122 单细胞凝胶电泳试验在人群生物监测研究中的应用.pdf
国外医学卫生学分册2 0 0 3 年第3 0 卷第6 期 3 7 7 2l22 e t a l . J . F o o d A d d i t C o n t a m , 1 8: 8 5 0 - 8 5 6 . e t a l 2324 1 8 : 2 6 3 - 2 6 9. V a e s s e n 1 1 0, J e t a t F o o d A d d i t C o n t a m. 2 0 0 1 叫l2j J . T o x i c o l E n v i m n C h e m M e v in E . e t a l . J . E n v im n H e a l th P e t s p e c t , 1 9 9 8 , 1 0 6 : x 3 4 9 - x 3 5 6 G o c h f e ld M , e t a l . 1 . J O c c u p E n v iro n M e d , 2 0 0 1 , 4 3 : 4 3 3 - 4 3 4 K o h n M C , e t a l . J . R is k A n a l , 1 9 9 4 , 1 4 : 9 9 3 - 1 0 0 0 P o l i s J B , e t a l . 1 . T o x i c o l L e t t , 1 9 9 9 , 1 0 5 : 2 5 1 - 2 6 0 H e n g s tle r J G , e t . l . J . D r u g M e ta b o l is m s R e v , 1 9 9 9 , 3 1 : 9 1 7 - 9 7 0 . v w J G , e t a l . J . T o x i c u l L e tt , 1 9 9 5 , 8 2 : 3 8 5 - 3 9 4. G r a s s m a n J A , e t a l . J . E n v i m n H e a l t h P e r - s p e c t , 1 9 9 8 , 1 0 6 : 7 6 1 - 7 6 7 . W H O . S u m m a r y o f t h e F if ty - s e v e n t h m ee t i n g o f t h e j o i n t F A O / WH O E x p e r t C o m m i t t e e o n F o o d A d d i t i v e s R l . R o m e . 2 0 0 1 . 2 0-2 1 . 圈l. 队匹 国困 27呀 1 9 8 8 , 1 6 : 2 8 1 - 2 9 4 . R o th m a n N , e t a l . t J . C a ro i n o g e n e s i s , 1 9 9 0 , 1 1 : 1 2 4 1 - 1 2 4 3 K a n g D H , e t a l . J . 枷。 A m A s s o c C a n c e r R e s , 1 9 9 3 , 3 4 : 1 5 1 . T h o m p s o n P A , e t a l 一 J . E n v im n M o l M u ta g e n , 2 0 0 2 , 3 9 : 1 3 4 - 1 4 2 M a lf R i M A , e t a l . 1 . C a m i n n g e n e s i s . 1 9 9 9 , 1 0: 7 1 巧- 7 1 3 M a g a g n o t ti C , e t a l . 1 . 1 n , J C a n c e r , t w o , 8 8 : 1 - 6 G u e n g e r i c h F P , e t a l . J . M u t R e s , 1 9 9 9 , 4 2 8 : 1 1 5 - 1 2 4. A m b ro s o n c C B , e t a l . ( 1 一 I n t 1 C a n c e r , 1 9 9 8 , 7 5. 