2细胞培养-细胞培养用液及培养基-PPT文档资料.ppt

主要内容,培养用液 培养基（液）,主要内容,培养用液 培养基（液）,培养用液,细胞培养时，除需要培养基，还需要大量的液体，包括 水 盐溶液 消化液 缓冲液 维生素液等,3,培养用液,水 细胞培养所必须的成分（吸收与代谢） 维持细胞形态、调节渗透压及PH 细胞培养对水质的要求极高,培养用液,水 自来水 蒸馏水 （三蒸） 离子交换水,培养用液,水,培养用液,水 超纯水 将水中的导电介质几乎完全去除，又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程度的水。电阻率大于18M*cm，或接近18.3M*cm极限值。,培养用液,平衡盐溶液（BSS） 组织细胞培养基中常用的基本液体。 功能 维持渗透压、调节PH、供给细胞生存所需能量及无机离子成分。 用途 合成培养基（液）的基础液及用于洗涤组织、细胞等,培养用液,平衡盐溶液,9,培养用液,消化液-用途 分散组织、细胞 使细胞脱离附着底物,培养用液,消化液-成分 胰蛋白酶 二乙烯四乙酸二钠（EDTA） 胶原酶溶液,培养用液,消化液-胰蛋白酶 胰蛋白酶： 从动物胰脏分离的一种水解酶 功能： 使细胞间的蛋白质水解、细胞分散 配置比例： 1:125 或 1:250,培养用液,消化液-胰蛋白酶 注意事项 配置胰蛋白酶消化液时应采用不含Ca2+、Mg2+和血清的液体 使用时，一旦细胞分散后，立即用适量含血清的培养基终止消化反应,培养用液,消化液-EDTA EDTA是一种化学螯合剂，能螯合Ca2+、Mg2+而使细胞分离，对细胞毒性较小。 工作浓度： 0.02%,培养用液,消化液-EDTA 注意事项 需用不含离子的平衡盐缓冲液溶解 与胰酶联合使用可提高消化效率 EDTA不能被血清中和，消化后应彻底 清洗,培养基（液）,维持体外细胞生存和生长的基本溶液，是组织细胞培养最重要的条件 分类 天然培养基 合成培养基,培养基（液）-天然培养基,取自动物体液或从动物的组织中分离提取 优点 营养成分丰富，培养效果良好 缺点 成分复杂，来源受限,培养基（液）-天然培养基,类型 生物性液体（血清） 组织浸液（胚胎浸液） 凝固剂（血浆） ,培养基（液）-天然培养基,血清 最常用的天然培养基 促进细胞生长繁殖、粘附并中和usu 常用的血清为小牛血清和胎牛血清,培养基（液）-天然培养基,血清-使用注意事项 使用前需灭活 -20保存，避免反复冻融 优质血清外观为透明、无溶血、淡黄色液体、无沉淀，灭活后颜色略深 保证无菌，且球蛋白含量越低者质量越佳,培养基（液）-天然培养基,血清-鉴定方法 细胞集落形成率 连续传代培养 生长曲线法,培养基（液）-天然培养基,血浆 可支持培养组织块，且还供给细胞生长的营养物质，但易发生液化。 常用禽类血浆 小于一岁的雄性鸡类 该类血浆钙水平恒定，激素含量少，易于采集，整个采集过程需要注意无菌,培养基（液）-合成培养基,对细胞体内生存环境中各种已知物质在体外人工条件下模拟 为细胞提供了一个近似体内生存环境、又便于控制和标准化的体外生存环境。,培养基（液）-合成培养基,成分 氨基酸-L型氨基酸 谷氨酰胺 维生素 糖类 无机离子 其他成分,培养基（液）-合成培养基,常用培养基 199培养液 Eagle培养液 RPMI-1640 Ham培养液,培养基（液）-合成培养基,常用培养基 199培养液 在Earle生理盐水的基础上添加各种添加成分。因配置比较复杂，现已较少使用。,培养基（液）-合成培养基,常用培养基 Eagle培养 Eagle等人在该培养基的基础上，将13种氨基酸和8种维生素浓度调整至接近细胞内含量水平，制成最低必须培养基（Eagles minimum essential media, MEM） MEM为目前常用的培养基,培养基（液）-合成培养基,常用培养基 Eagle培养 BME MEM 高糖型- DMEM 低糖型,生长快 粘附差,培养基（液）-合成培养基,常用培养基 RPMI-1640 最初用于培养小鼠白血病细胞，故该培养基特别适合悬浮细胞生长。 RPMI-1640不但适于肿瘤细胞亦适用于正常细胞。 目前应用最广泛的培养基,培养基（液）-无血清培养基,为什么要使用无血清培养基？ 血清成分复杂，干扰实验结果 血清含有毒性物质、抑制性物质、影响某些细胞功能,30,培养基（液）-无血清培养基,无血清培养基-缺点 通用性较差 细胞增殖缓慢、成本较高 可能失去血清的一些保护性作用,31,培养基（液）-无血清培养基,无血清培养基-配置方法,32,辅加成分,培养机制 营养成分 酶抑制剂,