HPI毒力岛缺失的EAGGEC172突变菌株的构建及其功能研究.pdf

·细菌学· HPI 毒力岛缺失的 EAggEC17-2 突变菌株的 构建及其功能研究 胡静俞守义阚飙刘志华 【 摘要 】 目的构建 HPI 毒力岛缺失的 EAggEC17-2 突变株， 初步研究 EAggEC 菌株携带的耶尔 森菌 HPI 毒力岛合成铁载体 Ybt 的功能。方法以 EAggEC17-2 为出发菌株， irp8 基因部分序列作为 同源重组的一侧序列， irp5 基因序列作为同源重组的另一侧序列， 中间插入有氯霉素 （Cm） 抗性基因 （cat 基因） 标记。通过接合转移和同源重组， 构建了缺失约 24 kb 的 HPI 毒力岛功能核心区区域 EA- ggEC17-2 的全岛缺失株 EA85。应用流式细胞技术 （FACS） 检测指示菌株 WA-CS irp1： ： KN （pCJG3.3N） 荧光强度的变化情况， 对 EA85 缺失株和出发菌株进行了合成 Ybt 的功能比较研究。结果成功构建 了 EAggEC17-2 HPI 全岛缺失株 EA85。EAggEC17-2 菌株具有表达 Ybt 的功能， 而缺失株 EA85 丧失了 合成 Ybt 的能力。 结论EAggEC17-2 HPI 毒力岛的缺失， 使 Ybt 的合成彻底阻断。EAggEC 17-2 具有的 合成 Ybt 的功能是由其染色体携带的 HPI 毒力岛所决定的。 【 关键词 】 EAggEC；HPI 毒力岛；耶尔森杆菌素；缺失 Analysis of HPI function by constructing EAggEC17-2 mutant deleted HPI full islandHU Jing*，YU Shou-yi，KAN Biao，LIU Zhi-hua. *Department of Epidemiology，Nanfang Medical University，Guangzhou 510515，China Corresponding author：YU Shou-yi，Email：qingchenLfimmu. com 【 Abstract 】 ObjectiveTo analyze the biosynthesis of siderophore yersiniabactin （Ybt）of high pathoge- nicity island （HPI）in EAggEC strain by constructing EAggEC17-2 mutant deleted HPI full island. Methodsirp8 and irp5 genes by constructed by inserting a selectable substitution with chloramphenicol resistance gene （cat gene） were used as two homologous sequences. By homologous recombination and conjunction mobilization，we screened EA85 mutant which deleted about 24 kb HPI core part from irp8 to irp5 gene. Flow cytometry measurement was used to detect Ybt biosynthesis of EA85 mutant and EAggEC17-2 strain by the changing fluorescent signal of a re- porter strain WA-CS irp1： ： KN （pCJG3.3N） . ResultsWe constructed EA85 strain successfully，a HPI deleted mutant of EAggEC17-2 strain. EAggEC17-2 strain was able to biosynthesize Ybt while EA85 mutant lost the abili- ty. ConclusionDeletion of EAggEC17-2 HPI resulted in the disability of biosynthesizing Ybt. It suggested that Ybt biosynthesis of EAggEC17-2 was depended on the HPI located on its chromosome. 