8 2 5 - 8 3 0. lv网 l920 1 2 2 单细胞凝胶电泳试验在人群生物监测研究中的应用 邢彩虹， 综述李桂兰 2 ， 尹 松年2 审校 中国协和医科大学公共卫生学院， 北京1 0 0 0 2 1 中国疾病预防性制中心职业卫生所， 湘京1 0 0 0 5 0 摘要:单细胞凝胶电泳试验( S C G E ) 或称彗星试验 是一种在单细胞水平上评价遗传损伤， 进行人群生物监 测的新方法。由于技术简单， 费用低， 能够进行快速、 准确的大样本的人群监测， 筛检对D N A 损伤因素敏感的 高危人群。本文就彗星试验的原理及发展， 在环境暴肠、 临床、 生括方式等研究方面的应用及其敏感性、 影响 因素作一综述。 关健词: 单细胞凝胶电泳试验; D N A损伤 * m分水$ - R - 3 3 1文献标识码: A文章编号: 1 0 0 1 - 1 2 2 6 ( 2 0 0 3 ) 0 6 - 0 3 7 7 - 0 6 对暴露于潜在致突变物或致癌物的人群 进行遗传学生物监测是对遗传疾病和癌症的 早期预警方法。在细胞遗传学标志物中， 应 用最广泛的是染色体畸变( C A s ) , 微核( M N ) 收稿日期: 2 0 0 3 - 0 5 - 2 0 ; 修回日期: 2 0 0 3 - 0 8 - 1 5 作者简介: 邢彩虹( 1 9 7 1 - )女， 硕士研究生， 研究方向: 苯基峪 与遗传损伤。 和姊妹染色单体交换( S C E s ) ， 用于反映D N A 损伤剂的早期生物学效应。近几年来， 单细 胞凝胶电泳试验( S C G E ) 或称彗星试验作为 一种新技术被广泛应用于人群生物监测研 究。S C G E 技术应用的细胞类型比细胞遗传 学技术更广泛， 不仅能检测增殖细胞， 而且能 检测未增殖细胞， 并具有快速、 敏感的特点， 37 9 国外医学卫生学分册2 0 0 3 年第3 0卷第6期 而且只需要很少的细胞便可检测出细胞间 D N A损伤的差异 1 彗星试验的原理及发展 在R y d b e r g 等 仁 、 首 次 定量D N A 链断 裂后， O s tl in g 等 D ) 提出了 微 量电 泳 技 术即 单 细 胞凝 胶电泳试验( S G G E ) 或称彗星试验。该技术是 在中性电泳条件下检测D N A双链断裂。随后 S in g h 等 3 将 实 验条 件改为 碱性( p H 1 3 ) ， 使 之不仅能检测D N A单、 双链断裂， 而且能检测 碱性易变性位点( 一些只在碱性条件下才转变 成单链断裂的D N A损伤) 。在碱性条件下， D N A 双链解螺旋且碱变性为单链， D N A断链 和碱易变性断片从严密的超螺旋结构中释放 出来。由于单链断裂的碎片分子量小， 电泳时 带负电的断链或碎片离开核D N A向阳极迁移 形成“ 彗星” 影像。细胞 D N A受损愈严重， 产 生的断链和碱性易变性断片就愈多， 断链或断 片愈小， 迁移的距离就愈长。通过测定 D N A 迁移部分的光密度或迁移长度， 可定量测定单 个细胞D N A的损伤程度。 彗星试验经进一步改进可用来检测 D N A - D N A / D N A 一 蛋 白质交联， 由于 D N A与 D N A分子或D N A与核蛋白的交互联结， 在电 泳过程中交联剂的存在将使 D N A移动困难 甚至减少。另外， 用损伤特异性核酸内切酶 消化类核( n u c l e o i d s ) 中的D N A ， 能将特异的 D N A 损伤转换成链断裂， 如用核酸内切酶19 检测氧化的R Ile ， 用甲酞胺基啥吮糖基化酶 ( F P G ) 检测改变的嗦吟， 进一步提高了彗星 试验的敏感性和特异性。 在用D N A 结合荧光染料染色后， 用荧光 显微镜能够观察到彗星。