HPLC法测定三十六味消渴胶囊中靛玉红的含量.pdf
中国热带医学2 0 0 8 年第8 卷第4 期 C H I N A T R O P I C A L M E D I C I N E V o l . 8 N o . 4 A p ri l 2 0 0 8 6 5 9 检验医学I H P L C 法测定三十六味消渴胶囊中靛玉红的含量 常一丁 ， 来国 华 2 ， 李立冬2 摘要: 目 的建立三十六味消渴胶囊中的靛玉红的 H P L C测定方法。方法以捉玉红对照品作对照， 采用 H P L C法测定三十六味消渴胶囊中 的靛玉红含量。色 谱柱: 依利特色 语柱C , e S i n o C h r o m O D S - B P 5 N am ( 4 . 6 m m . 1 . D . x 2 0 0 m m 卜检测波长: 2 8 0 n m ; 流动 相: 0 . 0 2 m o l / L 磷酸二氮钠溶液一 甲醉( 2 2 : 7 8 ) ; 柱i1 . : 4 0 9 C ; 进样量: 1 0 闪， 采用外标 法。 结果 在优化色 谱条件下， 三十六味消渴胶囊中的靛玉红线性范围0 . 0 2 1 4 8 - 0 . 5 3 7 0 w g , r = 0 . 9 9 9 7 ， 回归方程 为: A = 4 7 8 3 . 6 4 4 9 C - 2 4 . 4 2 2 7 ， 含量测定的回收率为: 9 8 . 1 8 % , R S D = 0 . 8 9 %。 结 论所建立的方法专属性强， 操作 简便， 结果准确， 重现性好， 适用于对三十六味消渴胶交中的靛玉红含量的刚定。 关健词: 高效液相色 语法; 艘玉红; 三十六味消渴胶囊; 含量测定 中图 分类号: R 一 3 3文肤标识码: B文章编号: 1 0 0 9 一 9 7 2 7 ( 2 0 0 8 ) 4 一 6 5 9 一 0 3 D e t e r m i n a t i o n o f c o n t e n t s o f i n d i r u b i n i n X i a o k e c a p s u l e s m a d e f r o m 3 6 m e d i c i n a l h e r b s . C H A N G Y i 一 d i n g , L U - A N G u o 一 h u a , L l L i 一 d o n g . ( 1 . A ff ili a t e d H o s p it a l o f B e i h u a U n i v e r s i ty , J i li n 1 3 2 0 0 0 ， J i li n , P . R . C h in a ; 2 . J i li n M u n i c i- p a l I n s t i t u t e f o r D r u g C o n t r o l , J ili n 1 3 2 0 0 1 ， J i li n , P . R . C h i n a ) A b s t r a c t : O b j e c t i v e T o e s t a b li s h e d a h i g h p e r fo r m a n c e li q u id c h r o m a t o g r a p h y f o r d e t e r m i n a t io n o f in d i r u b i n c o n te n t . M e t h o d s T h e i n d i r u b i n i n S a n s h il i u w e i X i a o k e c a p s u l e w a s d e t e r m i n e d w it h H P L C . A c c o r d in g t o L it t C ,s p a d d i n g : S i n o- C h r o m O D S 一 B P 5 N ,r n ; S I Z E : 4 . 6 m m . 