干化学、尿流式仪及显微镜尿液沉渣检查的关系 ppt课件.ppt

向兄弟单位学习,干化学、尿流式仪 及显微镜尿沉渣检查的关系,三零一医院,丛玉隆,尿液沉查镜检历史,Ismail（1000年前），宏观在对尿液进行分析 Bright（1827年）首次发现管型 Bird（1854年）Purdy（1900年）进一步证明了尿沉渣检查的临床价值 Addis（1948年）建立了尿沉渣物定量检查法 美国NCCLS（1991年）提出了“尿常规分析”的推荐标准（GP16-P）；经过四年实践以提出了“尿液分析和尿液标本采集、转运和保存”（1995年）的标准文件（GP-16A） 日本JCCLS（1995年）制定了“尿沉渣检查标准） 中华医学会第一次全国临床检验学术会议（1983年会议）提出了尿常规检查标准化问题 中华医学会检验分会临床血液学检验与尿液分析专题研讨会提出了我国尿沉渣的推荐标准（1995年武夷山会议）。,尿常规检查的重要意义,泌尿系统疾病的诊断和疗效观察,其它系统疾病的诊断,职业病的辅助诊断,安全用药的监护,尿液常规检查项目,沉渣显微镜检,化学成份分析,外观检查,尿液沉渣显微镜检查,尿沉渣显微镜检的重要意义,尿沉渣检查标准化,标准化尿沉渣检查方法,标准化尿沉渣检查方法,标准沉渣检查系统,自动充液仪检查,倒置显微镜检查法,Censide 检查系统,干化学红、白细胞检测与镜检的关系,干化学尿红、白细胞检查与镜检关系,尿沉渣显微镜检查是诊断泌尿系统疾病的金标准，对诊断、鉴别、予后分析具有重要的意义，迄今为止，尚无一台仪器能完全替代显微镜检查。,9,解放军总医院,10,解放军总医院,干化学尿红、白细胞检查与镜检关系,尿沉渣的标准化、规范化 操作规程为：尿液10ml，离心5分钟，相对离心力（RCF）为400 g，剩余沉淀为0.2ml，混匀后吸沉淀物约20l，滴入玻片上，用18mm×18mm盖玻片覆盖后镜检。先用低倍镜（10×10）观察全片，高倍镜（10×40）仔细观察，细胞检查10个高倍视野（HP），管型检查20个低倍视野（LP）。报告方式：个细胞/HP，个管型/LP。 美国NCCLS文件，推荐使用一次性尿检测板，并用XXul报告，国内专家亦认为应逐步在我国施行个/ul的报告。,干化学尿红、白细胞检查与镜检关系,规范的尿沉渣镜检在常规工作的可行性与筛选 规范的尿沉渣镜检是保证尿液分析结果准确的基础，原则上每个尿液标本都采用这种方法检查，但目前化验室人员少，工作量大，每天有几十甚至于几百个标本需要及时报告，要使用规范的镜检及时地发出报告是困难的，最好寻找一个简单、快速的方法进行过筛，即将完全正常的标本筛去后，对异常的标本进行规范性检查。干化学尿液分析仪提供了过筛的手段。,11,解放军总医院,干化学尿红、白细胞检查与镜检关系,干化学尿红、白细胞筛选的概念与原则 所谓过筛就是在仪器、试带符合实验要求，检验人员相对稳定的条件下制定的一个标准，达到此标准可视为尿沉渣成份在正常范围内，可免去进一步显微镜检查。如果一个标本经过干化学、镜检两种方法检查，干化学结果符合过筛标准，镜检结果在正常范围内，说明过筛是正确的。干化学结果不符合过筛标准，镜检结果也异常，也说明过筛标准是正确的。干化学结果异常，镜检结果正常视为假阳性，反之干化学结果正常，镜检结果异常视为假阴性。