NA+,K+-ATP酶不参与慢性心衰豚鼠心肌细胞钙瞬变的减小.pdf

中国药理学通报C h i n e s e 懒删B u l l e t i n 2 0 0 9F e b ；2 5 ( 2 ) ：2 2 1 4 ·2 2 1 · N a + ，K + - A T P 酶不参与慢性心衰豚鼠心肌细胞钙瞬变的减小 齐亚娟L 2 ，白静2 ，李吉和1 ，李树民1 ，郭会彩1 ，刘雪莉1 ，王永利1 ( 河北医科大学药理学教研室，河北石家庄0 5 0 0 1 7 ；2 华北煤炭医学院药理学教研室，河北唐山0 6 3 0 0 0 ) 中国图书分类号：R - 3 3 2 ；R3 2 2 1 1 ；R3 4 5 6 ；R3 4 8 2 ； R5 4 1 6 1 0 2 2 ；R9 7 7 3 ；R9 7 7 6 文献标识码：A 文章编号：1 0 0 1 1 9 7 8 ( 2 0 0 9 ) 0 2 0 2 2 1 0 4 摘要：目的研究N a + ，K + - A T P 酶是否参与慢性心衰 ( c H v ) 豚鼠心肌细胞钙瞬变的减小。方法采用降主动脉 缩窄( C D A ) 法和异丙肾( I S O ) 法建立豚鼠慢性心衰模型；酶 解法急性分离左室心肌细胞；采用无机磷法测定, L , W L 细胞膜 N a + K + A T P 酶活性，采用R T - P C R 和W e s t e r nb l o t 检测 C H F 心肌+ ，K + 一A T P 酶O t l 、( I t 2 亚单位在m R N A 水平和蛋 白水平的表达。结果C D A 法致心衰后N a + ，K + 一A T P 瑾，、 嘞亚单位在m R N A 水平均明显减少，I S O 法仅I 明显减少， 无变化；但两种方法致豚鼠C H F 后，心肌细胞N a + ，K + 一A T P 酶。亚单位在蛋白水平的表达及酶活性均无改变。结论 豚鼠C H F 后钙瞬变的减小，没有N a + ，K + 一A T P 酶的参与。 关键词：豚鼠；慢性心衰；钙瞬变；N a + ，K + 一A T P 酶 N a + ，K + 一A T P 酶即钠泵广泛存在于人和动物的 各个组织，作为离子泵，它将3 个N a + 移出细胞外， 并将2 个K + 移人细胞内，从而在维持细胞内外N a + 和K + 的稳态中起着关键作用，同时也通过N a + C a 2 + 交换体间接调控着细胞内C a 2 + 的活动。慢 性心衰( C H F ) 后心肌细胞收缩力进行性减退，而 C a 2 + 是介导心肌细胞收缩始动的关键环节，且细胞 内钙瞬变的大小与心肌细胞收缩力的变化相对应。 本室前期研究表明，豚鼠C H F 后心肌细胞钙瞬变减 小2 | 。 收稿日期：2 0 0 8 0 9 0 2 ，修回日期：2 0 0 8 1 l 一2 3 基金项目：河北省自然科学基金资助项目( N o3 0 1 3 6 0 ) 作者简介：齐哑娟( 1 9 7 0 一) ，女，博士，副教授，研究方向：心脑血管 药理学，E - m a i l ：y a j u a n q i y a h o o C O I I I c n ； 王永利( 1 9 4 7 一) ，男，博士，教授，博士生导师。研究方向： 心脑血管药理学，通讯作者，E - m a i l ：w a n g y l 5 2 h e i n f o n e t 有报道，人心衰后N a + ，K + A T P 酶活性下降， 是造成心律失常电特性改变的原因之一 3 】，但家兔 心衰后，尽管细胞内N a + 升高，N a + ，K + 一A T P 酶的泵 功能并未改变H J 。那么豚鼠心衰后细胞内钙瞬变 减小是否由于C H F 对心肌N a + ，K + A T P 酶的改变 所致呢7 钠泵是由仅、B 、1 亚基组成的寡聚体。其中仅 亚基执行着主要的泵功能口】。已发现豚鼠心肌细 胞只表达仪l 和d 2 亚单位，且0 t 。m R N A 的量远大于 a 2 的量旧oo 本实验采用C D A 和I S O 法建立豚鼠C H F 模 型，检测C H F 心肌N a + ，K + - A T P 酶活性的变化，及 其d ，、仅：亚单位在m R N A 水平和蛋白水平的表达。 以考察N a + ，K + 一A T P 酶是否参与心衰后心肌细胞 内钙的变化。 