体液蛋白质检验.ppt
体液蛋白质的检测,了解血浆蛋白质组成、功能及分类。 熟悉一些重要血浆蛋白质。 掌握疾病时血浆蛋白质变化 掌握体液蛋白质测定,免疫功能: IgA、IgG、IgM、C3、C4、Kap、Lam、IgG subclasses 1-4、IgE、C1抑制物 肾脏功能: 白蛋白、转铁蛋白、IgG 、 a1-微球蛋白、 B2-微球蛋白、a2-巨球蛋白、 Kap-轻链、Lam-轻链、Cystatin C 炎症: CRP、a1-酸性糖蛋白、 触珠蛋白、a1-抗胰蛋白酶、铜兰蛋白、纤维蛋白原、SAA 类风湿性疾病: RF、ASL、CRP、ADNaseB 心血管疾病: ApoA-I、ApoB、ApoA II、ApoE、Lp(a)、肌红蛋白、纤维蛋白原、hsCRP 营养监测: 前白蛋白、白蛋白、视黄醇结合蛋白、转铁蛋白、铁蛋白 出 / 凝血疾病: 纤维蛋白原、AT3、纤溶酶原 贫血: 触珠蛋白、转铁蛋白、铁蛋白、可溶性转铁蛋白受体,涵盖最广泛的临床检测指标,检验学部属于蛋白质的实验项目,生化室:总蛋白,白蛋白,球蛋白,载脂蛋白A1,载脂蛋 白B,前白蛋白,脂蛋白(a),高密度脂蛋白,低密度脂蛋 白,极低密度脂蛋白,血清蛋白电泳(白蛋白,1、2 、 、球蛋白),血尿2微球蛋白,糖化血红蛋白,肌钙 蛋白-T,24小时尿蛋白定量,尿微量白蛋白,酶类。 血凝室:纤维蛋白原,AT-(2-球蛋白),各种凝血因 子除第因子(Ca2+)均为蛋白质,FDP,D-D是纤维蛋白 降解产物。,免疫室 免疫球蛋白IgM, IgG, IgA, C反应蛋白,前S1蛋白、类风湿因子 肝炎抗原抗体类:HAV-IgM, HBSAg, HBSAb, HBEAg, HBEAb, HBCAb-IgM, HBCAg-IgG, 丙肝抗体,戊肝抗体 肿瘤标志物:细胞角质素抗原211,铁蛋白,甲胎 蛋白, 激素类: 催乳素(PRL),促黄体生成素(LH),促卵泡生成素(FSH), 促甲状腺激素(TSH),胰岛素, 补体类:C3,C4,检验学部属于蛋白质的实验项目,一、血浆蛋白质的组成、功能及分类,1、血浆蛋白质的组成: 2、血浆蛋白质的功能: 营养作用 维持胶体渗透压维持正常PH 运输作用免疫与防御功能催化作用抑制组织蛋白酶代谢调节凝血、抗凝血及纤溶作用。,氨基酸性质:两性电离及等电点、紫外吸收、呈色反应。 生物大分子:胶体性质、变性、沉淀和凝固等特点。,蛋白质性质,蛋白质的分离,透析、沉淀、盐析、电泳、层析、超速离心,血浆蛋白质的分类,根据分离方法: 盐析法:白蛋白和球蛋白两大类(各种蛋白质的亲水性和所带的电荷均有差别。) 电泳法(醋酸纤维素薄膜):白蛋白、1球蛋白 、 2 球蛋白、 球蛋白、纤维蛋白原、球蛋白。,3、血浆蛋白质的分类,白蛋白(4060) 1-球蛋白(1-抗胰蛋白酶、血清类粘蛋白、1-酸性糖蛋白、甲胎蛋白) 2-球蛋白(-脂蛋白、触珠蛋白、铜蓝蛋白、2-巨球蛋白) -球蛋白(转铁蛋白、血红素结合蛋白、 微球蛋白、纤维蛋白原、 脂蛋白、补体) -球蛋白(各种免疫球蛋白主要位置及C-反应蛋白),电泳法分类,根据生理功能分类:,1、白蛋白(albumin , Alb) 肝实质细胞合成,分子量66 458, 半衰期1519天,是血浆中含量最多的蛋白质,占4060。在肝细胞中没有贮存。 分子结构1975年阐明,含585个氨基酸残基的单链多肽,分子量66458,含17个二硫键(SS),不含糖的组分。,二、一些临床常检测血浆蛋白质,由于白蛋白在血浆中浓度高而且分子量小,其主要生理功能是维持血液胶体渗透压(血液中80的渗透压是由白蛋白承担的)/缓冲酸碱。 另外,白蛋白能结合诸如胆红素之类的疏水分子。在体内担负转运各种离子、酶类、脂溶性物质、激素和药物的功能。在机体营养作用中也起重要作用(内源性氨基酸)。 