,12,解放军总医院,镜检与试条同时检测尿RBC对比,试条,镜检,0 03 35 610 1120 2140 40,(个/ul) (个/ul),Neg 1409 81 10 1124 577 4 25 94 671 198 88 50 73 163 273 263 35 1 150 1 46 68 173 282 59 17 250 1 20 33 67 139 223 256,13,解放总医院,13,解放军总医院,不同正常筛选标准的RBC测定结果对比,分析仪,筛选标准,镜检异常,镜检正常,RBC35/HP,RBC02/HP,敏感性(%) 特异性(%) 假阳性(%) 假阴性(%),正常 (RBC阴性),0 1490 100 35.8 55.1 0,异常 (RBCu/l),2183 2676,正常 (RBC10u/l),4 3191 99.8 76.6 30.9 0.13,异常 (RBC25u/l,2179 975,正常 (RBC25u/l),294 3862 86.5 92.7 13.8 7.1,异常 (RBC50u/l),1889 304,14,解放军总医院,镜检与试 条同时检测尿 WBC对比,镜检 0 0-3 0-5 3-5 6-10 11-20 20,Neg 2638 614 112 51,25 346 1070 244 249 132 43 15,100 5* 32 30 85 104 129 49,500 0 8* 5* 7 42 82 234,23(蛋白阳性) 9（RBC阳性） 7（Nit阳性） 3（单核,淋巴）,9(蛋白阳性) 3(Nit阳性) 5(RBC阳性) 2(淋巴),2(蛋白阳性) 1(Nit阳性),20,3,(个/ul),(个/ul),试 条,以试条WBC neg为筛选标准,镜 检,异常(WBC510/HP) 正常(WBC为05/HP),试条,正常(WBC为阴性),74(10) 3364,异常(WBC25/ul）,1171 1740,16,解放军总医院,以WBC25/ul为标准筛选镜下管型,WBC阴性,WBC25/ul,01 25 610 10 01 25 610 10（个/LP）,透明管型,108 40 8 11 53 15 5 8,颗粒管型 15 21 3 6 14 11 2 1,细胞管型 11 5 12 4,腊样管型 6 1,17,解放军总医院,以RBC25/ul为标准筛选镜下管型,RBC10/ul,RBC025/ul,01 25 610 10 01 25 610 10（个/LP）,透明管型,83 28 3 2 78 27 10 17,颗粒管型 9 7 2 20 25 5 5,细胞管型 5 2 18 7,腊样管型 2 4 1,18,解放军总医院,以蛋白75mg/dl为标准筛选镜下管型,蛋白25mg/dl,蛋白75mg/dl,01 25 610 10 01 25 610 10（个/LP）,透明管型,106 13 4 55 42 9 19,颗粒管型 9 6 2 20 26 3 7,细胞管型 7 5 16 4,腊样管型,19,解放军总医院,以WBC25/ul RBC25/ul 蛋白75mg/dl 为标准筛选镜下管型,WBC阴性,蛋白25mg/dl,01 25 610 10（个/LP）,透明管型,29 0 0 0,颗粒管型 0 0 0 0,细胞管型 0 0 0 0,腊样管型 0 0 0 0,RBC10/ul,20,解放军总医院,干化学法检测白细胞红细胞存在的问题,干化学法检查尿内白细胞的原理是基于粒细胞浆内有酯酶可作用于试带中的吲哚酚酯，释放吲哚酚与重氮盐反应形成缩合物，其颜色与细胞的多少成比例。此法只能测定粒细胞，不与淋巴细胞反应。尿液中污染甲醛或高浓度胆红质或使用某些药物（如呋喃咀啶），可产生假阳性；尿蛋白5g/L或尿液中含有大剂量先锋或庆大霉素等药物时，可使结果出现假阴性。 引起红细胞试验假阳性：肌红蛋白，易热酶 引起红细胞试验假阴性：维生素C,21,解放军总医院,干化学尿红、白细胞检查与镜检关系,细胞破坏造成的“假阳性”现象： 所谓“假阳性”、“假阴性”是以显微镜检查为基础的。由于干化学是检测细胞胞浆内涵物来确定细胞的有无.在实际工作中可能存在下列问题：由于尿液在膀胱贮存时间过长，导致白细胞破坏，酯酶释放到尿液中，造成干化学阳性，镜检阴性的所谓“假阳性”现象。