经典的免疫学反应.ppt
经典的免疫学反应,经典的抗原抗体反应有 以下四种主要类型,颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的凝集反应(agglutination) 可溶性抗原与相应抗体结合所发个的沉淀反应(precipitation) 抗原抗体结合后激活补体所致的补体结合反应(complement fixation reaction)和细胞溶解反应(cytolysis) 细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应 (neutralization),凝集反应,细菌和红细胞等颗粒性抗原，当与相应抗体特异结合后，在适量电解质存在的条件下，可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象称为凝集反应。 早在1896年，Widal就利用伤寒病人血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象成功地诊断伤寒病。 1900年Landsteiner在特异血凝现象的基础上发现了人类ABO血型，于1930年获得诺贝尔生理学和医学奖。,一个世纪以来，这些经典的血清学方法一直沿用至今，并继续造福于人类。 根据凝集反应的原理，以后又发展建立了，各种间接凝集试验、间接凝集抑制试验以及固相免疫吸附血凝试验等新方法。,沉淀反应,沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在液相中特异结合后，形成的免疫复合物受电解质影响出现的沉淀现象。 旱在1897年，Kmus发现鼠疫杆菌的培养滤液能与相应抗血清发生沉淀反应。 沉淀反应这一经典抗原抗体反应，经过不断改进和发展，至今仍然是生物医学研究领域和临床检验工作中常用的、简便可靠的一种免疫学试验方法。 就广义而言，目前广泛应用的各种高度灵敏和特异的标记免疫检测技术，如免疫荧光、放射免疫分析及酶免疫分析技术等，也都是在沉淀反应的基础上发展建立起来的。,免疫扩散,免疫扩散,补体结合反应和细胞溶解反应,溶血试验是将抗红细胞的抗体(通常称为溶血素)与相应的红细胞混合，当补体存在时，红细胞即被溶解。 此种特异性溶血现象肉眼可见，广泛用于血清总补体活性测定及单个补体组分功能活性的检测。 此外，溶血试验常用于补体结合试验中作为指标系统。,补体结合实验,补体结合实验（CFT）的原理是根据补体的作用无特异性，能与任何一种抗原抗体复合物结合：但当抗原与抗体不相对应时，补体则不被结合而游离存在。 此时如在上述反应系统中加入绵羊红细胞(抗原)和溶血素(抗体)系统，即可与游离的补体结合而出现溶血现象。,因此，绵羊红细胞和溶血素是CFT的指示系统(亦称溶血系统)。试验结果根据溶血现象是否产生，即可得知检测系统中有无相应的抗原或抗体存在。,中和反应,中和试验是免疫学和病毒学中常用的一种抗原抗体反应试验方法，用以测定抗体中和病毒感染性或细菌毒素的生物学效应。 凡能与病毒结合，使其失去感染力的抗体又称中和抗体。能与细菌外毒素结合，中和其毒性作用的抗体称为抗毒素。,中和试验可以在敏感动物体内(包括鸡胚)，体外组织(细胞)培养或试管内进行。观察特异性抗体能否保护易感的试验动物死亡；能否抑制病毒的细胞病变效应或中和毒素对细胞的毒作用；以及测定抗体的其他生物学效应。,免疫电泳技术,免疫电泳技术是将琼脂电泳与免疫扩散相结合的一种常用的免疫学实验方法，此项技术由于具有抗原抗体反应的高度特异性，电泳分离技术的快速，灵敏和高分辨力，以及实验设备和操作简便等优点，至今仍作为免疫学的一种基本技术，广泛用于科学研究和临床实验诊断。 数十年来，根据不同的实验目的和要求，在经典的免疫电泳技术基础上，又衍生出对流免疫电泳、火箭电泳、交叉免疫电泳及免疫固定电极等许多新技术和新方法出现。,免疫电泳,免疫电泳(immunoelectrophoresis，IEP)是将区带电泳与双向免疫扩散相结合的一种免疫化学分析技术。 将蛋白质抗原在琼脂平板上进行电泳，使不同的抗原成分因所带电荷、分子量及构型不同，电泳迁移率各异而彼此分离。 然后在与电泳方向平行的琼脂槽内加入相应抗体进行双向免疫分散。 分离成区带的各种抗原成分与相应抗体在琼脂中扩散后相遇，在二者比例合适处形成肉眼可见的弧形沉淀线。,根据沉淀线的数量、位置和形状，与已知的标准(或正常)抗原抗体形成的沉淀线比较，即可对样品中所含成分及其性质进行分析、鉴定。,对流免疫电泳,对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis, CIEP) 是将双向免疫扩散与电泳相结合的一种技术。 在pH8.6的缓冲液中，蛋白质抗原带负电荷向正极泳动；而抗体大部分属于Ig，由于分子量大，暴露的极性基团较少，在离子琼脂中泳动缓慢，同时受电渗作用的影响向负极泳动 。 琼脂是一种酸性物质，在碱性溶液中带负电荷，而与它接触的溶液带正电荷，因此液体向负极泳动，产生电渗) 在抗原抗体相遇的最适比例处形成乳白色沉淀线。,由于电场的作用，限制了抗原、抗体的自由扩散，而使其定向泳动，因而增加了试验的灵敏度，并缩短反应时间。,火箭免疫电泳,火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis，RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。 电泳时，琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。 当抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰，峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关。 因此，当琼脂中抗体浓度固定时，以不同稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标，抗原浓度为横坐标，绘制标准曲线。,根据样品的沉淀峰长度即可计算出待测抗原的含量；反之，当琼脂中抗原浓度固定时，便可测定待测抗体的含量。,
