张玉梅《医学微生物学》微生物实验1-zhang68.ppt

实验四,一、 录像：肠道杆菌的检测 二、 肠道杆菌的生化反应 三、 抗酸染色及TB菌落 四、钩端螺旋体,二、 肠道杆菌的生化反应,（一）SS琼脂培养基 （肠道致病菌的强选择鉴别培养基） 1 、原理：乳糖发酵 2、成分（胆硫乳琼脂） 乳糖 中性红 （6.88.0 ） 胆酸盐,酸,变红,碱,变黄,非致病菌,致病菌,3、结果,大肠杆菌,伤寒杆菌,菌落红色,非致病菌,菌落黄色,致病菌,（二）糖发酵实验,1、单糖发酵（液体培养基）,糖 酚红 6.88.0 倒置U型管 细菌,酸：,变黄,碱：,变红,2、双糖发酵,乳糖、酚红的固体培养基,葡萄糖、酚红的半固体培养基,2、双糖发酵,大肠杆菌 副伤寒杆菌 + - + +,斜面,底层,斜面,底层,（三） 蛋白质分解产物,1、H2S 试验,含硫氨基酸、醋酸铅的半固体培养基,PbS黑色沉淀,乙型副伤寒杆菌,+,-,2、吲哚试验,含色氨酸的液体培养基,大肠杆菌,乙型副伤寒杆菌,+,-,吲哚试剂,三、抗酸染色,结核杆菌细胞壁脂质含量较高，特别是其中大量分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合，可抵抗盐酸酒精脱色，故菌体呈红色,1、原理：,初染：石炭酸复红810分钟，水洗 脱色：3%盐酸酒精30秒，水洗 复染：吕氏美兰1分钟，水洗,（5）吸水纸吸干，油镜观察,2、步骤： （1）涂片 （2）干燥 （3）固定 （4）染色,3、结果： 抗酸菌 红色 非抗酸菌及细胞 蓝色,结核分枝杆菌 抗酸染色 10 ×100,观察要点,1、抗酸染色阳性，呈红色 2、细长略带弯曲杆菌，末端可呈分枝状 3、排列方式 4、标本中可见有痰细胞,四、钩端螺旋体,钩端螺旋体 镀银染色 1000,观察要点,标本染色为镀银染色，颜色比较特殊 菌体一端或两端弯曲成钩状 菌体可呈C形、S形或问号形状,画图,结核杆菌 钩端螺旋体,