肾病患者，红细胞在肾脏或泌尿道破坏，或尿比重过低、尿PH偏高均易造成经细胞破坏血红蛋白释放尿中，造成所谓红细胞干化学检查的“假阳性”现象。,690例标本尿干化学红细胞检查与统检结果分析,23,解放军总医院,镜检,镜检,干化学检查,单克隆潜血板,阳性105例 (细胞破坏引起“假阳性”),加热煮沸后 干化学检查,全部为阴性 (易热酶引起假阳性),690例,阳性360例,阴性330例,阴性330例 (符合),阳性0例,阳性142例 (符合),阴性218例,阴性113例,干化学过筛应用范围的局限性(1),肾科及泌尿科病人尿液不适合于干化学过筛显微镜检查。即无论干化学结果如何，均应做显微镜检查。 镜检结石、结晶、肿瘤细胞作为诊断依据或观察疗效时，不宜用干化学方法过筛。 由于干化学分析干扰因素较多，且不可避免的有一定的假阴性率，因此要结合临床表现判断结果，决不可只看干化学分析，忽视镜检。 尿液的外观（特别是颜色、浊度）与尿沉渣有一定相关关系，当尿液外观异常时，应注意显微镜检查。,24,解放军总医院,干化学过筛应用范围的局限性(2),干化学试带的质量、稳定性及质量控制与过筛的准确性密切相关。 仪器及干化学试带一定要符合要求：仪器的正常运转和试带质量合格取得是实验结果的基本保证。笔者制定上述标准使用的是BM公司的Midiitron尿液分析仪及Combur10TestM配套试带.每个实验室使用过筛标准时，首先必须做对照观察（所用干化学试带与显微镜对比），确认仪器试带的敏感性与特异性是否符合过筛标准的要求。,25,解放军总医院,尿流式细胞仪 与镜检关系,流式细胞仪的原理与分类,流式细胞仪,通用型,专用型,科研型,临床型,网织红细胞分析仪,血细胞分析仪,尿沉渣分析仪,导电率,尿导电率,前向散射光,流式细胞测定法,荧光,电阻抗测定,电阻抗信号,前向散射光强度,荧光脉冲宽度,荧光强度,前向散射光脉冲宽度,细胞体积,细胞长度,染色部分长度,染色强度,细胞大小,电阻抗,红细胞,散射图,酵母细胞 结晶 小圆上皮 病理管型,细菌,白细胞,上皮细胞,管型,前向散射光直方图,前向散射光直方图,红细胞参数,白细胞参数,氩激光,尿样品,电极,电阻信号放大器,稀释,导电率感应器,荧光信号放大器,染色,鞘液,前向散射光信号放大器,流式细胞仪测定原理简图,流式细胞仪原理,尿流式细胞仪与镜检的关系,UF可提供客观的形态学指标，尤其对球性血尿和非球性血尿的鉴别,UF可直接进行定量检测，简单、快速,尿流式细胞仪红、白细胞检查仍是镜检筛选,干化学尿与流式“筛选”之比较,尿流式较镜检的优势与局限性,再 见,尿沉渣检查的重要意义,检查内容：上皮细胞、血细胞、管型及结晶 临床意义：,上皮细胞,扁平上皮,大圆上皮,尾型上皮,小圆上皮,血细胞,白细胞及脓细胞,红细胞,尿沉渣检查的重要意义,临床意义：,管型,透明管型,细胞管型,颗粒管型,蜡样管型,白细胞管型,红细胞管型,上皮细胞管型,细粒管型,粗粒管型,脂肪管型,肾衰竭管型,尿沉渣检查的重要意义,临床意义：,结晶,磺胺结晶,碱性结晶,酸性结晶,亮氨酸及络氨酸结晶,三价磷酸盐,尿酸铵结晶,非晶型磷酸盐,尿酸结晶,草酸钙结晶,非晶型磷酸盐,尿沉渣镜检进展,1.采用干涉、相差、偏振光、扫描及透射电镜鉴别管型,2.有用活体染色及细胞化学染色识别各种管型,3.