乙型肝炎表面抗原酶联免疫吸附法中包被板的回收与利用.doc

乙型肝炎表面抗原酶联免疫吸附法中包被板的回收与利用2011年7月第18卷第7期乙型肝炎表面抗原酶联免疫吸附法中包被j阪的回收与利用赵志钧娄海波于倩(浙江舟山医院检验中心516004)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)测定是诊断乙肝及乙肝病毒携带者的主要指标和直接证据之一.而酶联免疫吸附试验,因其快捷,简便,成为目前各医疗单位应用最多的检测手段.我们将日常工作中的阴性包被板条经过处理,再次用于试验,结果满意,报道如下:1材料与方法1.1仪器及材料美国宝特(BIOTEK)ELX一800自动酶标仪.试剂由英科创新厦门科技有限公司生产,批号20l0036108.室内低值质控品(简称低值血清),英科创新厦门科技有限公司提供,批号20l05101.样本HBsAg高值345U/ml,中值184.44U/ml,阴性血清0U/ml经12000RS发光仪测定,均来自本院健康检查者.1.2方法1.2.1回收板条的收集与保存酶标板显色完全后,肉眼观察结果,不加终止液,收集阴性包被板条,用自来水洗涤5次,洗涤液洗涤1次,甩干,最后电吹风吹干,放人塑料袋内摁紧咬合条26保存.1.2.2样本测定样本,室内低值质控品50l_,阳性,阴性各一滴分别加入相应的酶标板孔内,设空白对照,37水浴箱温育30分钟,不洗,各加酶结合物1滴,37水浴箱温育30分钟,洗涤,显色同原方法,显色完全后,加终止液,双波长比色,读取吸光度.计算变异系数(CV).1.2.3操作方法照操作说明书.2结果2.1回收板与商品板的重复性试验比较结果商品板和回收板的高,中,低值血清吸光度接近,且重复性良好,见表1.表1回收板与商品板的重复性试验结果比较注:表中商品板用原法测定,回收板已26保存1O天2.2回收板不同保存时INN0定结果比较见表2.表2中值,低值血清,阴性,阳性,空白对照(n-3)3讨论乙肝表面抗原酶联免疫吸附试验中包被板上的包被抗体与抗原结合,再与酶标抗体结合,形成酶标记抗原抗体复合物,通过洗涤,分离,加入底物显色.如果样品中没有相应的抗原,包被板上的抗体就不会被结合,仍保留原有的反应活性.所以从理论上讲,双抗体夹心法的包被板是可以重复利用的.表1和表2的数据也可以验证.本组数据显示,商品和回收板的高,中,低值血清吸光度无明显差异,重复性良好,CV值也很好,特别是低值血清,符合定性试验的要求.在试验中,发现高,中值血清的吸光度两者无显示梯度变化,而且比较接近,这可能是在浓度达到一定水平时,酶标仪线性范围比较窄之故,不能与定量分析仪作比较.但能满足定性试验的要求.表1中原法高值血清吸光度均值低于中值,这可能是钩状效应,是由一步法引起的.回收板采用的是二步法,高值血清的吸光度高于中值血清.表l中可以看到三份样本总体精密度优于原方法,同样可能是由于二步法优于一步法所致.表1中回收板阴性管的平均吸光度与商品板阴性管的平均吸光度虽有差异,但不影响结果判定.表2选择中值,低值血清及阴性,阳性对照,旨在了解回收板在不同保存时间的检测灵敏度及特异性及它们之间的差异程度.表2显示四种不同保存时间的回收板的吸光度变化不大,而且从阴性和空白对照中未出现非特异性显色现象,可说明回收再利用的回收板,至少在60天内有效.对测定结果无影响.通过以上实验的探讨,我们有理由相信:乙肝表面抗原阴性的包被板是可以回收和利用的.(收稿:2011一o124)(发稿编辑:高淑红)4g