【 Key words 】 EAggEC；High-pathogenicity island （HPI） ；Yersiniabactin；Deletion 基金项目： 国家重点基础研究发展规划项目资助 （G1999054101） 作者单位： 510515 广州， 南方医科大学流行病学教研室 （胡静， 俞 守义） ； 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 （阚飙） ； 南方医科 大学南方医院感染内科 （刘志华） 通讯 作 者： 俞 守 义， Email： qingchen fimmu. com， 电 话： 020- 61648312 细菌毒力岛的发现和研究对了解细菌致病性 和细菌进化过程具有重要意义。近年来的研究发 现， 一种细菌可以携带有多个不同的毒力岛， 同一毒 力岛也可分布在不同的细菌中。耶尔森菌中的一个 与铁载体 耶尔森杆菌素 （yersiniabactin，Ybt） 合 成转运和调节有关的毒力岛被称为强毒力岛 （high pathogenicity island，HPI） 1。在耶尔森菌中， HPI 仅 存在于鼠疫耶尔森菌 （Yersinia pestis） 、 假结核耶尔森 菌 （Yersinia pseudotuMerculosis） 和小肠结肠炎耶尔森菌 （Yersinia enterocolitica，Yen） 1B 型中， 在铁缺乏条件 表达 Ybt， 并为小鼠毒力表型所必需。其 HPI 有一个 约 30.5 kb 的功能核心区， 它携带有与 Ybt 合成、 调 节和摄取有关的基因簇 yMtA、 irp1 irp9 等基因， 天 门冬氨酸 tRNA （asn-tRNA） 是 HPI 的整合位点 1-3。 自 1998 年 Schubert 等 4首次报道在 93%的集聚黏 附性大肠杆菌 （EAggEC） 、 27% 的侵袭性大肠杆菌 （EIEC） 、 5%的产毒性大肠杆菌 （ETEC） 和致病性大 肠杆菌 （EPEC） 临床分离株中检出了 HPI 的 irp2/ fyuA 基因簇以来， 陆续有分子流行病学的调查数据 表明 HPI 毒力岛也广泛存在于不同宿主类型的多种 肠道杆菌中 5-8， 如大肠杆菌、 枸橼酸杆菌、 克雷伯菌 和沙门菌等。 ·196·中华微生物学和免疫学杂志 2005 年 8 月第 25 卷第 8 期Chin J Microbiol Immunol，August 2005，Vol 25，No.8 目前， 对肠道杆菌携带的 HPI 毒力岛的研究， 多 为分子流行病学的现况调查， 其结构研究刚刚处于 起步阶段， 其具体的功能及其与宿主致病性的关系 等方面的研究尚未开展。在不同类型致泻性大肠杆 菌中， HPI 毒力岛在 EAggEC 中高频分布的原因， 目 前尚不清楚。鉴于 HPI 在 EAggEC 中的高频分布， 我们拟以 EAggEC 的模式株 （prototype strain） EA- ggEC17-2 为出发菌株， 从构建 HPI 毒力岛全岛缺失 株的角度， 尽可能破坏 HPI 毒力岛的完整结构， 通过 对出发菌株和缺失株合成 Ybt 的功能比较， 初步研 究 HPI 毒力岛在 EAggEC17-2 菌中所发挥的作用。 材料和方法 菌株与质粒： 所用菌株和质粒见表 1。 表 1 实验用菌株与质粒 Table 1. Strains and plasmids in this study Strains and plasmidsDescriptionSource Strains E. coli JM109recA1supE44endA1hsdR17thi（lac-proAB）Our lab F' traD36proAB+ lacIqlacZM15 E. coli SM10pirthi-1， thr， leu， tonA， lacY， supE，Our lab recA： ： RP4-2-Tc： ： Mu，Kmrpir YenWA （0： 8） Prototype of Yesinia enterocoliticaChina CDC WA-CS irp1： ： KanrDerivative of WA-CS，NalrSmrKmrProf. Rakin 2 EAggEC 17-2Prototype of enteroaggregative E. coli，HPI+China CDC EA85EAggEC17-2irp8-irp5This study Plasmids pUC18Cloning vector，AmprOur lab pCOS5Cosmid plasmid，CmrOur lab pKNG101Suicide plasmid，mob RP4 Ori R6K，SacB，SmrThis study pH8pMD18-T irp8This study pH5pUC18 irp5This study pH85pUC18 irp5-cat-irp8This study pKH85pKNG101 irp5-cat-irp8This study 在 LB 平板或肉汤中增殖菌株， 小肠结肠炎耶 尔森菌 （Yen） WA 株 （0： 8） 在 28条件下培养， 大肠 杆菌在 37培养。