1 . D . x 2 0 0 m m ; t h e w a v e l e n g th w a s 2 8 0 n m ; 0 . 0 2 m o V L S o d iu m D i h y d r o g e n P h o s p h a t e 一 D i s o d i u m h y d r o g e n m e t h a n o l ( 2 2 : 7 8 ) a s t h e m o b i l p h a s e . R e s u l t s T h e r a n g e o f c u r v e s o f i n d i r u b i n w a s 0 . 0 2 1 4 8 一 0 . 5 3 7 0 1,t g i n s a n s h i l u w e i x i a o k e c a p s u l e , r = 0 . 9 9 9 7 , R e g r e s s io n e q u a t i o n w a s A 二 4 7 8 3 . 6 4 4 9 C 一 2 4 . 4 2 2 7 , T h e r e c o v e ry o f d e - t e r m i n a t i o n w a s 9 8 . 1 9 % , t h e R S D w a s 0 . 8 9 %. C o n c l u s i o n T h e m e t h o d i s s p e c i a l , s i m p l e a n d c o n v e n i e n t , t h e r e s u l t i s a c c u r r a t e a n d re p r o d u c i b l e , i t i s s u i t a b l e f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f i n d i r u b i n o f t h e S a n s h i l i u w e i X i a o k e C a p s u l e . K e y w o r d s , H P L C ; I n d i r u b i n ; S a n s h i li u w e i x i a o k e C a p s u l e ; Q u a n t i t a t i v e d e t e r m i n a t i o n 三十六味消渴胶囊由西洋参、 麦冬、 熟地黄、 红参、 黄茂、 青 黛 I 等 三 十 六味 药 组 成。 其 作用包括 2 l : 抑制蛋白 质糖基化， 改善微循环障碍、 抑制脂肪过量分解， 治疗脂肪的合成障碍， 抑 制醛糖还原酶活性， 对神经病变导致的手足麻木、 刺痛、 足部的 溃疡坏死等症状， 还可改善伤口不愈的现象和可降低生化药物 对胰岛细胞的损伤， 使胰岛素与受体的亲和力提高， 使血糖保 持稳定。临床上适用于气阴两虚症糖尿病的治疗， 可改善倦怠 乏力， 多食易饥， 烦渴多饮， 口 干舌燥， 尿频量多等症状。 三 十 六 味 消 渴 胶 囊为 降 血 糖类中 成药 制 剂。 法 定标 准 : ( 国 家药监局药品标准) 中 靛玉红的含量采用双波长薄层色谱 扫描法测定， 操作烦琐， 含量测定结果重现性差。为提高质量 控制方 法。 本文采用H P L C法对三十六味消渴胶囊中靛玉红 的含量进行测定。国内外未见报道。该法实验简便、 快速， 结 果准确、 可行。现报告如下。 1 材料与方法 1 . 1 材料 高效液相色谱仪: A g il e n t 1 1 0 0 L C ( 包括脱气机、 四 元泵、 G 1 3 1 3 A s e ri a l # D E 3 3 2 2 9 2 6自 动进样器、 柱温箱、 D A D 检测器) 电子天平( S a r t o ri u s B 咚1 1 D型) 超声清洗器( 叹 - 4 0 0 K D B 型) ， 真空泵( S H B 一 i n 型) , U V一 2 4 5 0 型紫外分光光 度计( 日 本岛津公司) 甲醇( 色谱纯， 加拿大L 7 G 4 11 9 公司) 、 磷 酸二氢钠( 分析纯 ) 、 三氯甲 烷( 分析纯) 、 甲醇 分析纯) 、 重蒸 馏水。