参考范围:血清白蛋白3555gL,1)血液中的白蛋白,临床意义 可以作为个体营养状态的评价指标 血浆白蛋白明显减少时,可以影响许多配体在循环血液中的存在形式; 白蛋白增高较少见,在严重失水时,对监测血浓缩有诊断意义;,白蛋白减少在不少疾病时常见:白蛋白的合成减少急性或慢性肝炎;营养不连或吸收不良;遗传性缺陷无白蛋白血症是一种极少见的代谢性缺损,血浆白蛋白含量常低于1g/L,但可以没有症状(如水肿等),可能部分由于血浆中球蛋白含量代偿性升高;组织损伤(外科手术或创伤)或炎症(感染性疾病)引起的白蛋白分解代谢增加;白蛋白的异常丢失肾病综合症、慢性肾小球肾炎、糖尿病、SLE等尿中白蛋白损失,烧伤及渗出性皮炎可以从皮肤丧失大量蛋白质;白蛋白的分布异常门静脉高压引起腹水中有大量蛋白质。是从血管内渗漏入腹腔。 白蛋白的遗传变异:已发现20多中种。,2)脑脊液中的白蛋白,CSF中白蛋白全部来自血液。 CSF中白蛋白增高与血脑屏障通透性增高有关。可见于多发性硬化症、病毒性脑炎或脑膜炎、细菌性脑膜炎等颅内和椎管内炎症性疾病和某些神经系统疾病。 参考范围:CSF白蛋白134237mgL,3)、微量白蛋白尿(MA),尿ALB 正常成人尿ALB 大约3.9024.4mg/24h 儿童 尿ALB 0 13.3mg/24h 尿AlbCr(肌酐)2.5mgmmol 尿中蛋白超过以上数值则称蛋白尿。,肝细胞合成,分子量54 000,半衰期12小时。在pH8.6电泳中移速比白蛋白快而得名。 功能:营养 半衰期12小时; 运载 结合T3、T4、结合维生素A。,2、前白蛋白(prealbumin, PA),3、转铁蛋白(transferrin , TRF 或 Tf) 单链糖蛋白由肝及单核吞噬细胞系统合成,分子量76500,位于球蛋白区带,负责运载消化管吸收的及 红细胞降解释放的铁,以转铁Fe3+复合物的形式进入骨髓,用于合成血红蛋白。半衰期7天。血浆中TRF的浓度受铁供应的调节,在缺铁状态时,血浆TRF浓度上升,经铁有效治疗后恢复到正常水平,【参考范围】2.5-4.3g/L 【临床意义】属急性时相反应蛋白 并用于贫血的诊断,缺铁性低色素贫血血浆转铁蛋白含量增高,但铁的饱和度很低;红细胞对铁利用障碍引起贫血时,血浆转铁蛋白正常或降低,但铁的饱和度增加。,3、转铁蛋白(transferrin , TRF 或 Tf),由淋巴细胞合成,存在于所有有核细胞的表面,特别是淋巴细胞和肿瘤细胞。可自由通过肾小球滤过膜,但在肾小管几乎全部重吸收,被重吸收的2微球蛋白在肾小管细胞完全降解。,4、2微球蛋白( 2microgluobin ,BMG 或2m),【参考范围】1.0-2.5mg/L(血清) ;尿: 0.2mg/L以下 【临床意义】 血浆2微球蛋白含量升高见于炎症、肿瘤、各种类型白血病及肾功能衰竭,尿毒症患者血清2微球蛋白可达40mg/L。,4、2微球蛋白( 2microgluobin ,BMG 或2m),2微球蛋白( 2m),血清升高: 肾小球滤过功 能低下,慢、 急性肾炎,肾 功能不全,肾前性:病毒感染, 免疫疾患(SLE, Sjogren),恶性 肿瘤。,尿中升高: 肾前性 肾小管障碍: Fanconi, 氨基甙类抗生素, 重金属中毒, Wilwon, 烧伤。 肾小球障碍,5、C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP),第一个被认定为急性时相反应蛋白, 由肝细胞合成, 可结合多种细菌、真菌及原虫 体对内的多糖。 能激活补体,引发调理作用,增强 细胞的吞噬功能,对血小板凝聚和血块收缩 有抑制作用。,-球蛋白(各种免疫球蛋白主要位置及C-反应蛋白):电泳分布在慢区带,有时可以延伸到区带,【参考范围】8.0mg/L,临床意义: CRP作为急性时相蛋白在各种急性炎症、组织损伤、心肌梗塞、手术创伤、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速升高,并有成倍增长之势。病变好转时,又迅速降至正常,其升高幅度与感染的程度呈正相关。 CRP与其它炎症因子的相关性: CRP与其它炎症因子如白细胞总数、红细胞沉降率和多形核白细胞等具有密切相关性。CRP与WBC存在正相关。在炎症反应中起着积极作用,使人体具有非特异性抵抗力。