尾部的荧光强度反 映了D N A断裂的程度， 从用目镜测微尺直接 观察到用计算机图像分析系统来评价， 彗星 的分析过程越来越简便。分析软件提供了一 系列评价参数， 如总长、 尾长、 D N A在尾部的 百分比、 尾矩 ( 尾长 x D N A在尾部的百分 比 ) , O l i v e尾矩等， 能更好地定量 D N A损 伤。 2 用于职业和环境暴露研究 工作场所和环境中存在的遗传毒物对人 群健康的影响已经引起人们的广泛关注。遗 传毒物致突变和致癌变的主要原因是能够引 起细胞 D N A的损伤， 彗星试验以其对检测 D N A损伤的高度敏感性， 在职业及环境暴露 研究中广泛应用。 职 业暴露于 苯L0 到 、 多环芳烃6 、 铅川、 农 药川、 木屑粉 尘、 麻醉气体、 射线都能够引 起 显著的D N A损伤 链断裂) 。以苯为例， 应用 彗星试验对4 6 名接苯工人的研究发现， 累积 接苯浓度小于1 5 0 m g / ( 时· 年) 或8 小时时间 加 权平均浓度小于1 6 . 5 m g / 耐时， 淋巴细胞 D N A链断裂均显著高于对照组， D N A损伤与 接苯浓度有明显的剂量一 反应关系 I' l 。 在对 混苯( 含有苯、 甲苯、 二甲苯) 作业工人的研究 中 发现苯浓度越高, D N A 损伤程度越大 io l Z h u 等L ' I 对汽车制造厂工人D N A 损伤的研究 发现6 个工种 3 4 6 人中， 油漆工的D N A损伤 程度最高， 其接苯浓度最高为1 3 8 . 5 m g / 耐。 除以上相对较高浓度的苯暴露研究以外， 彗 星试验对低浓度苯暴露也显示了较高的敏感 性。 3 4 名 机 场 装卸 工 暴 露于 苯3 . 3 m g l m ' “ , 1 2 名加油站服务员暴露于苯。 . 3 m g / 时 n 2 0 5 名电梯制造工人同时暴露于苯( 0 . 5 3.2.g/耐) 、 甲苯( 1 . 2 一 2 2 . 3 m g / k 3 ) 、 二甲苯 ( 0 . 5 一1 2 . O . g / m ' ) 及粉尘( 0 . 1 7一1 . 2 m g / 时户、 都引起显著的D N A 损伤， 这些低于最 大容许浓度的暴露浓度所引起的显著D N A 损伤说明， 目前的最大容许浓度和阂限值可 能不是预防遗传毒性作用的安全剂量。 另外， 在对职业暴露于多环芳烃的研究 中， 2 9 名橡胶生产厂工人淋巴细胞D N A损伤 显著增加， 用核酸内切酶皿和 F P G分别检测 氧化的畴吮和改变的嗓吟， 但结果无法进行 定量。因为暴露组中有很高的单链断裂， 这 种高水平的断裂再加上损伤位点转化成的单 链断裂超出了S C G E的检测范围。A n g e l i s 等L H I 用中性电泳( p H二 8 . 0 ) 解决了 这一问 题。在对暴露于多环芳烃的2 8 1 名橡胶厂工 国外医学卫生学分册2 0 0 3 年第3 0 卷第6 期 3 7 9 人的研究中， 用蛋白酶K破坏多环芳烃的某 些代谢产物引起的D N A - D N A / D N A 一 蛋白质交 联后发现， 暴露组的D N A尾矩显著高于对照 组 s , F e a c a s s 。 等 t7 用彗 星 试验 检测了 铅暴 露工人的 D N A损伤， 发现铅暴露工人 D N A 损伤水平与谷胧甘肤水平呈显著负相关， 与 活性氧族水平呈显著正相关， 作者认为铅暴 露减少了细胞内抗氧化剂的储备， 使得缺乏 谷胧甘肚的淋巴细胞产生氧化应激反应， 从 而使 D N A损伤增加。职业接触抗肿瘤药的 护士， D N A损伤显著增加， 证实了接触抗肿 瘤药又不进行安全防护给人带来的潜在的遗 传危险性， 强调了防护措施的必要性和重要 性。也有研究报道， 在暴露于甲苯和其他有 机溶剂的鞋厂工人a l 及城市污水处理厂的 工人中没有发现遗传损伤的增加。 用彗星试验发现， 空气污染也能够引起 显著的 D N A损伤( 链断裂) 。