乌鲁木齐地区维吾尔族人群脂联素基因核甘酸多态性＋45T／G单核苷酸多态性与冠心病的相关性研究.doc

乌鲁木齐地区维吾尔族人群脂联素基因核甘酸多态性45TG单核苷酸多态性与冠心病的相关性研究?36?ClinicalRationalDrugUse,June2011,Vo1.4No.6C?论着?乌鲁木齐地区维吾尔族人群脂联素基因核甘酸多态性+45T/G单核苷酸多态性与冠心病的相关性研究迪丽努尔?买买提伊明,热娜古丽?艾则孜,库热西?玉努斯【摘要】目的探讨乌鲁木齐地区维吾尔族人群脂联素基因SNP+45位核苷酸T/G多态性与冠心病(CHD)的相关性.方法以196例冠脉造影证实为CHD的非糖尿病患者为CHD组,以124例健康者为对照组,采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法分析脂联素基因SNP+45T/G单核苷酸多态性与CHD的相关性.结果CHD组,ITr,TG,GG基因型和T,G等位基因频率与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论脂联素基因SNP+45位核苷酸T/G多态性与CHD无明显相关,提示脂联素基因可能不是CHD的易感基因.【关键词】鸟鲁木齐地区雏吾尔族人群;脂联素基因多态性;冠心病【中图分类号】R541.4【文献标识码】A【文章编号】16743296(2011)06003602AdiponecfinGenePolymorphisminUygurPeopleofUrumqiRegiOnandItsAssociationwithCoronaryHeartDiseaseMaimaitiyimingDilnur,AizeziRenaguLi,UnusiKurexi.TheSixthAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalNiversity,Urumqi830002,China【Abstract】ObjectiveTostudytheadiponectingenepolymorphisminUygurpeopleofUrumqiregionanditsassociationwithcoronaryheartdisease.MethodsPolymerasechainreactionandrestrictionfragmentlengthpolymorphism(PCRRFLP)wereperformedtoidentifythepolymorphismofadiponectingenein320subjects,including124withnormaland196withcoronaryheartdisease.ResultsThegenotypefrequencyandallelicfrequencyof+45(T/G)betweentwogroupsshowednosignificantdifference(P>0.05).ConclusionTherewasnorelationshipofthegenepolymorphismofadiponectin+45nucleotideT/Gwithcoronaryheartdisease,andadiponeetingenemaynotbeasusceptibilitygenetocoronaryheartdiseaseinUygurpeopleofUrumqiregion.【Keywords】UygurpeopleofUmmqiregion;Polymorphismofadiponectin;Coronaryheandisease脂联素(adiponeetin)是近年新发现的一种由脂肪细胞特异分泌的细胞凶子,目前已发现1O余个脂联素基凶常见的单核苷酸多态性(SNPs)及一些罕见的错义突变,其中位于外显子2上的脂联素基凶SNP+45核苷酸位点存在TG转换,该多态性最为常见.近年来,脂联素基因的多态性与肥胖,糖尿病,冠心病(CHD)的关系在不同的国家,种族之间有不同的报道.本研究探讨乌鲁木齐地区维吾尔族脂联素基因外显子2的变异与CHD的关系.1对象与方法1,1研究对象选择在乌鲁木齐地区第二人民医院心血管内科住院的维吾尔族患者196例,其中男104例,女92例,平均年龄(66.21±10.31)岁;同期体检正常的健康人群124例,男65例,女59例,平均年龄(64.134-6.18)岁.