靛玉红对照品( 中国药品生物制品检定所， 供含量测定 用) ， 三 十 六味 消 渴 胶囊( 生产 批号: 0 6 0 2 2 3 0 6 0 2 2 1 0 6 0 2 2 2 ) , 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 色谱条件色谱柱: 色谱柱C ,e S i n o C h r o m O D S - B P 5 u n ( 4 . 6 m m x 2 0 0 m m ) ， 检测波 长: 2 8 0 n m流动相: 0 . 0 2 m o l/ 1 磷酸二氢钠溶液一 甲醇( 2 2 ; 7 8 ) 柱温: 2 5 进样量: 1 0 闪流速: 1 . O m l / m i n , 1 . 2 . 2 检测波长的确定据文献报道青黛的其他制剂中 靛玉 红的 测 定 在2 9 2 n m处有最大吸 收 6 一 ， 而靛玉 红H P L C 法测 定 多 采 用 检测 波 长为2 8 0 n m ( 0 ,s 1 。 为 选 择检 测 波 长 我 们 取 靛 玉 红对照品精密称定0 . 0 0 5 3 7 8 ， 用三氯甲 烷溶解稀释至浓度为 2 1 . 4 8 */ml的溶液， 用紫外分光光度计在2 4 0 一 3 5 0 n m扫描， 结果靛玉红对照品在2 9 2 n m附近有最大吸收。 结合文献报 道， 我们采用两个波长( 2 8 0 n m , 2 9 2 n m) 进行比较， 结果在 2 8 0 n m , 2 9 2 n m处的峰面积基本相同， 而在2 8 0 n m处的重现性 最好， 所以 选择2 8 0 n m作为高效液相色谱法测定三十六味消 渴胶囊中靛玉红含量的检测波长。 取本品4 0 粒的内容物， 精密称定， 研细， 混匀， 精密称定约 5 g , 置 索氏 提 取 器中 ， 加 三 氯甲 烷 适 量， 加 热回 流8 h 3 ， 倾出 提 取液， 用适量三 氯甲烷一 甲醇( 1 : 1 ) 混合溶液洗涤 烧瓶， 洗涤 液与提取液合并， 蒸干， 残渣加三氯甲 烷一 甲 醇( 1 : 1 ) 溶液适 辛 作者单位: 1 . 北华大学附属医院， 吉林 吉林 1 3 2 0 0 0 ; 2 . 吉 林市药检所， 吉林 吉林 1 3 2 0 0 1 . 万方数据 6 6 0 C H I N A T R O P I C A L M E D I C I N E V o l. 8 N a 4 A p ri l 2 0 0 8 中国 热带医 学2 0 0 8 年 第8 卷 第4 期 量使溶解， 移至2 . 5 m l 量瓶中， 加三氯甲烷稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 滤液作为供试品溶液。进样1 0 泌， 其色谱图见图t o t h i s i s a t e s t me t h o d m A U D A D 1 8 . S ig = M. 16 脉翔， 1 0 0幽2 6 1 3 1 .D ) 表2 精密度的 实验结果 T a b l e 2 R e s u l t s o f s a m p l e d e t e r m i n a ti o n a # p r e c i s i u m 测定次数峰面积R S D ( %) rn 9 6 1 . 0 0 8 4 8 9 6 2 . 1 5 8 0 2 9 6 1 . 6 0 3 5 8 9 6 2 . 9 4 1 5 3 9 8 1 . 0 2 6 0 0 0 . 8 9 ，几，丹j4尸 6卜叭.吕 J州m川别翻目取“”U“n“”日 她压知“日” 因咧州111|忆| 3530252D L一， J尸呢 ，.、.碑一卜U 一6叫沪 吊7叭寸 nU把，0 叨.几劝 0， 图1 三十 六味消渴胶囊中 靛玉红色谱图 1 . 2 . 3 对照品溶液制备为标准曲线绘制精密称定2 0 干 燥至恒重的 靛玉红对照品0 . 0 0 5 3 7 8 ， 加三氯甲 烷制成每I m l 含 2 1 . 