在切尔诺贝利 核辐射泄漏事故 1 0 年后， 暴露于核辐射儿童 的淋巴细胞中仍然能检测出高水平的D N A 损伤， 证明长期暴露于环境中放射性污染物 所造成的D N A损伤可能与血浆中存在的断 裂剂有关 引 。在对室内空气污染的研究中 发现， 居民外周血淋巴细胞D N A损伤随室内 空气中氧浓度的增加而增高， 与饮水中氧的 浓度无相关关系。这为采取措施最大限度地 减 少室内空气中氛的含量提供了依据G s l 对燃煤污染型砷中毒患者的研究证实， 砷能 引起人血细胞D N A单链断裂， 其损伤早于临 床 表现， 并与尿砷、 发砷呈正相关 17 1 o C a 1 - d e ro n 等L n ) 检侧了空气污染严重的墨西哥城 儿童鼻上皮细胞的D N A损伤和8 - 经基鸟嗓 吟( 8 - O H d G ) 的浓度， 结果发现二者都显著增 高。在对空气污染引起遗传损伤的研究中， 比较白细胞、 颊粘膜细胞和鼻上皮细胞检测 环境暴露污染物的敏感性发现， 鼻粘膜细胞 最敏感。因为鼻粘膜细胞是最先接触有毒污 染物的细胞。彗星参数和 8 - O H d G被认为是 监测空气污染中人群 D N A损伤的有用工 具 。 3 临床研究 在临床研究中， 彗星试验用于评价疾病 的预防和治疗效果。用彗星试验评价糖尿病 患 者u n , 、 流产患者f20 1 以及接受麻醉病人的 D N A损伤( 链断裂) ， 得到了有意义的结果 糖尿病患者的D N A损伤增加是由于血清中 脂质过氧化物的增加使自由基大量形成所 致， 从而增加了搪尿病患者动脉粥样硬化和 血 管并发症的发生 19 1 。手术中使用麻醉剂 ( 异氟醚) 的患者 D N A损伤显著增加， 随后 D N A 损伤被修复， 但对于有D N A 修复遗传缺 陷的患者如着色性干皮病患者， 如果用异氟 醚麻醉可能会引起不可逆的D N A损伤。因 此， 检测患者尤其是反复接触麻醉剂的患者 的D N A 损伤情况是非常重要的。由于流感 病毒能够引 起显著的不可逆的D N A 损伤， 因 而彗星试验可以作为一个有效的筛查方法检 查 反复 患流 感的 患者和孕 妇的D N A 损伤l= u 另外， 通过检查羊水脱落细胞， 彗星试验可用 于着色性干皮病的产前诊断。 彗星试验也用于评价放疗和化疗效果。 用彗星试验发现， 癌症患者 D N A损伤的基础 水平高于健康人， 这一现象说明， D N A损伤 的 增加与癌症本身有关， 癌症患者的D N A比 健康人更脆弱。O l i v e 等1 . 1 通过对肿瘤患者 进行活组织穿刺， 用彗星试验检测肿瘤内的 缺 氧细胞来评价治疗效果。 T u c k 等z3 7 用彗 星试验证实， 慢性淋巴细胞性白血病( C L L ) 患者的淋巴细胞缺少对紫外线引起的D N A 损伤的修复能力， 因而对紫外线高度敏感， 用 对正常细胞没有影响的低剂量紫外线照射就 能够杀死 C L L 细胞， 进一步证实放疗可能是 治疗 C L L的有效方法。彗星试验也有助于 研究新药的作用机制， 以及分析抗肿瘤药间 的相互作用。不同的抗肿瘤药物引起 D N A 损伤而导致 D N A断裂的机制是不同的。一 些药可直接引起 D N A损伤， 另一些则需要通 过代谢活化作用， 还有一些则通过影响细胞 的功能引起 D N A链断裂。值得注意的是， 顺 铂和其他一些抑制细胞生长的药物在治疗癌 1 8 0 国外医学卫生学分册 2 0 0 3 年第3 0 卷第6 期 症时能引起 D N A交联。在彗星试验中这种 D N A交联使 D N A的迁移减少， 从而能将这类 药物与其他化疗药物区分开来。 彗星试验的临床应用不只限于使用体细 胞。在比较不育男性与正常男性精子细胞 D N A损伤水平的研究中发现， 二者间没有不 同。但后者对过氧化氢和 x线照射引起的 D N A损伤有更强的抵抗能力。 4 生活方式及饮食的研究 研究吸烟引起D N A损伤分两种情况， 一 种是将吸烟作为一个单独的遗传毒物来研 究， 一种是将吸烟作为一个混杂因素来研究。 