对所有研究对象询问病史并进行体格检查,测量身高和血压,并询问吸烟,高血压(hypertension,HP),2型糖尿病(type2dia一基金项目:新疆维吾尔自治区中医药民族医青年人才项目(2009ZMY13)作者单位:830002新疆乌鲁木齐市.新疆医科大学第六附属医院(迪丽努尔?买买提伊明);新疆医科大学维吾尔医药系(热娜古丽?艾则孜);新疆医科大学生物化学教研室(库热西?玉努斯)通讯作者:库热西?玉努斯,(1964一),男,博士,教授;主要研究方向:维吾尔医药与分子生物学;830011新疆乌鲁木齐市,新疆医科大学生物化学教研室betes,T2DM),高脂血症病史.CHD诊断标准:选择性状动脉造影示左主干狭窄I>30%或其他3支至少有1支状动脉狭窄>150%为阳性,剔除合并有糖尿病的患者.1.2方法1.2.1临床及生化指标测定研究对象常规测鼓血雎,体质量,腰围,臀围和身高,并根据公式:体重/身高计算体质指数(BMI).美囤BECKMANCX9全自动生化分析仪测定腹血糖(FPG),三酰甘油(TG),低密度脂蛋白胆醇(LDLC),高密度脂蛋白胆固醇(HDLC),试剂盒I西安沃尔森科技有限公司提供.1.2.2基凶组DNA的提取采用TAKARA(H本)牲组DNA试剂盒提取外周血中的DNA,一8O冰箱保存备川.1.2.3引物的设计及合成PCR扩增所用上游引物为5,一GCAGCTCCTAGAAGTAGACTCTGCTG一3,下游引物为5一GcAGGTCTGTGATGAAAGAGGCC一3,弓l物由上海卜工彳限公司合成.1.2.4聚合酶链反应(PCR)PCR反应体系2Ol,反应程序为:94预变性4min;94变性45s,60%退火45s,72延伸45s,循环35次;72终末延伸lOmin.2%琼脂糖电泳鉴定PCR产物,以lOObpDNAladdermarker为参照物,PCR扩增产物为372bp的目的条带.1.2.5限制性片段长度多态性(RFLP)分析上述PCR扩增产物分别以Sinai核酸内切酶37水浴10h,然后用2%琼脂糖电泳鉴定酶切产物.1.3统计学方法应用SPSS15.0软件;计量资料数据以(临床合理用药2011年6月第4卷第6C期±s)表示,组间均数比较采用t检验;SNP位点的等位基因频率在两组问的差异分析采用四格表x检验,以HardyWeinberg平衡检测样本的群体代表性.2结果2.1两组一般情况,临床及生化指标比较两组BMI,TC,LDLc比较差异军无统计学意义(P>0.05);CHD组FPG和TG均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CHD组HDLC低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,见表1).表1CHD组和对照组临床及生化指标的比较删馓(k)(L)(L)()(HDL-LC)CHD19623.56±2.915.91±1.221.82±1.13489±1,222.89±0.721.03±O.22对照组12423.21±2.594.27±1.141.31±0.984.82±n932.77±0.641.27±0.19注:BMI=体质指数,FPG:空腹血糖,TG=三酰甘油,TC:总胆固醇,LDLC=低密度值蛋白胆固醇,HDLC=高密度脂蛋白胆固醇2.2脂联素基因SNP+45T/G基因型检测结果脂联素基因PCR扩增产物为372bp的片段.PCR扩增产物经限制性核酸内切酶SmaI酶切后,可出现3种片断大小的组合,分别为野生纯合子1_r显示1条带(372bp);突变纯合子GG显示为两条带GG(216bp和156bp);突变杂合子TG显示3条带TG(372bp,216bp和156bp).脂联素基因外显子2上+45位核苷酸存在T/G多态性为同义突变即GGT-GGG(Glyl5Gly).当+45位核苷酸为G时,存在SmaI限制性内切酶的酶切位点,而为T时则该酶切位点消失.因此,当基因型为GG时,酶切产物电泳后有156bp和216bp2条带;基因型为1-r时,只有372bp1条带;基因型为TG时,有156bp,216bp和372bp3条带(见图1).2.3脂联素SNP+45基因型和等位基因频率CHD组和对照组之间脂联素基因型频率和等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05,见表2).654321髓?37?5端的胞嘧啶开始,多肽编码区域是从外显子2起始处开始,在外显子3起始处结束.全基因组扫描推测此区域是代谢综合征,T2DM和心血管疾病的易感区域,而且有较大频率的基因多态性.因此,对定位于染色体3q27区域的人apM基因的SNP与疾病的关系已经成为近年的研究热点.