应用单克隆抗体技术识别各种细胞,尿沉渣镜检进展,尿中红细胞形态,尿中白细胞形态,尿沉渣镜检进展,S 染色各种上皮细胞形态,尿沉渣镜检进展,S 染色各种管型形态,尿沉渣镜检进展,S 染色各种管型形态,复检条件,一 REVIEW 标记,计数错误 总数 40,000 电导率错误 电导率 5ms/cm或 38ms/cm 界标错误 RBC-Fl-DWSD 40 ch 或 红细胞数 2.5/l且其 Fsc 200ch 或 红细胞数 15 /l时未溶解的RBC% 20%,二 菌尿,UF在鉴别血尿来源中的应用,301医院用此仪器对随机95例肾小球性和非肾小球性出血病人的尿红细胞形态进行了观察，以临床诊断肾小球病变（肾活检）为标准，以此仪器检测尿非均一性红细胞为肾小球病变诊断依据，结果：,敏感性：100，特异性：78.2,UF在鉴别血尿来源中的应用,急性肾小球性肾炎病人尿液测定结果,UF在鉴别血尿来源中的应用,慢性肾小球性肾炎病人尿液测定结果,UF在鉴别血尿来源中的应用,前列腺癌病人尿液测定结果,UF在鉴别血尿来源中的应用,肾结石病人尿液测定结果,UF在鉴别血尿来源中的应用,慢性膀胱炎病人尿液测定结果,尿沉渣成分 主要临床意义 红细胞 月经、过度运动、各种肾，泌尿系统如外伤 、 肾 小管炎症、结石、结核、肿瘤、急性肾小球肾炎 白细胞 各种肾损害、泌尿道感染、肾盂肾炎 上皮细胞 肾小管上皮细胞 肾实质肾小管受损 鳞状上皮细胞 正常人或污染 管型 宽型 严重肾疾病 肾上皮细胞 肾小管退化、变性 脂肪 肾病综合征 颗粒或蜡样 肾实质损害 透明 酸性尿-含高盐，多为病理性 细菌 泌尿道感染 脂肪体(卵圆小体) 肾病综合征,各种尿沉渣成分主要临床意义,尿沉渣染色的临床意义,SM染色： 管型的鉴别 巴氏染色： 识别细胞 甲苯胺兰： 观察管型与核结构 过氧化酶： 鉴别粒细胞与上皮细胞管型 非特异酯酶：识别单核细胞 油红O、苏丹：脂肪变性细胞 酸性磷酸酶：区分肾上皮细胞与前列腺细胞,方法 白细胞 红细胞 普通载玻片不加盖玻片法 15.0 17.0 载玻片加盖玻片法 12.0 15.0 改良Neubauer 10.2 9.9 Fast-Read-10R定量板法 9.3 7.0,四种常见尿沉渣检查法CV%值比较,单克隆抗体免疫过氧化物酶染色检查特异细胞,抗体名称 对应的特异细胞 FMC 10 粒细胞 FMC 32 单核细胞 AMDT 4 辅助/支持T淋巴细胞 Huly-m8 细胞毒/抑制T淋巴细胞 URO 1 肾小球/输尿管上皮细胞 URO 3 近曲小管上皮细胞 URO 5 亨利襻/远曲小管/集合管/输尿管 URO 7 亨利襻 URO 9 输尿管,急性肾小管坏死、急性间质性肾炎、新月形肾炎尿中各种细胞数量及鉴别,细胞数/ml 急性肾小管坏死 急性间质性肾炎 新月形肾炎 总细胞数 42500±6000 633300±28800 138400±61600 粒细胞数 6600±1100 596700±28700 46500±25000 单核细胞 1500±800 6800±600 16300±8400 CD4淋巴细胞 40±30 2300±1200 7300±4700 CD8淋巴细胞 100±100 2000±1100 4100±1800 肾小球上皮细胞 500±400 1500±900 11800±3800 近曲小管上皮细胞 17700±4200 12200±6200 29800±14000 远曲小管/ 集合管上皮细胞 7400±1700 15200±8500 8400±4200 亨利襻 4500±2300 1800±900 4600±3200 输尿管上皮 3400±700 3600±1600 4100±1500,操作规程为：尿液10ml，离心5分钟，相对离心力（RCF）为400 g，剩余沉淀为0.2ml，混匀后吸沉淀物约20l，滴入玻片上，用18mm×18mm盖玻片覆盖后镜检。先用低倍镜（10×10）观察全片，高倍镜（10×40）仔细观察，细胞检查10个高倍视野（HP），管型检查20个低倍视野（LP）。报告方式：个细胞/HP，个管型/LP。 美国NCCLS文件，推荐使用一次性尿检测板，并用XXul报告，国内专家亦认为应逐步在我国施行个/ul的报告。,尿沉渣的标准化、规范化,