吸烟本身能引起 D N A断裂显著增加， 然而， D N A损伤程度与每天吸烟量和浓缩焦油含 量 都没有相关性 . 1 。用彗星试验监测主动 吸烟和被动吸烟母亲的婴儿的 D N A损伤， 没 有发现二者有显著性不同。L a m等川首次提 出在家被动吸烟与D N A断裂之间的剂量一 反 应关系， 被动吸烟者的尾矩随着家中吸烟者 人数的增加而增加。但研究者没有检测被动 吸烟者血中尼古丁含量和尿中可铁宁含量。 在对印度健康人群的研究中发现， 检测D N A 损伤的结果是吸烟者高于不吸烟者， 非素食 主义者高于素食主义者， 非素食的吸烟者高 于素食的不吸烟者。作者认为， 这可能是香 烟烟雾中的苯并【 们毗与存在于肉制品烹调 过程中的 诱变物联合作用的 结果 2 5 1 。 评价吸烟与有毒物质的相互作用是一个复 杂的问题。吸烟及暴露于某些有毒物质的联合 作用可能会增加D N A损伤和癌症的发生率。 用彗星试验对职业接触苯乙烯的研究显示， 只 有暴露组吸烟者的D N A损伤随着吸烟量的增 加而增加， 这可能由于长期接触苯乙烯使淋巴 细胞对烟草成分引起的D N A损伤的敏感性增 加 所致 i m i 。 在 对遗 传毒性 作用 进行的 生 物 监测 中， 吸烟的混杂效应是不一致的。用彗星试验 发现， 在有自然流产史的夫妇中， 以及喷酒农药 的 农民 C a l 染发师， 职 业接触麻醉剂和射 线的医 务 人员， 职业接触木屑粉尘、 多环芳烃 Cs l 苯及 其 他有机 溶剂 叫以及烟草烟尘 in i 的 工人中， 吸 烟者的D N A 损伤显著高于不吸烟者。而在废 品 处 理站、 城市污 水处理 厂、 鞋厂工 作的 工 人t ad 及职 业接 铅 工人 川 或 暴露于 室内 空 气污 染的 个 体L W 中， 吸烟习惯对试验结果没有影响。 这种 矛盾的结果可能是由不同的生活方式造成的。 有人发现， 很多阳 性结果产生于欧洲南部( 意大 利、 法国、 希腊、 土耳其) ， 从而推测在吸烟习惯 中 地理位置的不同可能是一个引起吸烟阳性 结果的潜在影响因素。在欧洲南部， 人们常吸 的一些品牌的香烟中含有黑烟叶和高浓度的尼 古丁。这种吸烟的影响也可以通过比较欧洲南 部饮食习惯的不同来解释， 其中包括富含抗氧 化剂或维生素添加剂的食物。 在体外试验中， 人们发现蔬菜和果汁能 增加对氧化的碱基的修复能力。在饮食中补 充维生素C 、 维生素 E以及复合维生素或蔬 菜都能够减少 D N A链断裂程度。受试者在 服用含有抗氧化剂的添加剂一段时间后， 将 其淋巴细胞在体外暴露于引起氧化应激的物 质， 用彗星试验检测后发现: 服用含有维生素 C ( 1 0 0 m g / d ) 、 维生素E ( 2 8 0 m g / d ) , P - 胡萝卜 素 ( 2 5 m g / d ) 的添 加剂2 0 周后， 核酸内切酶敏感 位点显著降低， 淋巴细胞对过氧化氢引起 D N A链断裂的抵抗力显著增加。在饮食中 补充维生素 E会减少由于不饱和脂肪酸的 大 量摄人而引起的D N A氧化损伤t z e l 。 在体 内 试验中， 用彗星试验发现， 服用维生素 E 添加剂 1 2 周的糖尿病病人D N A链断裂程度 比 服用前显著降低 引 。 5 彗星试验和其他遗传毒性试验敏感性的 比较 用彗星试验和细胞遗传学试验共同对暴 露于遗传毒物的人群进行生物监测研究， 不 仅能够比较其相对敏感性， 而且能为研究在 彗星试验中检测到的 D N A断裂是否引起固 定突变提供线索。但在不同的研究中， 二者 的敏感性存在差异。 一些研究证实彗星试验的敏感性较高口 国外医学卫生学分册 2 0 0 3 年第3 0 卷第6期 3 81 能在2 x 1 0 “ D a 的D N A分子中检测出 1 个断 裂。在检测由吸烟、 过度体育活动 ' t 引起 D N A改变的研究中发现 ， 彗星试验 比 S C E和 M N试验敏感在对废品处理站工人进行比 较性的生物监测研究中， 彗星参数和不包括 裂隙的染色体畸变率都显著增加， 而S C E率 没有改变。 