最新：戊肝诊断试剂在医院及疾控的应用-北京万泰生物药业股份有限公司技术工程师-崔伟-文档资料.ppt

一、戊型肝炎相关概念及特点 戊型肝炎由戊型肝炎病毒（HEV）引起，HEV是 单股正链RNA病毒,属于嗜肝病毒科.约占临床 散发型肝炎的1520%，戊肝在病毒性肝炎中 病死率最高，孕妇病死率可高达20%。 传播途径:主要经胃肠道传播，常通过水源和 食源暴发或流行,丙球蛋白免疫无效 临床症状:厌食、乏力、恶心、巩膜黄染、右 上腹部不适、呕吐、肝脏肿大等.其临床症状 与甲肝类似。 1 1 戊肝不同临床阶段的HEV感染指标 临床阶段 ALTRNAIgMIgG 戊肝急性期 + 近期隐性感染 -+ 戊肝恢复期 -+ 既往感染 -+ 2 2 HEV-IgM是良好的近期感染标志物 戊肝病程中各感染指标的变化过程 清楚显示，HEV-IgM抗体是一个良好 的戊肝病毒近期感染指标。 3 3 二.优良的诊断试剂是检测结果 准确可靠的保证 优质的抗原是检测试剂的关键！优质的抗原是检测试剂的关键！ 4 4 关键: 构象抗原 Ø现有试剂以线性表位为主的重组蛋白或 合成肽作为抗原，未能模拟出HEV最主要 的构象依赖性抗原表位。 Ø优质的抗原是检测试剂的关键! 5 5 2.1 HEV基因 ORF1主要编码与病毒RNA复制有关的非结构蛋白， ORF2为HEV的主要结构基因编码区,编码病毒衣壳蛋白， ORF3基因编码产物pORF3为磷蛋白。 6 6 试剂的关键E2抗原的发现及其特征 1998年，用大肠杆菌 表达HEV结构蛋白ORF2 的一个片段(E2)时发 现，该蛋白可以自发 形成二聚体，并且二 聚体蛋白对戊肝恢复 期血清有极强的反应 性，这一反应性随着 二聚体的解聚而消失 。Western Blot (See: J Med Virol, 2001,64:125-132) 单体 二聚 体 SDS-PAGE 7 7 E2抗原反应性：对戊肝急性期血清和多年后的恢复期血 清有明显的反应，恢复期血清的反应性集中在二聚体上 。 急性期血清(10例)恢复期血清(8例) 二聚体E2 单 体E2 8 8 2.2 具有动物模型的诊断试剂(恒河猴HEV感染模型) 感染时间（周） F9 HEVHEV感染、发病与抗体发生过程感染、发病与抗体发生过程 9 9 感染时间（周） N2 HEVHEV感染、发病与抗体发生过程感染、发病与抗体发生过程 1010 感染时间（周） F4 HEVHEV感染、发病与抗体发生过程感染、发病与抗体发生过程 1111 献血员中HEV检测：E2-IgM(+)、 E2-IgG(-) 、GL- IgM和IgG均(-)的献血员206血清HEV RNA基因分型 I型 IV型 IV型 II型 III型 1212 206血清可感染猴子 1313 5278 构象性表 位 线性表 位 猴HEV感染过程中各项指标消长分析 1414 三.HEV ELISA 试剂 与 临床急性肝炎诊断 1515 3.1 人们对戊型肝炎的重视逐渐增强 新的中华人民共和国食品安全法实施 条例实施条例对食品安全法中较为原 则的制度作了具体规定 ：食品从业者应 按章检查戊型病毒型肝炎和甲型病毒性 肝炎，同时取消乙肝的检测。员工入职 新生入校等健康体检也取消了乙肝的检 测项目。 1616 食品从业人员的健康体检 新试行条例规定食品从业人员的健康体 检取消了HBV的检测项目，新增了HAV-M 和HEV-M两种检测项目。IgM抗体的检测 目的主要是避免近期感染对食品安全的 威胁。（包括显性感染和隐性感染） 颁布了戊型病毒性肝炎诊疗规范， 用以明确HEV的诊断及治疗。人们对戊型 肝炎的重视逐渐增强。 