抗生素使用浓度分别为， 氨苄青 霉素 （Ap）100µg/ml， 氯霉素 （Cm）20µg/ml， 链霉素 （Sm） 50µg/ml， 复方甲基异噁唑 （SXT） 100µ g/ml。铁 缺陷培养基 LBD： 1%胰蛋白胨， 0.5%酵母提取物， 0.5%的 NaCl， 加 2-2'-双吡啶 （2-2'-dipyridyl） 使终浓 度为 200µmol/L， 调 pH 为 7.4。 主要试剂： PCR 试剂、 限制性内切酶、 T4 DNA 连 接酶及 dTTP 为大连宝生物工程公司产品； 蔗糖为上 海生工公司产品； 2-2'-dipyridyl 为 Sigma 产品； IPTG、 X-gal 为 PROMEGA 公司产品。引物为上海生工公 司合成。 PCR 扩增： 本研究选择了 irp8 和 irp5 基因作为 同源重组的靶序列， 这两个同源序列之间跨越了 HPI 毒力岛约 24 kb 的区域 （图 1） ， 包含有 HPI 毒力 岛除 fyuA 之外的 ybtA、 irp2 和 irp6 3 个启动区， 以 及 Ybt 合成转运和调控的某些必需基因， 这个区域 的缺失， 将导致 HPI 毒力岛功能的丧失。 图 1 构建 EAggEC17-2 全岛基因缺失株的缺失区域示 意图 Fig 1. In-frame deletion area of EAggEC 17-2 mutant de- leted HPI full island 根据小肠结肠炎耶尔森菌已知 HPI 基因序列设 计引物， 以 YenWA （0： 8） 染色体 DNA 为模板。引物 序列见表 2。 重组自杀质粒 pKH85 的构建： 质粒提取， 酶切， DNA 片段连接以及转化按常规方法 12或按产品推 荐的条件进行， 构建过程见图 2。 图 2 重组自杀质粒 pKH85 构建示意图 Fig 2. Construction of recombinant suicide plasmid pKH85 质粒 DNA 的接合转移： 参照文献 13 。 EAggEC17-2 全岛基因缺失株的筛选： 将携带有 质粒 pKH85 的 SM17-1pir 菌株与 EAggEC17-2 进行 接合转移， 突变株的遗传特性应符合为： CmrSXTr SacBrSms， 因此， 直接在含有 25µg/ml 氯霉素、 150 µg/ml SXT、 含 20%蔗糖的培养基上筛选三重抗性重 组株， 将上述平板上长出的菌落平行接种于含有 50 µg/ml 链霉素 LBA 平板上， 挑选 Sm s 菌落进行鉴定。 ·296·中华微生物学和免疫学杂志 2005 年 8 月第 25 卷第 8 期Chin J Microbiol Immunol，August 2005，Vol 25，No.8 表 2 本研究工作中所用引物 Table 2. Primers used in this research Fragment amplifiedLength （bp）PrimersReference irp95295'-GCTGTCCTGAAATACGGA-3'3 ，GenBank No： AJ132668 5'-AGTGCGCTCGTTTATGTT-3' irp811765'-TGTCATCAGTTCTCTTGCCG-3'3 ，GenBank No： AJ132668 5'-CTGGTATCGGCGCTGTCTAT-3' irp615885'-TCACCATTGAGAGACGATGC-3'3 ，GenBank No： AJ132668 5'-TTTCCTCTCTGGCAGGTGAT-3' ybtA5555'-AGTGCGCTCGTTTATGTT-3'3 ，GenBank No： AJ132668 5'-GCAGCAGTTTCTGACGTT-3' irp22675'-AAGGATTCGCCTGTTACCGGAC-3'9 ，GenBank No： L18881 5'-TCGTCGGGCAGCGTTTCTTCT-3' irp17995'-CCGGTTATTGTGAAGGTT-3'2 ，GenBank No： Y12527 5'-GTGAATGTTACGGCACTAA-3' irp516365'-CGCGGATCCGGTACCAGGTGACGCATGAATTCTTC-3'2 ，GenBank No： Y12527 5'-AACTGCAGTCAACCTGTTTCGGGTCGG-3' fyuA9485'-GCTTTATCCTCTGGCCTT-3'10 ，GenBank No： Z35486 5'-GGCATAACGATTAACG-3' cat8015'-CGCAGCACCAGGCGTTTAAG-3' 5'-GATCGGCACGTAAGAGGTTC-3' EAEC6235'-CTGGCGAAAGACTGTATCAT-3'11 5'-CAATGTATAGAAATCCGCTGTT-3' 流式细胞术 FACS 检测 Ybt 的合成： 在铁缺乏 条件 下（LBD 培 养 基）培 养 报 告 菌 株 WA-CS irp1： ： KN （pCJG3.3N）24 48 h， 在 LB 及 LBD 培养 基分别培养待测菌株， 将培养上清按 1:1 的比例分 别加入培养的该报告菌株中， 再加入 2 倍体积新鲜 配制的 LBD 培养基， 继续培养过夜， 取 1 ml 菌液集 菌沉淀， 用 1 ml 生理盐水悬浮， 进行 FACS 检测。