然而， 对，勺治疗 1 周后的甲状腺癌病人 的研究发现， M N率显著增加而 D N A链断裂 略 有增加。S a r d a s 等3 C 报道， 母亲吸烟的新 生儿S C E 率显著增加而彗星尾长略有增加 用环磷酞胺治疗脉管炎病人， 结果发现， S C E 率显著增高而D N A损伤没有增加。 彗星试验和细胞遗传学试验结果的不同 是由于这些试验所检测的 D N A改变类型不 同: 彗星试验检测 D N A损伤修复或碱性易变 性位点， 而细胞遗传学试验( M N和C A ) 检测 固定的突变， 这些突变至少持续一个有丝分 裂周期。对于所用的靶细胞类型、 所研究的 遗传毒物特性、 从暴露到分析所消耗的时间 都可能造成彗星试验和细胞遗传学试验敏感 性的不同。例如， 细胞遗传学试验是通过刺 激淋巴细胞增殖， 然后进行观察而获得的资 料， 而彗星试验是基于白细胞或新鲜分离的 淋巴细胞的应答而得到的资料。而且， 由于 新分离的瑞 期淋巴细胞 D N A修复能力很 弱， 而经过培养的淋巴细胞有相对较强的 D N A修复能力， 从而使这两个试验结果很难 进行比较。另外， 由于某些致癌物或诱变剂 具有交联作用， 在形成 D N A - D N A以及 D N A - 蛋白质的交联后， 增加了D N A分子量从而阻 止D N A的迁移， 降低了彗星试验的敏感性。 如在检测环磷酞胺引起的人淋巴细胞 D N A 损伤时， 彗星试验的敏感性仅为 S C E试验的 1 / 1 0 0 。值得注意的是， 不同诱变剂的毒作用 性质不同， 也会影响试验方法的敏感性。如 对金属化合物、 氧化剂， 彗星试验的敏感性高 于A m e s 试验， 而对黄曲霉毒素B I ， 彗星试验 的敏感性低于A m e s 试验。 彗星试验的影响因素 彗星试验易受混杂因素的影响， 如体育 锻炼、 吸烟习惯、 感染、 空气污染、 饮食等。另 外， 在使用全血时， 要考虑到白细胞是由不同 类型的细胞组成的一个混合体， 一类细胞群 的生命期从几周到十几周( B , T淋巴细胞) ， 而另一类细胞群( 粒细胞) 的生命期只有7 - 2 4 h , 因而它们对 D N A损伤的修复能力也有 差异。 年龄也是一个混杂因素。由于在老化过 程中识别和修复D N A损伤的能力降低， 导致 随年龄的增加遗传损伤的积累。在暴露于苯 乙 烯 m l 、 苯及其他有机溶剂 s 7 的工人中， 彗 星尾长随着年龄的增加而增加， 年龄与暴露 年限对D N A 损伤可能存在协同作用。 在对基因多态性的研究中， 职业暴露于 苯乙烯 = b 以 及有机溶剂L 14 : 工人的谷胧甘肤- S 转移酶T I ( G S TTI ) 以及暴露于多环芳烃的 焦炉工和石墨电极生产工人国 的细胞色素 P 4 5 0 1 A I ( C Y P I A I ) 、 谷胧甘肤- S转移酶 M l ( G S T M 1 ) 、 谷胧甘肤- S转移酶 P I ( G S T P 1 ) , G S TT1 的基因多态性与彗星尾长没有相关关 系。但是， 对暴露于环境中多环芳烃的妇女 进行检测发现， 如果把 G S TTI 作为一个单因 素来考虑， 在G S T M I 基因缺失的个体中彗星 参数值显著增加。 鉴于混杂因素的影响， 应将年龄、 性别、 吸烟习惯作为选择人群的标准。在采样当天 记录体育锻炼、 感染、 饮食方面的信息。 7 结语 在人群生物监测研究中彗星试验仍是一 个相对较新的方法， 就目前资料来看， 用彗星 试验进行人群监测除了具备敏感、 快速、 费用 低、 需样本量少( 1 0 一 2 0 P 1 血) 、 能够检测所有 真核细胞等优点外， 彗星试验也存在一些缺 点: ( 1 ) 对D N A改变的生物学意义还不太清 楚， 只是发现大部分损伤在有可能转成固定 突变前就被修复。( 2 ) 与包括碱性解螺旋和 电泳在内的方法学仍存在很大差异。