4 8 F i g 的溶液， 滤过( 滤膜) ， 即得。自 动进样测定。结果无 其它干扰， 色谱条件符合要求。 2 . 2 稳定性试验 取1 . 2 . 2 供试品溶液， 装于色谱仪中， 并设 置于0 , 2 , 4 , 8 , 1 2 , 2 4 h 分别自 动进样1 0 闪， 记录峰面积， 试验结 果 R S D 二 1 . 2 9 %， 表明供试品溶液在2 4 h 内是稳定的。 2 . 3 回收率试验取已知靛玉红含量的三十六味消渴胶囊5 份， 分别加人等量靛玉红对照品溶液， 按供试品中靛玉红含量 测定方法测定， 每份平行测定3 次， 计算回 收率结果见 表3 , T t山e 3 加入靛玉 红量( 11 g ) 表3 o f t h e 回收率实验结果 o f C h l o r a m p h e n i c o t h i s i y a 11 5 1 m e t h o d 份数 毗u 。 。 18 . b qF : 8 0 , 1 6 H e f- 3 8 0 . 1 W I D 6 0 t2 6 6 1 .D ) 回收量回收平均回 收R S D ( w g )率( %) 率( %) ( %) 9 8 . 1 8 0 . 7 3 7488164270 月了城一，户OOn八 0户0沙0了0声0 4662525760 00000 7474747474 00000 ，且，内J月，.、曰 募 簇 25劝151050-5 1 0 1 5 w 2 5 mi l 图2 靛玉红对照品色谱图 2 . 4 重现性实验取同一批号( 批号 0 6 0 2 2 3 ) 的三十六味消 渴胶囊约适量， 按 1 . 2 . 2 项下方法配制供试品溶液， 取上述溶 液各1 0 闪， 依法重复测定5 次， 结果见表4 0 表4 重现性实验的实验结果 靛玉红对照品溶液适量， 再设置A 薛e n t 1 1 0 0高效液相色 谱 仪自 动 精 密 量 取 上 述 溶 液 各、 1 , 2 . 5 , 5 , 1 0 , 1 5 , 2 0 , 2 5 闪注 人 色谱仪中， 记录峰面积， 并以靛玉红对照品的峰面积为纵坐标， 以 其进样量为横坐标， 进行线性回 归。( r = 0 . 9 9 9 7 ) 结果表明: 靛玉红对照品溶液在0 . 0 2 1 4 8 - 0 . 5 3 7 0 “范围内线性关系良 好， 回归方程A = 4 7 8 3 . 6 4 4 9 C 一 2 4 . 4 2 7 1 。结果见表1 , T a b l e 4 Re s u l t s o f t h e 测定次数1 2 3 含量1 . 5 4 1 . 5 5 1 . 5 5 1 沈即拌别朋m 4 5 . 5 6 1 . 5 4 R S D % 0 . 5 4 2 . 5 样品 测定取三十六味消渴胶囊3 批， 分别精密称取适 量， 依法配制 供试品溶液， 取供试品溶液和对照品溶液各1 0 闪， 注人液相色 谱仪按外标法计算含量( n 二 5 ) 结果见表5 一 6 , 表 1 标准曲线的实验结果 T a b l e 1 R e s u l t s o f c ri t e ri a c u r v e 表5 对照品测定结果 T a b l e 5 R e s u l t s o f c ri t e r i a 进样量( l a )进样量( W g ) 峰面积 0 . 0 2 1 4 8 0 . 0 5 3 7 0. 1 0 7 4 0 . 2 1 4 8 0 . 3 2 2 2 0 . 4 2 9 6 0 . 5 3 7 0 9 5 . 7 8 2 3 5 5 2 4 3 . 1 0 9 0 2 4 9 3 . 8 2 5 7 4 5 9 6 5 . 7 4 7 5 2 2 1 5 0 4 . 0 9 8 3 6 2 0 1 8 . 5 1 9 0 4 2 5 7 4 . 0 1 4 6 8 测定 次数 峰面积 平均峰 面积 R S D ( % ) 0 . 2 1 4 89 6 1 . 0 0 8 4 8 9 6 2 . 1 5 8 0 2 9 6 1 . 5 8 3 2 50 . 