国内外已有多项研究对apM基因+45T/G多态性与CHD相关性进行分析,但各研究的结论迥异.研究发现,SNP+45与欧洲人群T2DM显着相关,对中国人群研究也发现有这种相关性,而在法国白种人中未发现这种相关性.在德国白种人中,SNP+45可能增加无糖尿病家族史的非糖尿病人群发生肥胖的危险性,继而导致胰岛素抵抗的发生,说明SNP+45与肥胖及胰岛素敏感性相关.Lacquemant等进行单变量和多变量统计分析均提示SNP+45与法国和瑞典白种人T2DM患者CHD发生显着相关,并且是CHD的独立危险因素.而中国,美国,意大利的研究未发现T2DM人群SNP+45与CHD存在相关性.提示在不同种族人群中,脂联素基因的SNPS可能与遗传背景和环境等因素有关.脂联素基因多肽编码区域是从外显子2起始处开始,而外显子2+45位存在一个同义突变G15G(GGT-GGG),即密码子变化并不改变构成蛋白质的氨基酸序列.国内外对定位于染色体3q27区域的脂联素基因的SNPs研究发现,不同人群脂联素基因多态性与疾病的相关性不尽相同.本研究结果表明,CHD组和正常对照组之间脂联素基因型频率和等位基因频率差异均无统计学意义,提示apM基因+45T/G多态性与CHD易患性无明显相关性,但还需扩大样本量,更大程度地控制混杂因素,进一步准确阐明apM+45T/G基因多态性与CHD的关系.参考文献1GableDR,MatinJ,WhittallR,eta1.Commonadiponectingenevariantsshowdifferenteffectsonriskofcardiovasculardiseaseandtype2diabetesineuropeansubjectsJ.AnnHumGenet,2007,71(4):453466.2刘德敏,靳立忠,于德明,等.2型糖尿病患者中脂联素基因多态性的研究J.中华糖尿病杂志,2004,12(6):397398.3VasseurF,HelbecqueN,DinaC,eta1.SinglenucleotidepolymorphismhaplotypesinthebothproximalpromoteroftheAPM1genemodulateadipocytesecretedadiponectinhormonelevelsandcontributetothegeneticriskfortype2diabetesinFrenchCaucasiansJ.HumMolGenet,2002,11(21):26072614.4StumvollM,TschritterO,FfitscheA,eta1.AssociationoftheTGpolymorphisminadiponectinwithobesityandinsulinsensitivity:interactionwithfamilyhistoryoftype2diabetesJ.Diabetes,2002,51(1):3741.5LacquemantC,FroguelP,LobbensS,eta1.TheadiponectingeneSNP+45isassociatedwithcoronaryarterydiseaseinType2fnoninsulindependent)diabetesmellitusJ.DiabetMed,.2004,21(7):776781.6马晓伟,林益华,李建平,等.我国2型糖尿病人群脂联素基因多态性与冠心病的相关性研究J.中国糖尿病杂志,2008,16(4):197200.7BaeciS,MenzaghiC,ErcolinoT,eta1.The276G/Tsinglenucleotidepolymorphismoftheadiponectingeneisassociatedwithcoronarya卜terydiseas.eintype2diabeticpatientsJ.DiabetesCare,2004,27(8):20152020.8FilippiE,SentnellF,RomeoS,eta1.TheadiponectingeneSNP+276G>Tassociateswithearlyonsetcoronaryarterydiseaseandwithlowerlevelsofadiponectininyoungercoronaryarterydiseasepatients(age<or:50years)J.JMolMed,2005,83(9):711719.(收稿日期:20110305;修回日期:20110608)