( 3 ) 缺 3 只 2 国外医学卫生学分册2 0 0 3 年第3 0 卷第6 期 少一个合适的一致认可的彗星参数来充分描 绘所观察到的损伤， 观察细胞数从 5 0一2 0 0 不等。( 4 ) 没有一个标准的统计学方法用来 分析和比较细胞对不同化学物的反应。 虽然仍存在不足， 但从彗星试验创立至 今， 人们一直在努力将其不断完善。目前， 国 际上已经提出了在体内、 体外实验中应用彗 星试验的指导方针 3 2 1 ， 推荐了更详细、 更加 规范的在体内实验中应用彗星试验的指导原 则 3 3 ， 为获得有重现性和稳定性的彗星资料 确定了标准。列 c h a r t 等34提出了用W e i b u 1 1 分布来描述彗星资料， 增强 了 不同试验结果 的可比性。这些都将有助于彗星试验更广泛 地应用于人群监测。 2 0 ( 1 0 ) : 2 1 3 3 - 2 1 3 8 P i ta r q u e M , e t a l . J J. M a t R e s , 1 9 9 9 , 4 4 1 ( 1 ) : 1 1 5 - 1 2 7 . F re n z ill i G . e t a lf J . M a t R e s , 2 0 0 1 , 的1 ( 1 - 2 ) : t 3 9 - 1 4 9 . H e ll m a n R , e t a l . J . M u t R e s , 1 9 9 9， 科2 ( 2 ) : 1 2 1 - 1 3 2 张爱华， 等. L J . 中国地方病学杂志， 2 0 (1 0 , 1 9 ( 1 ) : 7 - 9 C a l d e ro n - G a r c i d u e n a s L , e t a l . J . E n v i co n H e a l t h P e rv p e c t , 1 9 9 9 , 1 0 7 : 4 6 9 - 4 7 4 S a r d e s 5 , e t a l仁 J . M u t R e , , 2 0 0 1 , 4 9 0 ( 2 ) 1 2 3 - 1 2 9 A n d e r s o n D , e t a l . J . M u ta g e n e s is , 1 9 9 8 , 1 3 ( 1 ) : 6 7 - 7 3 V ij a y a L a k s h m i A N , s t a l . J 3M a t R e s , 1 9 9 9 , 4 4 2 : 5 3 - 5 8 . o li v e P L , e t a l . J . A c t o n e , 1 9 9 9 . 3 8 ( 7 ) : 8 3 9 - 8 4 4 T u c k A , e t a l纽 J . M a t R e s , 2 0 0 0 , 4 5 9 ( 1 ) : 7 3 名 H u g h e s C M , e t a l . J . M u t a g e n e s i s ， 1 9 9 9， 1 4 ( 1 ) : 7 1 - 7 5 D h a w a n A , e t a l . J . M u t R e s , 2 0 0 1 , 4 7 4 ( 1 - 2 ) : 1 2 1 - 1 2 8 la ffo n R , s t 。 J . T o x ie o l o g y , 2 0 0 2 , 1 7 1 ( 2 - 3 ) : 1 7 5 - 1 9 6 . Z h u C Q , e t a l . J . M u t R e s , 1 9 9 9 , 4 4 4 : 1 . 6 . J e n k i n s o n A M , e t a l . J _ F A S E B J , 1 9 9 9 . 