HIV筛查实验室标准操作程序(HIV筛查实验室作业指导书).doc

HIV筛查实验室作业指导书手册编号： *- 01版 次 号： 第 1 版持 有 人： *医院二00八年七月一日*医院文件编号：SXX*YY- 01-0第 1 页 共 1 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：目录文件编制人：张* 文件审核发人：卢* 标题 所在页面HIV样品接收、登记和处理 P3HIV抗体筛查检测方法和步骤 P4雷勃 MK3酶标仪使用 P5P6雷勃 MK3酶标仪维护 P7雷勃 MK2洗板机使用 P8P10雷勃 MK2洗板机维护 P11HIV筛查实验室质量控制 P12P17HIV抗体结果解释与报告 P18HIV筛查实验室保密程序 P19HIV检测数据的记录与保存 P20P21HIV追踪与处理 P22P23废弃物处理和消毒 P24HIV筛查实验室安全防护 P25420X电热恒温培养箱 P26低速离心机 P27P28 HIV筛查检测操作规程及安全防护制度 P29P40附件：样品登记本作业指导书 血清库登记本作业指导书 废弃物处理登记本作业指导书 仪器设备使用登记本作业指导书 检测人员健康档案 意外事故登记本作业指导书 设备（冰箱、恒温箱）温度登记本作业指导书 差错登记本作业指导书 *医院文件编号：SXX*YY- 010第 1 页 共 1 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：前言文件编制人：张* 文件审核发人：卢*为加强艾滋病检测工作的规范化、科学化管理和质量控制，确保检测结果的准确性和可靠性，保证艾滋病检测实验室安全，及时有效地发现HIV感染者和上报疫情，参照全国艾滋病检测技术规范【2009】版，结合我县疾病控制中心的实际情况，特制定本作业指导书。本作业指导书包括以下内容：样品的采集、接收、登记和处理；HIV抗体检测的方法和程序；仪器的操作维护和校正；结果的解释与报告；实验室的清理与消毒；保密制度；追踪与处理；HIV抗体筛查实验室检测原始记录；HIV抗体筛查报告；HIV抗体复检化验单；HIV抗体检测数季报表等。本作业指导书由院办公室张*起草、检验科主任卢*签发之日起执行。本作业指导书为HIV抗体筛查实验室作业指导书，仅供本中心内部使用。 *医院 20080701 *医院文件编号：SXX*YY- 0101第 1 页 共 1 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：HIV样品接收、登记和处理编制依据：全国艾滋病检测技术规范【2009年版】文件编制人：张* 文件审核发人：卢*1. 目的确保HIV样品安全有效地到达实验室。2. 适用范围本作业指导书适用于HIV实验室安全地接收样品。3. 职责HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行。4. 步骤4.1 HIV样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。4.2 核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告有关领导和专家。4.3 检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要将样品情况立即通知送样人。4.4 打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。4.5 接收样品时应对样品进行登记。4.6 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20以下，短期（1 周）内进行检测的样品可存放于2-8*医院文件编号：SXX*YY- 0102第 1 页 共 1 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：HIV抗体筛查检测方法和步骤编制依据：全国艾滋病检测技术规范【2009年版】文件编制人：张* 文件审核发人：卢*1. 目的规范HIV抗体筛查检测方法和步骤，确保检测结果准确。2. 适用范围本作业指导书适用于HIV抗体检测。3. 职责HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行。2. 内容：4.1 试验前仪器、材料的准备4.1.1 恒温培养箱 酶标仪 微量振荡器 洗板机 定时钟4.1.2 HIV抗体检测ELISA试剂盒4.1.3 050ul，50250ul移液器各一把，配备相应干燥洁净吸嘴1个/人份4.1.4 500ml烧杯1只，500ml量筒一个4.2 试验开始前将试剂和样品放置在室温(1823)4.3 试验步骤：4.3.1 检查培养箱温度是否调至37 (见培养箱使用 )4.3.2检查试剂盒是否在有效期内使用,检查试剂文号、批号、有无卫生部批检合格封签。4.3.3 烧杯内装5000mg/l次氯酸钠消毒液。4.3.4 从试剂盒中取出反应板，按试剂盒内说明书操作及判断结果。洗板用洗板机操作具体见洗板机操作 注意事项：结果判断用酶标仪操作具体见酶标仪操作 。 *医院文件编号：SXX*YY- 0103第 1 页 共 2 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：雷勃 MK3酶标仪使用编制依据：雷勃 MK3酶标仪使用说明书文件编制人：张* 文件审核发人：卢*1. 目的：维护酶标仪的正常工作，规范酶标仪的使用与保养。2. 适用范围：适用于雷勃 MK2酶标仪3. 职责：HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行。4. 仪器操作：4.1 开机：将酶标仪后部的电源开关打开，仪器自检完毕显示“准备就绪”，如果联机电脑是开机状态，此时酶标仪显示“正在由计算机控制”，酶标仪开机完毕。4.2 点击电脑桌面上“酶免”图标选择用户名，输入密码，进入酶标仪控制软件。4.3 酶标仪软件操作4.3.1 首次使用应在“工具” “测试项目”“增加”中填写相应的“代码”和“名称”均为“HIV”，“处理方法”设置为“定性计算1”，然后按“确认”。并在“工具” “试剂”“增加”中填写相应的试剂信息（批号等信息），然后按“确认”。4.3.2 依次选择“常用设置”“测量规划” “样本设置”中选择需要的参数，在“测量试剂”中选择合适的试剂，最后点设置，依次类推。并在“测量1”对波长进行设置，选“450NM”。4.3.3 需要插入步骤的选“选项” “插入步骤”“震动步骤”，根据需要选择。4.3.4 板子布局根据试验中板子的布局,先选定所要确定的标本类型，然后在对应的板孔位置左键点击，例如A1孔是空白，先选择标本类型为空白，再左键点击A1孔就可以了，定好的布局在试剂盒不变的情况下可以存为模版，以后可以在模版的下拉框直接选择就可以使用了，确定板子的布局与实际情况相符，将板子放在样品盘上，可以点击“测量”*医院文件编号：SXX*YY- 0103第 2 页 共 2 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：雷勃 MK3酶标仪使用编制依据：雷勃 MK3酶标仪使用说明书文件编制人：张* 文件审核发人：卢*酶标仪会自动测量各孔的SOD值并判断结果。4.3.5 样品的录入 在“常用设置” “测试样本”可以录入对应标本的性别、年龄、送检科室、样品来源、送检医生、标本等。结果查询及打印在“文件” “打开”中可以根据日期和酶标板号批量打印报告。4.5 质量控制5.1 质控血清的设定在工具质控维护中输入质控血清的靶值、SD值、批号、浓度、测量方法等信息。6 注意事项6.1 保养6.1.21 为保证仪器持续的稳定性和准确性，应避免干扰光学系统的任何部件。光路调校错误会影响测量结果。6.1.2保持光学系统的清洁，以确保正常功能和结果的准确，应避免任何液体流入仪器内部，并防尘、防止其它外源性物资，不要用手指摸透镜表面、虑光镜、光电监测器。6.1.3仪器的常规清洁应该关闭仪器并拔掉插头，使用一次性手套，用一次性擦布沾水或温和去污剂，清洁仪器外部、导轨和板架。6.1.4 仪器的工作环境温度应在1030，相对湿度不超过80，存储环境温度应该在040，仪器应放在没有让阳光直晒、表面平坦且空间足够的工作台上。6.2 仪器使用完毕要及时关机。*医院文件编号：SXX*YY- 0104第 1 页 共 1 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：雷勃 MK3酶标仪维护编制依据：雷勃 MK3酶标仪使用说明书文件编制人：张* 文件审核发人：卢*医院文件编号：SXX*YY- 0105第 1 页 共 3 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：雷勃 MK2洗板机使用编制依据：仪器使用说明书文件编制人：张* 文件审核发人：卢*1. 目的：维护洗板机的正常工作，规范洗板机的使用与保养。2. 适用范围：雷勃 MK2洗板机3. 职责：HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行4. 操作步骤4.1设置 在关机状态下，按照试剂盒说明书设置洗涤卡程序，并将设置好程序的卡插入卡位。4.2开机 打开仪器电源开关，等仪器初始化结束后仪器显示就绪，可以进行下一步操作。4.3 冲洗 第一次按“Prime”键等待仪器自检完成。4.4 运行根据酶标板的数量设置洗板的行数(数字键代表酶标板的行数) ，放置好酶标板后，按“Start”按钮开始洗板。4.5 关机4.5.1 日常关机 最后一次洗板结束后将电源开关置于OFF位。 *医院文件编号：SXX*YY- 0105第 1 页 共 3 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：雷勃 MK2洗板机使用编制依据：仪器使用说明书文件编制人：张* 文件审核发人：卢*4.5.2 长期关机 将长时间不使用洗板机时，先用蒸馏水冲洗一遍整个系统，再进行日常关机；保持液体瓶干燥，以免清洗液中的缓冲盐类结晶而堵塞清洗头。3. 仪器使用注意事项6.1 操作前 必须严格按照仪器安装说明安装仪器，保证正确连接管路，以免出现渗漏。洗板机长期不用后再度使用时，需要预洗整个系统四次。6.2操作中6.2.1 按下运行键前，需确认: 已经装上正确清洗头。 酶标板已正确放置 已选择适当的程序及参数值。 6.2.2 应及时倾倒废液。 6.2.3 如果仪器表面有生物危险物资污染，用中性消毒液清洁。 