0 8 5 表6 供试品测定结果 T a b l e 6 R e s u l t s a l ' s a m p l e d e t e r m i n a ti o n 取样量 ( 9 ) 峰面积 靛玉红 含量 平均 含量 法定 方法 ( g g / 粒)( 此/ 粒) ( F ig / 粒) 均量。 平装仇 次数 12.55110巧2025 2 结果 2 . 1 精密度试验 取1 . 2 . 2 项中浓度为2 1 . 4 8 W m l 的靛玉 红对照品 溶液 适量， 照标准曲 线绘制中含量测定方法， 设置自 动 进 样1 0 川 ， 重 复 进样5 次， 记录 峰 面 积, R S D = 0 . 8 9 %。 结 果 见表2 0 0 . 4 5 8 7 5 0 . 4 5 8 7 5 0 . 4 5 8 7 5 5 . 0 0 4 1 5 . 仪乃 9 5 . 0 0 4 2 汉 刃. 6 6 4 3 3 0 1 . 1 2 0 2 3 0 4 . 7 1 6 9 8 1 . 5 4 1 . 5 4 1 . 5 5 1 . 5 4 1 . 5 6 注: 法定方法 为双波长薄层色 谱扫描法( 国家药品 监督管理局 标准试行) ， 其规定每粒靛玉红含量不得少于1 . O N ,g o 万方数据 中国热 带医 学2 0 0 8 年第8 卷第4 期 C H I N A T R O P I C A L M E D I C I N E V o l . 8 N o . 4 A p ri l 2 0 0 8 6 6 1 3 讨论 3 . 1 测定波长的选择我们对靛玉红对照品溶液在2 0 0 3 5 0 n m波长范围内进行了光谱扫描， 结果: 靛玉红在2 9 2 n m处 有最大吸收峰， 以2 8 0 n m灵敏度最高， 为了满足分析的要求及 保证分析精度， 我们采用多个波长对靛玉红进行测定， 试验表 明靛玉红在2 8 0 n m处测定结果适宜。 3 . 2 流动相的 选择我们分别采用三种流动相进行筛选， 结 果发现流动相中甲醇的浓度对靛玉红的保留行为影响很大， 随 着有机相比 例的 增大， 保留 时间明显提前。 通过调整流动相的 比例， 最后选定0 . 0 2 m o l / L 磷酸二氢钠溶液一 甲醇( 2 2 : 7 8 ) 为 流动相， 在较短时间内， 使供试品溶液中靛玉红与其它组分能 够达到基线分离， 溶剂亦无干扰。 3 . 3 稳定性考察靛玉红在常温2 4 h 内基本稳定。此外， 光 对靛玉红影响也很大， 样品在整个实验过程中 尽量避光操作。 3 . 4 采用H P L C 法测定三十六味消渴胶囊中 靛玉红的含量与 法定方法比 较， 结果无差异。该法实验简便、 快速， 结果准确、 方法可行。 参考文献: 1 青黛中靛玉红的含量测定【 M . 中国药典， 北京: 化学工业出版社， 2 0 0 5 , 1 3 8 . 2 杨军， 王京霞. 反相高效液相色谱法测定板蓝根、 大青叶中靛蓝、 靛玉红的含量 J . 中药新药与临床药理， 1 9 9 6 , 7 ( 2 ) : 4 3 - 4 4 . 3 三十六味消渴胶囊中靛玉红的测定【 S . 国家药品监督管理局标 准试行. ws 一 5 6 4 7 ( s一 0 6 4 7 ) , 2 0 0 2 一 1 2 一 1 4 王素娥， 宁微微. R P一 H P L C法测定板蓝根浸膏中靛蓝、 靛玉红的 含量 J . 河北大学学报( 自 然科学版) ， 2 0 0 5 , 2 5 ( 5 ) : 5 8 . 5 税王先， 庄元春， 朱烨， 等. 反相高效液相色谱法测定板蓝根注射液 中靛玉红的 含量 J . 时珍国医国药， 2 0 0 5 , 3 ( 1 0 ) : 1 2 8 . 6 曹红， 秦红霖. 高效液相色谱法测定复方青黛片中靛蓝和靛玉红 的含量 O L . 中国色谱网2 0 0 3 年. 7 韩光， 孙茂峰， 王 荔. H P L C 测定板蓝根含片中 靛玉红的含量 . 西北药学杂志， 2 0 0 3 , 1 8 ( 5 ) : 2 0 2 一 2 0 3 . 8 杨军， 王京霞. 反相高效液相色谱法测定板蓝根、 大青叶中 靛蓝、 靛 玉红的含量 J . 