1 3 ( 1 5 ) : 2 1 3 8 - 2 1 4 2 . H a rt m a n n A , c t a l . J . F r e e R a d i c B i o l M a d , 1 9 9 8 , 2 4 ( 2 ) : 2 4 5 - 2 5 1 . S a r d a s S , e t a l . J . M u t R e s , 1 9 9 5 , 3 3 5 ; 2 1 3 - 2 1 7 M a r c a y n s k i B , e t a l . 口 . C a r c in o g e n e s i s , 2 0 0 2 , 2 3 ( 2 ) ; 2 7 3 - 2 8 1 . Tice R R , e t a l . J . E n v i t o n M o l M a t , 2 0 0 0 , 3 5 ( 3 ) : 2 0 6 - 2 2 1 H a r t l m n n A , e t a l . J . M ua a g s n s . is , 2 0 0 3 , 1 8 ( 1 ) : 4 5 - 5 1 . E j c h a rt A , e t a l . J . M a t R e s , 2 0 0 3 , 5 3 4 : 8 5 - 9 2. 叫圈le爪叫l9: 2D双 医圈 24252627邓 区困3lj侧 参考文献: l R y d b e r g B , J o h a n s o nu D N A R e p a ir M e c h a - m s m s M . N e w Y o r k : A c a d e m ic P r e s s , 1 9 7 8 . 4 6 5 - 4 6 8 2 O s tli n g 0 , J o h a n s o . K J . J . B i o l C h e m B i o p h y s R e s C o m m u n , 1 9 8 4 , 1 2 3 : 2 9 1 - 2 9 8 3 丁S in g h N P , e t a l . J . E x p C e ll R e s , 1 9 8 8 , 1 7 5 : 1 8 4 - 1 9 1 4 助，m , e t a l . J I . M a t R e s , 2 0 1 1 2 , 5 1 5 ( 1 - 2 ) : 1 4 7 - 1 5 7. 5 Z h u C Q , e t a l . J . M u t R e s , 2 0 0 1 , 4 9 1 ( 1 - 2 ) : 1 7 3 - 1 8 1. 6 Z h u C Q , e t a l . J . M a t R e s , 2 0 0 0 , 4 7 0 ( 2 ) : 2 0 1 - 2 0 9 1 7 F r a c a s s o M E , e t a l . J . M a t R e s , 2 0 0 2 , 5 1 5 ( 1 - 2 ) ; 1 5 9 - 1 6 9 . 8 G a r a j - V r h o v a c V , e t a l . j . M u t R e s , 2 0 0 0 , 4 6 9 ( 2 ) ; 2 7 9 - 2 8 5 . 仁 9 1邢彩虹， 等. 仁 J . 中华劳动卫生职业病杂 志， 2 0 0 0 , 1 8 ( 5 ) : 2 5 7 - 2 5 9 . 朱志良， 等 【 J . 现代预防医学， 2 0 0 2 , 2 9 ( 4 ) ; 4 9 8 - 4 9 9 . P ita r q u e M , e t a l . J 1 9 5 - 2 0 4. A n d r e o l i C e t a l . 仁 J ) ( 1 ) ; 9 5 - 1 以. A n g e li s K J , e t a 1 . J Mu t R e . , 1 9 9 9 l0llj Mu t R e . , 1 9 9 7 利。 3 3 1 , 3 7 7 3 4 1 E l e e t r o p h o r e s s, 1 9 9 9 以圈