流 式细胞仪为 Becton Dickinson 公司产品， 型号为 FAC- SACalibur， 每次测试计数 50 000 个细菌。 结果 1. 重组自杀质粒 pKH85 的构建及鉴定： 将纯 化后的 irp8、 irp5 基因的 PCR 扩增产物分别克隆入 pMD18-T、 pUC18 载体中， 经含 IPTG/X-gal 及氨苄青 霉素的 LB 平板筛选白色菌落， 克隆子分别命名为 pH8 和 pH5。 irp8 基因内有一平端限制性 EcoRV位点 （323 bp） ， 用 EcoRV酶切 pH8， 将 cat 基因插入在 irp8 基 因的 EcoRV位点， cat 基因两侧分别有约 843 bp 和 322 bp 左右的 irp8 基因的部分序列， 为了保证同源 重组的有效进行， 必须以 irp8-cat-irp5 的顺序排列， 因此我们选择 irp8 约 843 bp 的一侧序列作为同源 序列。为了得到连有 cat 基因和 843 bp 的 irp8 基因 序列的 DNA 片段， 先通过 PCR 扩增判断 cat 基因在 irp8 基因中的插入方向， 分别用 cat 基因的 2 条引物 与 irp8 的下游引物扩增， 将这个片段命名为 irp8- cat 基因片段 （图 3） 。 图 3 irp8-cat-irp5 排列示意图 Fig 3. The order of irp8-cat-irp5 用 Sma消化 pH5， 纯化回收， 与 PCR 扩增的 irp8-cat 基因片段平端连接， 得克隆子 pH85。因所 需的克隆子必须为 irp8-cat-irp5 的顺序排列， 我们 用 irp5 基因的下游引物和 cat 基因的上游引物进行 PCR 扩增来鉴定插入片段的方向， 符合需要者， 应扩 增出约 2423 bp 的 DNA 片段， 将之命名为 cat-irp5 片段。pH85 克隆子中应插入 1600 左右的 irp8-cat 基因片段结构基因， 且 cat 基因位于 irp8 与 irp5 之 间， 将这 3 个片段命名为 irp8-cat-irp5 片段 （图 3） 。 由于 irp5 基因和 irp8 基因内部各含有一个 Sal位点， 如果用 Sal酶切 pH85， 可切下约 3 kb 的 irp8-cat-irp5 片段， irp8 基因侧的序列约为 650 bp， irp5 基因侧的序列约为 1450 bp， 可保证同源重组的 有效进行， 将此片段克隆入自杀质粒 pKNG101 中， 命名为 pKH85， PCR 及酶切鉴定结果见图 4。 2. EAggEC17-2 全岛缺失株 EA85 的筛选和鉴 定： 有无合适的筛选标记是决定能否进行接合转移 ·396·中华微生物学和免疫学杂志 2005 年 8 月第 25 卷第 8 期Chin J Microbiol Immunol，August 2005，Vol 25，No.8 图 4 pKH85 的酶切及 PCR 结果 Fig 4. The results of restriction nuclease and PCR of pKH85 1：pKH85 cat PCR；2：pKH85 Sal； 3：pKH85 BamH；4：pH85 Sal；5：pKNG101 Sal；M：-Hinddigest 的重要条件。通过药敏实验， 发现 EAggEC17-2 （受 体菌） 对氯霉素 （Cm） 敏感且具有 SXT 抗性， 而携带 pKH85 的 E. coli SM10pir （供体菌） 对 SXT 敏感， 因 此可将质粒 pKH85 从 SM10pir 与 EAggEC17-2 进行 接合转移。筛选符合缺失株遗传特性 CmrSXTr SacBrSms的单菌落进行鉴定， 并同时筛选 CmrSXTr 接合子 （conjugon） 作为对照。