在患者疾病发作时,CRP可早于WBC而上升,回复正常也很快。故具有极高的敏感性。,5、C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP), CRP可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断:一旦发生炎症,CRP水平即升高,而病毒性感染CRP大都正常。脓毒血症CRP迅速升高,而依赖血培养则至少需要48小时,且其阳性率不高。又如CRP能快速有效地检测细菌性脑膜炎,其阳性率达99。 恶性肿瘤患者CRP大都升高。如CRP与AFP的联合检测,可用于肝癌与肝脏良性疾病的鉴别诊断。CRP测定用于肿瘤的治疗和预后有积极意义。手术前CRP上升,手术后则下降,且其反应不受放疗、化疗和皮质激素治疗的影响,有助于临床估价肿瘤的进程。 CRP用于评估急性胰腺炎的严重程度。当CRP高于250L时,则可提示为广泛坏死性胰腺炎。 正常参考值:10 L,5、C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP),6、 1酸性糖蛋白(1-AG),升高:急、慢性感染,AMI,肾炎,结缔组织病, 自身免疫,过敏,恶性肿瘤。,0.25-2.0g/L,是电泳1- 球蛋白含量最高部分, 但着色很浅。,AAG是主要的急性时相反应蛋白, 在急性炎症时增高,显然与免疫防御功能有关明。 早期工作认为肝是合成1-糖蛋白的唯一器官, 近年有证据认为某些肿瘤组织亦可以合成。,是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋白,分子量为5.5万,P1值4.8,含有10%-12%糖。在醋酸纤维薄膜或琼脂糖电泳中泳动于1区带,是这一区带的主要组分。区带中的另2个主要组分;1-酸性糖蛋白含糖量特别高,1-脂蛋白含脂类特别高,因此蛋白质的染色都很浅。 作为蛋白酶的抑制物,它不仅作用于胰蛋白酶,同时也作用于糜蛋白酶、尿激酶、肾素、胶原酶、弹性蛋白酶、纤溶酶和凝血酶等。AAT占血清中抑制蛋白酶活力的90%左右。AAT的抑制作用有明显的pH依赖性,最大活力处于中性和弱碱性,当pH4.5时活性基本丧失,这一特点具有重要的生理意义。,7、 1抗胰蛋白酶(1-AT),AAT具有多种遗传分型,利用不同pH的缓冲剂和电泳支持物,迄今已分离鉴定有33种等位基因(allotypes),其中最多见的是PiMM型(为M型蛋白抑制物的纯合子体)占人群的90%以上,另外还有两种蛋白称为Z型和S型,可表现为以下遗传分型:PiZZ、PiSS、PiSZ、PiMZ、PiMS,S型蛋白与M蛋白之间的氨基酸残基仅有一个差异。对蛋白酶的抑制作用主要限于血循环中M型蛋白的浓度。以MM型的蛋白酶抑制能力为100%相比,ZZ型的相对活力仅为15%、SS为60%、MZ为57%、MS为80%,其它则无活性。,临床意义,升高:感染,肿瘤,胶原病, 妊娠,术后药物服用 (口服避孕药,激素),降低:遗传性: 1-AT缺乏症 后天性:ARDS, 重症肝炎,肾炎, 肺损伤,蛋白丢 失,营养不良, 早产儿,肾移植 早期排异。,肝合成,参考区间:0.21-0.53g/L 是一种含铜的2糖蛋白,分子量约为12万-16万,不易纯化。目前所知为一个单链多肽,每分子含6-7个铜原子,由于含铜而呈蓝色,含糖约10%,末端唾液酸与多肽链连接,具有遗传上的基因多形性。 CER具有铁氧化酶的活性,对多酚及多胺类底物有催化其氧化的能力。最近研究认为CER可催化Fe2+ 氧化为Fe3+ 。,8、 铜兰蛋白(ceruloplasmin, CP),8、 铜兰蛋白(ceruloplasmin, CP),血清中降低: 先天异常; Wilson病, Menkes综合症, 营养不良,肝疾患, 蛋白丢失,新生儿。,血清中升高: 肿瘤,感染, AMI,贫血, 胆道梗阻, 胶原病,妊娠, 肺气肿,药物, 吸烟。,19,是人血清中能与游离血红蛋白(hb)在血浆中与游离的血红蛋白结合,是一种急性时相反应蛋白。