6.2.4 保持滑道的清洁干燥，避免堵塞；若有液体溅出，及时擦干。 *医院文件编号：SXX*YY- 0105第 1 页 共 3 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：雷勃 MK2洗板机使用编制依据：仪器使用说明书文件编制人：张* 文件审核发人：卢*6.2.5 在洗板过程中，如需仪器停止运行，请按键盘上的复位键，不要用手或物体强制仪器停止运行。4. 仪器的保养 安放和运行仪器时避免阳光直射，且避开热源，以免影响仪器寿命。 经常用软布和中性清洗液擦洗仪器；仪器使用时及时擦去泼在滑道上的液体，以免造成机械堵塞。 *医院文件编号：SXX*YY- 0106第 1 页 共 1 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：雷勃 MK2洗板机维护编制依据：洗板机规程文件编制人：张* 文件审核发人：卢* *医院文件编号：SXX*YY- 0108第 1 页 共 6 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：HIV筛查实验室质量控制 编制依据：全国艾滋病检测技术规范【2009年版】文件编制人：张* 文件审核发人：卢*1. 目的： 建立艾滋病实验室质量控制,保证HIV实验室检验结果的准确性。2适用范围：HIV实验室所有样品筛查和复查的质量控制。3. HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行4 质量控制（QC）4.1 质控血清的制备和保存（以ELISA 试验检测HIV 抗体为例）在每次实验中必须包含有内部对照质控血清和外部对照质控血清。内部对照质控血清指试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。内部对照是质量控制的基础。每一次检测必须使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异而由实验室设置的一套对照血清，包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界值（Cut-off）的2-3 倍为宜。4.1.1 外部对照质控血清的制备HIV 抗体阳性和阴性血清，56 30min 灭活，3000r/min，离心15min。弱阳性对照可以用HIV 抗体阴性血清梯度稀释HIV 抗体强阳性血清并标定后得到。按一年使用量配制（可加入不影响检测结果的防腐剂）用0.2m 滤膜过滤除菌。4.1.2 外部对照质控血清的保存4.1.2.1 按一周实验用量分装、分类、标记、封口、-20冻存于非自动除霜冰箱中。4.1.2.2 外部对照血清不可反复冻融，一旦融化后应该存放28，供一周内使用。4.1.3 外部对照质控血清的使用每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的重复性和稳定性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。4.1.4 外部对照质控物的质量要求质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（cv20%，并且质控物的成分应在稳定状态中。质控物应无菌，并不含有影响ELISA 反应的防腐剂。 *医院文件编号：SXX*YY- 0108第2 页 共6 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：HIV筛查实验室质量控制编制依据：全国艾滋病检测技术规范【2009年版】文件编制人：张* 文件审核发人：卢*4.2 质控图的建立及应用（以ELISA 试验检测HIV 抗体为例）最常用的质控图是Levey-Jennings 质控图，使用累计和技术或趋势分析技术的图形可提供系统偏移和漂移的状况。4.2.1 建立质控图参数外部对照质控物的平均值和标准差应建立在实验室常规使用方法对质控物重复测定的基础上。一般采用在不同批次检测取得至少20 个数据；如果仅做少量批次的检测，也至少做5 个批次的检测，每个批次中不少于4 个质控物测定结果，以建立一个临时性的平均值和标准差，当达到20 批次数据后，替代临时性的平均值和标准差。4.2.1.1 算术平均值（）： 代表一组S/CO 值的平均值。为了统计学上有显著性意义，应该采用至少20 次(天)所测得的外部对照质控血清S/CO 值结果计算出平均值。4.2.1.2 标准差(s)：是描述样品与均数之间离散程度的一个指标，是与对照质控血清S/CO 值均值有关的预期范围。一组S/CO 值的标准差以s 表示。4.2.1.3 变异系数(cv)：是反映各次S/CO 值相对于均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度。4.2.1.4 控制限：由实验室根据对质控物检测结果的平均值和标准差来确定。例如12S 质控规则的控制限为外部对照S/CO 平均值加减2 个标准差；13S 质控规则的控制限为外部对照S/CO 平均值加减3 个标准差。4.2.2 绘制质控图质控图是把检测数据与已确定的（计算出的）“控制限”进行比较的图，包含一条中心横线和其上、下两条平行的控制线，并按时间顺序点入本实验室每次试验质控血清的测定值。 *医院文件编号：SXX*YY- 0108第 3 页 共 6 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：HIV筛查实验室质量控制编制依据：全国艾滋病检测技术规范【2009年版】文件编制人：张* 文件审核发人：卢*质控图的绘制步骤：4.2.2.1 在常规条件下，对同一批血清连续测定20 次（天）或以上，获得一组S/CO 值，求均数( )和标准差(s), 超出2s 或3s 的数据不应删除。4.2.2.2 将均值( )和标准差(s)分别在质控框架图中标示出来。以S/CO 值作纵座标(Y 轴)，每一次(天)试验作横座标(x 轴)，绘制质控图。4.2.2.3 从第21 次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。4.2.3 质控规则及使用实验室在报告实验结果之前必须评价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定。目前许多质控规则已被采用，常用的是12S 和13S 规则。4.2.3.1 告警（12S）：当外部对照的S/CO 值超出x +2s 范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S 做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。4.2.3.2 失控（13S）：当外部对照的S/CO 值超出x +3s 范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部对照滴度下降造成。4.2.3.3 位移：连续几次（35 次）外部对照S/CO 值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。4.2.3.4 趋势：连续几次（57 次）外部对照S/CO 值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。 *医院文件编号：SXX*YY- 0108第 4 页 共 6 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：HIV筛查实验室质量控制编制依据：全国艾滋病检测技术规范【2009年版】文件编制人：张* 文件审核发人：卢*质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，即具有高的检出分析误差的能力，同时应具有较低的假失控概率。考察试验系统的可靠性应采用多标准质控方案，多规则质控方法能提高误差检出，并具有低的假失控概率。其要点为：出现一次2s 范围的变化时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。出现下列情况时，应暂停检测查找原因：出现一次3s 范围的变化、连续两次出现同一方向2s 范围的变化、连续四次出现同一方向的1s 范围的变化、连续10 次结果都在1s 范围内，但落在均值线的同一侧。4.2.4 质控图的分析及失控处理实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。当质控已有计划并恰当地执行时，要求可靠的平均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。当出现失控时进行如重复质控测定或重新分析新的质控物不是最有效的方法，必须找出问题原因，找出解除故障的方法，并消除原因，防止将来出现同样的问题。4.2.5 绘制和分析质控图的要点4.2.5.1 要在常规条件下建立质控图参数，用S/CO 比值绘制质控图。对同一批质控物连续测定得到20 个数据，求均值( )和标准差(s), 超出2s 或3s 的数据不应删除。4.2.5.2 由专人负责建立质控图，每月定期召开质控分析会，讨论本月的质量控制情况。 *医院文件编号：SXX*YY- 0108第 5页 共 6 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：HIV筛查实验室质量控制编制依据：全国艾滋病检测技术规范【2009年版】文件编制人：张* 文件审核发人：卢*4.2.5.3 建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒，更换不同厂家的试剂盒后，必须重新绘制质控图。改用新批号试剂盒也应重新制作质控图。使用新批号或不同厂家的试剂盒必须在质控图上注明使用日期。4.2.5.4 发现质控结果失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告。4.2.5.5 使用新批次的外部对照质控物时，必须重新绘制质控图。变异系数(cv)小于20，表示外部对照处于稳定状态。4.3 “即刻法”质控“即刻法”质控方法是在对同一批外部质控血清连续测定3 次后，即可对第3 次检验结果进行质控。具体计算方法如下：4.3.1 将质控血清的测定值从小到大排列：x1，x2，x3xn(x1 为最小值，xn 为最大值)。 *医院文件编号：SXX*YY- 0108第 6页 共 6 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：HIV筛查实验室质量控制编制依据：全国艾滋病检测技术规范【2009年版】文件编制人：张* 文件审核发人：卢*4.3.4 将. SI上限、SI下限与. SI值表中的数字比较。SI值表（1）当SI上限和SI下限<n2s时表示处于控制范围内，可以继续测定。继续重复以上各项计算。（2）当. SI上限和. SI下限有一值处于. n 2sn3s值之间时说明该值在. 2s 3s范围，处于“告警”状态。（3）当SI上限和SI下限有一值> n 3s值时说明该值已在3s范围之外，属“失控”。数值处于“告警”和“失控”状态应舍去，需重新测定该质控血清和病人样品。舍去的只是失控的这次数值，其它测定值仍可继续使用。. *医院文件编号：SXX*YY- 0109第 1页 共 1 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：HIV抗体检测结果解释和报告编制依据：全国艾滋病检测技术规范【2009年版】文件编制人：张* 文件审核发人：卢*1.目的：及时准确的报告HIV检测结果、追踪和处理HIV抗体阳性者，做好医学、法律、生活等各方面的解释工作。2. 适用范围： HIV实验室对检测结果的报告与解释。3. 职责：HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行4.内容 筛查试验阳性不能出阳性报告，可出具“HIV 抗体待复查”报告。 对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实验室在10个工作日内出具HIV 抗体阴性报告。 对筛查呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV 抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认。 如需送上级实验室进行复测或确认，需要填写“HIV 抗体复测送检单”，经1 名检验人员和1 名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实验室。 对筛查阴性和阳性者，均需做好检测后咨询。 *医院文件编号：SXX*YY- 0110第 1页 共 1 页作业指导书第1版 第 1 次修订颁布时间：20080701标题：HIV抗体检测筛查实验室保密制度编制依据：全国艾滋病检测技术规范【2009年版】文件编制人：张* 文件审核发人：卢*1. 目的:检测人员做好保密工作2. 适用范围:HIV处筛实验室检测过程和结果3. 职责：HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行4. *医院HIV抗体检测筛查实验室由专人负责妥善保存各种实验记录、感染者档案，不得擅自修改和销毁；严格遵守保密制度，未经*医院主任本人书面通知不得向本中心任何与HIV抗体检测筛查实验室无关人员及领导提供任何情况；未经省级卫生行政主管部门许可，*医院不得向无关人员或单位提供任何情况。5. *医院HIV抗体检测筛查实验室检测的阳性结果不是最终结果，应及时作出进一步确认，本筛查实验室不能出具HIV抗体阳性的结果报告，更不能告知受检者本人。6. *医院HIV抗体检测筛查实验室得到浙江省HIV抗体检测确认实验室确认的以机密级向本筛查实验室出具的阳性结果后，应立即报告绍兴县卫生局，在对阳性者告知检测结果时要先做好法律、医学、生活等方面的咨询。7. 所有经确认的阳性标本，包括在实验室内留存的标本，应送浙江省疾病预防控制中心HIV抗体确认中心保存，不得擅自处理。标本保存时间最少5年。 检验原始记录与保存 文件编号：SXX*YY- 0111*医院HIV抗体筛查实验室检 验 原 始 记 录HIV抗体筛查第 页 共 页 编号：一、 准备实验日期：样品来源：样品名称：样品性状： 样品编号：检验依据：所用试剂：试剂厂家： 产品批号：有效期至： 实验室温度：培养箱温度：洗板机型号： 雷勃 MK2 洗板机产地： 酶标仪型号： 雷勃 MK3酶标仪产地:： 将试剂盒从冰箱中取出，置室温平衡30分钟。将所需数量的反应条孔排列于反应板上。二、 操作1. 反应板每孔加稀释液 ul。2. 本次实验待测标本作业指导书 个，每孔加标本血清 ul 设阴性对照 孔，每孔加阴性对照血清 ul。设阳性对照 孔，每孔加阳性对照血清 ul。设外部质控 孔 ，每孔加质控血清 ul。用胶纸封板后放培养箱 分钟。3. 将浓缩洗涤液稀释 倍：取浓缩洗涤液 ml，加蒸溜水至 ml混匀。开启洗板机电源预热。4. 反应板从培养箱中取出，用洗板机洗板：每孔加洗涤液400ul，浸泡 秒后吸出，如此洗涤 遍,将反应板在吸水纸上拍干。5. 每孔加显色剂A、B各50ul，轻拍混匀，胶纸封板后放培养箱 分钟。开启酶标仪预热。6. 取出反应板，每孔加终止液 ul混匀，中止反应。7. 用酶标仪比色：比色波长450nm,参比波长620nm。比色结果见附表。 （样品排列及实验结果见背面） *医院HIV抗体筛查实验室检 验 原 始 记 录HIV抗体筛查第 页 共 页 编号：三、 实验结果 123456789101112ABCDEFGHNC： NCx:PC1: PCx:Cutoff:结论： 检测者： 复核者： 年 月 日 年 月 日