缺失株和接合子的 EAggEC 特异序列 EAEC、 cat 基因 PCR 扩增均为阳 性， 说明它们为整合有 cat 基因的 EAggEC 菌株； 只 有缺失株的 irp8-cat 片段及 cat-irp5 片段 PCR 扩增 均为阳性， 且大小与预期一致， 而在接合子中只能扩 增出其中一个； 几个随机选择的缺失区域的内部基 因 （如 irp1、 irp2、 ybtA、 irp6） 在缺失株中扩增均为阴 性， 缺失区域的外部基因 （如 irp9、 fyuA） 在缺失株中 扩增均为阳性， 且大小与预期一致， 而接合子这些基 因的扩增均为阳性， 说明这个缺失株已按预期缺失 了 HPI 毒力岛， 同时没有影响到外部基因的完整性， 将这个缺失株命名为 EA85。缺失株 EA85 的 PCR 鉴定结果见图 5。 3. 流式细胞术 FACS 检测 EA85 突变株 Ybt 的 合成： EAggEC17-2 HPI 的全岛缺失株 EA85 在结构上 缺失了包括从 irp8 irp5 基因的约 24 kb HPI 毒力 岛功能核心区的区域， 其中， Ybt 合成的必需基因 irp1、 irp2 等已完整地被缺失掉， 从理论上讲， 这些基 因的缺失将直接导致 Ybt 合成的阻断。我们通过 FACS 检测 EAggEC17-2 和 EA85 对指示菌株 WA-CS irp1： ： KN（pCJG3.3N）gfp 的表达情况， 研究 HPI 毒 力岛缺失对 Ybt 合成的影响。结果表明， 在 LB 和 LBD 条件下， EA85 均不能合成 Ybt， EAggEC17-2 在 LBD条件下有 Ybt 的合成 （图 6） 。结果提示， EA- ggEC17-2 具有的合成铁载体 Ybt 的功能是由其染色 体携带的 HPI 毒力岛所决定的， 这一区域的缺失， 使 Ybt 的合成彻底阻断。 图 5 EA85 的 PCR 鉴定结果 Fig 5. PCR amplification results of EA85 A：M：DL2000；1：EAggEC17-2 EAEC PCR；2：EA85 EAEC PCR； 3：pKH85 EAEC PCR； 4：EAggEC17-2 irp9 PCR； 5：EA85 irp9 PCR； 6： pKH85 irp9 PCR；7：EAggEC17-2 fyuA PCR；8：EA85 fyuA PCR；9： pKH85 fyuA PCR；10：EAggEC17-2 cat PCR；11：EA85 cat PCR；12： pKH85 cat PCR B：M：DL2000；1：conjugon cat-irp5 PCR；2：EA85 cat-irp5 PCR； 3：EAggEC17-2 cat-irp5 PCR；4：conjugon irp8-cat PCR；5：EAggEC17- 2 irp8-cat PCR； 6：EA85 irp8-cat PCR； 7：conjugon irp8 PCR； 8：EA85 irp8 PCR； 9： EAggEC17-2irp8 PCR； 10： EA85irp5 PCR； 11： EAggEC17-2 irp5 PCR；12：pKH85 irp5 PCR C：M：DL2000；1：EA85 irp2 PCR；2：EAggEC17-2 irp2 PCR；3： conjugon irp2 PCR；4：EA85 irp1 PCR；5：EAggEC17-2 irp1 PCR；6： conjugon irp1 PCR；7：EA85 ybtA PCR；8：EAggEC17-2 ybtA PCR；9： conjugon ybtA PCR； 10：EA85 irp6 PCR； 11：EAggEC17-2 irp6 PCR； 12： conjugon irp6 PCR 讨论 EAggEC 是 1987 年 Nataro 等 11， 14从智利腹泻儿 童的粪便中分离出的一种大肠杆菌， 因其在组织培 养中能以 “集聚样” 或 “砖堆样” 的方式黏附于组织培 养的上皮细胞株 HEp-2 而得名。现认为 EAggEC 不 仅是发展中国家也是发达国家引起腹泻的重要病 原， 主要引起儿童持续性腹泻， 可以引起儿童脱水、 营养不良甚至死亡， EAggEC 也可引起成人腹泻， 还 可能是引起旅游者腹泻的一种病原 11。目前， 关于 EAggEC 具体的致病过程尚不清楚， 其致泻机理的研 究远落后于其他几类致泻性大肠杆菌， 以现有的研 ·496·中华微生物学和免疫学杂志 2005 年 8 月第 25 卷第 8 期Chin J Microbiol Immunol，August 2005，Vol 25，No.8 图 6 LBD 培养条件下 Ybt 表达的 FACS 检测结果 Fig 6. Fluorescence of FyuA-GFP in LBD grown condition M1 specified the range of background of fluorescence signal；M2 speci- fied the range of enhanced florescence signal；the number in each graph repr- esent the percent of bacteria whose florescence signal was enhanced in LBD culture A： WA-CS irp1： ： KN （pCJG3.3N）（negative control） ；B：WA （positive control） ；C：EAggEC17-2；D：EA85 究结果， 尚不能对 EAggEC 的致病性进行完整的描 述。