在CAE电泳及琼脂糖凝胶电泳中位于2区带。分子中有两对肽链(与链)形成22四聚体。链有1及2两种。 肝脏合成 参考区间:0.5-2.2g/L,9、 触珠蛋白(haptoglobin, HP),9、 触珠蛋白(haptoglobin, HP),血清中降低:血管内、 外溶血,合成减低,手术 (开胸术)自家输血ABO 不适合骨髓移植,烧伤后肾 功不全,疟疾,慢性丙型肝 炎,自身免疫性溶贫;肾 功能不全,自尿中漏出。,血清中升高: AMI, 内源性发热, 肿瘤。,参考区间:1.31-2.93g/L 是溶纤维蛋白酶、凝血酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶和禅性蛋白酶等多种蛋白水解酶的抑制剂,是存在于血液中的具有重要生物活性的大分子的糖蛋白,分子量725000,由肝脏的淋巴细胞、单核细胞及纤维母细胞合成和释放,对血中内源性、外源性蛋白水解酶有清除作用。,10、 2-巨球蛋白( 2-macroglobin, 2MG),10、 2-巨球蛋白( 2-macroglobin, 2MG),血清中2MG,降低:恶性肿瘤,RA, DIC,溶栓疗法,AMI, COPD,尿毒症,肌萎缩 性侧索硬化,胰腺炎,溃 疡性结肠炎,术后。 遗传性2MG缺乏。,升高: 慢性炎症, 肝炎,肾炎, 慢性肝病, 糖尿病。,主要在胎儿肝中合成,分子量6.9万,在胎儿13周AFP占血浆蛋白总量的1/3。在妊娠30周达最高峰,以后逐渐下降,出生时血浆中浓度为高峰期的1%左右,约40mg/L,在周岁时接近成人水平(低于30mg/L)。,11、甲胎蛋白(-fetoprotein,FP或AFP),甲胎蛋白在产妇羊水或母体血浆中AFP可用于胎儿产前监测。如在神经管缺损、脊柱裂、无脑儿等时,AFP可由开放的神经管进入羊水而导致其在羊水中含量显著升高。胎儿在宫腔内死亡、畸胎瘤等先天缺陷亦可有羊水中AFP增高。AFP可经羊水部分进入母体血循环。在85%脊柱裂及无脑儿的母体,血浆AFP在妊娠16-18周可见升高而有诊断价值,但必须与临床经验结合,以免出现假阳性的错误。,11、血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA),一种急性时限反应蛋白,属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白质,相对分子量约12 000。在急性时限反应中,经IL-1、IL-6和TNF刺激,SAA在肝脏中由被激活的巨噬细胞和纤维母细胞合成,可升高到最初浓度的100-1000 倍,但半衰期极短,只有50分钟左右。 血清淀粉样蛋白 A 与高密度脂蛋白 (HDL)有关,它能在炎症期间调节高密度脂蛋白的代谢。血清淀粉样蛋白 A 一个特别重要的特性是其降解产物能以淀粉样蛋白 A (AA) 原纤维的方式沉积在不同的器官中,在慢性炎症疾病中这是一种严重的并发症。,11、血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA),与 C 反应蛋白 (CRP) 类似,血清淀粉样蛋白 A 的含量浓度是反映感染性疾病早期炎症的敏感指标,有助于诊断炎症、评估其活性、监控其活动及治疗。,11、血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA),胎儿胃肠道上皮组织、胰腺和肝细胞合成 多糖蛋白 无器官特异性 参考区间:3g/L 临床意义: 1. 60 g/L 空腔脏器肿瘤 2.持续升高 病变残存或疾病进展 特别是直肠癌 3.胰液和胆汁CEA诊断胰腺和胆道癌 浆液CEA 细胞学检查 尿液CEA 膀胱癌,11、CEA(Ca antigen,CEA),纤维蛋白原4.0%,2-巨球2.93%,触珠蛋白2.2%,铜兰蛋白0.53%,1抗胰蛋白酶1.99%,1酸性糖蛋白 2.0%,前白蛋白0.45%,转铁蛋白4.3%,白蛋白55%,其他26.59 %,