1717 3.2 万泰HEV试剂与其他国内外 厂家的试剂比较 1818 3.2.1灵敏度和特异度综合评价 - 复旦大学公共卫生学院 指标 正常人群急性戊肝 约登指数 (%) 阴性数/ 检测 数 特异度 （%） 阳性数 /检测 数 灵敏度 （%） WT IgM273/273 100.047/4897.997.9 GL IgM264/273 96.735/4872.969.6 GL IgG233/273 85.445/4893.879.6 1919 E2 IgM +-Total GL-IgM +29029 -286290 Total5762119 临床非甲非乙急性肝炎中HEV IgM检出 E2 IgM检出率=100% GL IgM 检出率=50.8% ( (香港卫生署公共卫生实验中心香港卫生署公共卫生实验中心) ) 2020 E2 IgM与GL IgM在急性肝炎中检出符合情况 GL IgM E2 IgM 合计 7065135 29361390 合计99426525 其中58例(89%) 抗HAV IgM阳 性 (复旦大学公共卫生学院) 2121 临床阴转血清的评价 新疆戊肝感染10年后血清抗HEV抗体检 出 1992年全国流调新疆和田HE暴发后34年HEV IgG感染率为 11.79%(Genelabs) 地方病通报 2002，17（3） ：14 2222 两种试剂对WHO戊肝标准血清的检测比较 2323 3.2.2实验室数据 PCR+标 本总 数 万泰 检 出 SKH 22份22份20份（1份阴 性灰区） 阳性 S/C. O均 8.456.89 2424 表1：两种试剂对PCR阳性的检验 万泰SKH荧荧光PCR套式PCR 编编号C.O=0.265C.O=0.253 112.7641.487 + + 142.8291.165 + + 162.9711.026 + + 172.3431.797 + + 172.3431.797 + + 271.5921.218 + + 292.0260.471 + + 333.1541.68 + + 372.8541.423 + + 403.0811.819 + + 422.8371.935 + + 522.1640.103 + + 552.9941.461 + + 592.8511.239 + + 612.9691.752 + + 632.4581.082 + + 680.8630.089 + + 722.8531.601 + + 733.221.726 + + 741.7911.098 + + 741.7911.098 + + 773.2971.816 + + 2525 3.2.3实验室数据 PCR+标本总 数 万泰检出BGD检出 16份15份（1份阴 性灰） 5份（3份阴性灰 区） 检出百分率 93.8% 31.3% 2626 标本编号万泰 A值（C.O=0.266）BGD A值（C.O=0.150）PCR背景+ / P31.0420.021+ WX11.0950.131+ WX111.9620.441+ WX121.5030.387+ WX131.6420.108+ WX141.9390.523+ WX150.1270.011+ WX170.8910.026+ WX180.4090.489+ WX190.7480.126+ WX221.0930.020+ WX240.9910.076+ WX301.1890.016+ WX322.9870.045+ WX620.8040.027+ WX640.4570.192+ M261.0041.084/ M280.1520.009/ M292.0040.439/ M302.0450.897/ M311.7910.347/ M410.0150.012/ P11.7120.311/ 表2：两种试剂对PCR阳性的检验 2727 HEV的诊断指标 (依据戊型病毒性肝炎诊疗规范） HEV-M抗体阳性 HEV-G 抗体阳转或者浓度四倍以上升高 HEV PCR 阳性 以上标准符合其一即可作为戊肝诊断的指标， 同时满足两项即可确诊。通常HEV-M阳性且HEV-G 阳性即可诊断（个别情况需动态观察）。 *中华临床感染病杂志年月第卷第期 2828 科学为本，关注健康 2929