HPI 在 EAggEC 菌中是否能够正常表达 Ybt 铁 摄取系统， 是否能够 发 挥 原 有 的 功 能？HPI 在 EAggEC的致病过程中扮演何种角色？这些问题的 解决， 不仅有助于揭示致病大肠杆菌中 HPI 的结构、 功能和来源， 而且对大肠杆菌致病机制的研究具有 重要意义。 铁作为一个必需的辅助因子参与酶促反应和代 谢反应。为研究 EAggEC 携带的耶尔森菌 HPI 毒力 岛是否具有表达铁载体 Ybt 的功能活性， 本研究根 据同源重组的原理， 应用自杀质粒 pKNG101 系统， 首先构建了含有 irp8 部分序列和 irp5 基因的重组 自杀质粒 pKH85。并成功筛选并获得了 HPI 全岛缺 失株 EA85， 为研究 HPI 毒力岛基因的功能提供了合 适的宿主菌。 耶尔森菌仅有 Ybt 内源性的铁摄取系统， 对于 Ybt 合成的检测相对容易， 鼠疫耶尔森菌只有含有 Ybt 系统才能在 37时在铁缺陷培养基上具有生长 能力； 小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌具有 CAS 阳性表型 3， 即在含铁指示剂铬苯胺醇 （chrom azurol S，CAS） 平板上26生长2 d， 菌落周围可见一 清晰可见的橘红色环， 可依此检测 Ybt 的合成。但 绝大多数大肠杆菌能合成多个铁载体 15， 如肠螯合 素 （enterobactin） 、 产气菌素 （aerobactin） 等， 铁缺乏培 养条件下仍具生长能力， 常用的 CAS 平板 16检测铁 载体合成的方法尚不足以区分出 Ybt 的特异性表达 与否。随着对 HPI 功能基因之间调控作用的进一步 研究发现， 编码 Ybt 受体 FyuA 的 fyuA 基因， 其表达 受细胞外 Ybt 水平的正向调节， Ybt 的存在可促进 fyuA基因的高效表达 2。Pelludat 等2构建了融合 有 FyuA 的 267 个氨基酸 （包括 fyuA 上游调节序列 和假想的 YbtA 结合位点） 及指示基因 gfp 编码的绿 色荧光蛋白 GFP 的 fyuA-gfp 质粒 pCJG3.3N， 并将之 转化入 WA-CS irp1： ： KN 菌株 2中。该菌株是在消 除了 pYV 毒力质粒的基础上， 人工构建的小肠结肠 炎耶尔森菌 WA 株的 irp1 突变株， 因 irp1 是合成 Ybt 的必需基因， irp1 突变使其丧失了合成 Ybt 的能 力， 故可作为 Ybt 活性检测的指示菌株。其原理是 将待测菌株的培养上清加入培养的该指示菌株， 如 果该菌株表达 Ybt， 在有 Ybt 存在的情况下， 会使 pCJG3.3N 的 fyuA-gfp 表达增强， 通过 FACS 技术检 测 gfp 的表达情况， 即可间接反映 Ybt 的合成情况。 本研 究 借 助 Rakin 等 构 建 的 指 示 菌 株 WA-CS irp1： ： KN （pCJG3.3N） 检测系统， 通过 FACS 技术检 测 gfp 的表达来间接反映 Ybt 的合成情况。对 EA85 缺失株和 EAggEC17-2 出发菌株的 Ybt 合成检测的 比较结果表明， EAggEC17-2 菌株具有表达 Ybt 的功 能，而 EA85 丧 失 了 合 成 Ybt 的 能 力。 提 示 EAggEC17-2 HPI 毒力岛的缺失， 使 Ybt 的合成彻底 阻断。 综上 所 述，通 过 本 实 验 研 究 我 们 发 现， EAggEC17-2 具有的合成铁载体 Ybt 的功能是由其染 色体携带的 HPI 毒力岛所决定的。在耶尔森菌中， HPI 毒力岛的存在与其致病性密切相关， 其 Ybt 的 功能失活直接导致菌株致小鼠毒性的明显下降。既 然EAggEC17-2 携带的 HPI 毒力岛具有合成铁载体 Ybt 的能力， 是否也决定着细菌毒力或致病力的强 弱？其在致病过程中扮演何种角色？将是我们进一 步研究的重点内容。 志谢： 感谢军事医学科学院微生物流行病研究所免疫室彭虹老 师在 FACS 检测过程中提供的帮助！ 参考文献 1Carniel E，Guilvout I，Prentice M. 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