中药新药与临床药理， 1 9 9 6 , 7 ( 2 ) : 4 3 一 4 4 . 收稿日 期: 2 0 0 7 - 1 2 - 1 7 检验医 学 注射用阿奇霉素与维生素B 6 注射液配伍稳定性考察 O b s e r v a t i o n o n t h e s t a b i li t y o f a z i t h r o m y c i n f o r i n j c t i o n i n c o m b i n a t i o n w i t h v i t a m i n B 6 f o r i n j e c - t i o n . L U O M i n , L I U H a i 一 c h a n g . ( H a i n a n P r o v i n c i a l N o n 沙e n G e n e r a l B u r e a u H o s p i t a l , H a i k o u 5 7 0 3 1 1 ， H a i n a n , P . R . C h i n a ) 罗敏， 刘海昌 摘要: 目的考察室温下2 4 h内注射用阿奇霉素与维生素B 6 注射液的配伍稳定性。方法采用四苯棚钠沉淀 剩余滴定法， 在室温下2 4 h内 观察注射用阿奇霉紊与维生素B 6 注 射液的配伍溶液的外 观、 p H值及含量测定。 结果 在室温下2 4 h 内 注 射用阿奇霉素与维生素B 。 注 射液的配伍溶液的外观、 p H值无明显变 化， 在6 h , 8 h , 2 4 h 含量有轻 微下降。 结论 注射用阿奇霉素与维生素B 6 注射液的配 伍后2 4 h 内 基本穗定， 建议临床配伍最好在6 h 内 使用。 关 健词: 注射用阿奇霉素; 维生素B 。 注 射液; 四苯硼钠沉淀剩余滴定法; 稳定性 中图 分类号: 8 9 7 8 . 1丈献标识码; B丈章编号: 1 0 0 9 一 9 7 2 7 ( 2 0 0 8 ) 4 一 6 6 1 一 0 2 阿奇霉素是近年来新开发的十五员环大环内醋类抗生素， 因 其抗菌活性强， 不良 反应少， 疗效确切， 广泛应用于临床， 但 在静脉输液过程中往往出现胃 肠道反应而使患者不能耐受， 尤 其是儿科患者。 我院儿科应用中常见注射用阿奇霉素与维生 素B 注射液配 伍， 目 的是减轻其胃 肠道反应。 查阅了 相关资 料， 有关注射用阿奇霉素与维生素B 。 注射液配伍未见文献报 道。 为了 给临床提供安全、 有效的用药依据， 本实验根据临床 用量， 将注射用阿奇霉素与维生素B 。 注射液在0 . 9 %氯化钠 注射液中配伍， 考察其配伍稳定性。 1 材料与方法 1 . 1 仪器与药品、 试剂 P H S 一 2 5型酸度计( 上海分析仪器 厂) ; 分析纯盐酸、 醋酸盐缓冲液( p H 3 . 7 ) ; 注射用阿 奇霉素( 杭 州 澳亚 生物技术有限公司， 批号0 4 1 0 5 0 ) 、 维生素B 。 注射液 ( 广东南国药业有限公司， 批号0 5 0 3 0 8 ) , 0 . 9 %氯化钠注射液 ( 海南国 瑞药业有限公司， 批号0 5 0 4 2 1 ) ， 阿奇霉素标准品( 中 国药品生物制品检定所) 。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 阿奇霉素的测定 采用四苯硼钠沉淀剩余滴定法测定 阿 奇霉素 含量川。 精密称取阿奇霉素适量( 相当于阿奇霉素 4 0 m g ) ， 置5 0 m l 量瓶中， 精密加人醋酸盐缓冲 液( p H 3 . 7 ) 1 0 m 1 , 摇匀。精密加人0 . 0 2 m o V L四苯硼钠滴定液2 0 m l ， 加水稀释至 刻度， 摇匀， 滤过， 弃去初滤液， 取续滤液2 5 m l ， 置于l o o m s 锥形 瓶中， 加澳酚兰指示液1 m l ， 用0 . 0 1 m o V L 烃钱盐滴定液滴定， 滴定结果用空白试验校正， 每1 m l 0 . 0 1 m o V L 烃馁盐滴定液相 . 作者单位: 海南省农垦总局医院药剂科， 海南海口 5 7 0 3 1 1 . 万方数据
