排泄，尚无足够证据证明其具有抑制XOD活性的作用，故而 其在本实验中对XOD活性的影响尚值得进一步探讨。 结 果 各组大鼠胆固醇（TC）及甘油三脂（TG）含量的比较 组别 n TC（mmol/l） TG（mmol/l ） 正常组 10 1.31±0.26 0.59±0.195 模型组 7 1.39±0.31 0.50±0.95 中药组 8 1.34±0.34 0.46±0.11 苯溴马隆组 7 1.49±0.31 0.47±0.39 原发性高尿酸血症导致血脂异常的机制及时间规律尚未明确 ，本实验结果提示大鼠在造模后血脂水平未伴随血尿酸水平 升高而异常。推测是否因该种造模方法时间短暂尚未导致大 鼠血脂异常，还是其他原因尚值得更深入的研究。 结 果 各组大鼠尿2 -MG含量的比较 组别 n 2 -MG(ug/ml) 正常组 10 38.66±27.03 模型组 7 66.59±36.78 中药组 8 49.37±32.92 苯溴马隆组 7 36.73±32.58 大鼠经造模用药后，血尿酸增高，但尿2-MG却未出现明显 的升高,而本实验病理结果提示局部偶见肾小管上皮细胞肿胀 及炎细胞浸润，推测可能因造模时间短暂，大鼠肾脏代偿功 能强大，而未造成对尿2-MG的影响，但是否影响与小管功 能相关的其他指标尚需要进一步深入研究。 结 果 肾组织HE染色 1 2 3 4 5 6 ×200 光镜下正常组大鼠肾组织结构正常(图 1,2)； 模型组大鼠偶见局部肾近曲小管上皮细 胞肿胀，空泡变性，肾间质充血，炎细 胞浸润，肾小球未见明显异常(3,4)； 中药组(图5)及苯溴马隆组(图6)肾小球无 明显变化，肾间质炎细胞浸润程度减轻 ，肾近曲小管上皮细胞肿胀及空泡变性 减轻。 ×6000 常规透射电镜下观察显示，正常组大鼠肾小 管上皮细胞线粒体丰富,呈椭圆或棒形,嵴结 构清晰,肾小管上皮微绒毛结构清晰完整,肾 小球滤过膜结构完整清晰。（图1,2） 模型组可见到部分肾小管上皮细胞肿胀，空 泡变性，线粒体肿胀，表面微绒毛脱失。(图 3，4) 中药组（图5）及苯溴马隆组（图6）肾小管 上皮细胞肿胀和空泡变性减轻，线粒体肿胀 减轻，表面微绒毛无脱失。 病理结果分析 虽然造模后大鼠肾小球形态未见异常，肾功 能也未见异常，肾小管功能指标尿2-MG也 未见异常，但造模后肾组织已有轻微损伤， 但尚未影响相关生化指标。 提示高尿酸血症早期也存在肾组织病理损伤 ，病变持续发展将可能出现尿酸性肾病的病 理阶段，提示单纯性高尿酸血症也应该及早 干预以减少病理损害。 同时表明化瘀祛痰复方在降低血尿酸的同时 还可以改善高尿酸血症模型大鼠肾小管间质 病理损害的程度。 rOAT1蛋白表达 ×200 rOAT3蛋白表达 ×200 各组大鼠rOAT1蛋白表达量的比较 # vs正常组，P0.05 组别 n Area（UM2） 正常组 10 626.97±19.21 模型组 7 293.61±55.60# 中药组 8 512.79±21.17* 苯溴马隆组 7 519.44±21.42* 各组大鼠rOAT3蛋白表达量的比较 组别 n Area（UM2） 正常组 10 822.63±18.25 模型组 7 627.38±13.32 # 中药组 8 730.50±24.80 * 苯溴马隆组 7 725.15±10.73 * # vs正常组，P0.05 rOAT1/rOAT3蛋白表达 OAT1(61KD) Actin (43KD) 正常组模型组苯溴马隆组中药组 正常组模型组苯溴马隆组中药组 OAT3(59KD) Actin (43KD) 结论 应用酵母粉灌胃合并氧嗪酸钾腹腔注射 的方法成功建立了高尿酸血症大鼠模型 ，更接近于人类原发性高尿酸血症的发 病模式，目前该种方法在国内外尚未见 报道。 该种高尿酸血症模型对于单纯性血尿酸 升高的原发性高尿酸血症的研究更为适 用。 化瘀祛痰复方可降低血尿酸水平并促进 尿尿酸的排泄。 结论 化瘀祛痰可降低血清黄嘌呤氧化酶活性，可 能为其降低血尿酸水平的机制之一。 化瘀祛痰可上调肾脏尿酸转运蛋白rOAT1、 rOAT3的表达，从而促进近端小管对尿酸的分 泌而降低血尿酸。也即证实肾脏尿酸代谢调 节的机制与中医化瘀祛痰治法相关。为研发 治疗高尿酸血症的新药提供了理论依据。 *29 LOGO 单击单击 此处编辑处编辑 母版标题样标题样 式 单击 此处编辑 母版副标题样 式 敬请提出宝贵意见