1 材料与方法 1 1 药品与试剂 N a + ，K + 一A T P 酶试剂盒( 南京 建成生物工程研究所) ，反转录试剂盒( 美国P r o m e g a 公司) ；P C R 试剂盒( 加拿大B BI 公司) ；小 鼠抗大鼠钠泵仅。亚单位及兔抗鼠钠泵O t ：亚单位多 克隆抗体( S a n t aC r u z 公司) ；生物素标记的羊抗兔 和羊抗鼠I g G 和辣根酶标记链酶卵白素及D A B 显 色试剂盒( 北京中杉试剂公司) ；B C A 蛋白定量试剂 盒( P i e r c e ) 。其它试剂均为分析纯。 1 2 制备豚鼠C H F 模型C H F 模型制备方法参 考文献心J 。6 豚鼠，体质量2 5 0 3 0 0g ，由河北医 科大学实验动物中心提供。设C D A 和I S O 对照组 各1 0 只，C D A 和I S O 模型组各1 2 只，各组同室饲 养。 1 3 单个心室肌细胞的急性分离参照文献【2 1 采 用L a n g e n d o r f f 灌流法，此法可得到约8 0 呈杆状的 成活心肌细胞。 e x p r e s s i o no fp 2 1g e n ew e r ei n c r e a s e dg r a d u a l l y ，w h i l e C D K 4 ，E 2 F 1a n db a xg e n ew e r ed e c r e a s e d C o n e l u s i o n C u rm a y b ee f f e c t st h er e d i s t r i b u t i o no fc e l lc y c l e a n da p o p t o s i so fs e r u m d e p r i v e dP C I 2c e l l si n d u c e db y A 1 3 笱- 3 5 ，t h r o u g hi n c r e a s i n gt h em R N Aa n dp r o t e i ne x - p r e s s i o no fp 2 1 ，a n dd e c r e a s i n gt h em R N Aa n dp r o t e i n e x p r e s s i o no fC D K 4 ，E 2 F 1a n db a ng e n e K e yw o r d s ：c u r c u m i n ；A B 2 5 - 3 5 ；P C I 2c e l l ；t h ee x p r e s s i o no fg e n e ；p 2 1 ；C D K 4 ；E 2 F 1 ；b a x 万方数据 ·2 2 2 · 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n2 0 0 9F e b ；2 5 ( 2 ) 1 4 心肌细胞膜N a + ，K + - A T P 酶活性检测采 用无机磷法，按文献“ 1 及A T P 酶试剂盒提供的方法 进行。 1 5R T - P C R 法测定心肌细胞N a + ，K + ·A T P 酶仅 亚单位m R N A 水平的改变 8 9 1将细胞悬液离心 ( 5 0 0r ·m i n ，3r a i n ) ，弃去上清，按试剂盒说明提 取总R N A ，逆转录，常规P C R 扩增，2 琼脂糖凝胶 电泳，0 1 E B 溶液显色，紫外灯下观察并照相， B i o l D 图像分析系统分析目的基因电泳条带的光密 度值，G A P D H 作内标。所有引物均由北京赛百盛基 因公司合成，引物序列见T a b1 。 1 6W e s t e r nb l o t 检测N a + ，K + - A T P 酶蛋白的表 达【引将细胞进行常规W e s t e r nb l o t 检测，1 0 S D S P A G E 电泳分离蛋白，采用P V D F 膜进行半干 转膜，一抗为小鼠抗大鼠钠泵O t 。亚单位及兔抗鼠钠 泵0 【：亚单位多克隆抗体，二抗为生物素标记的羊抗 兔和羊抗鼠I g G ，D A B 试剂盒显色，B i o l D 图像分析 系统分析显色条带的光密度值。G A P D H 作内标。 1 7 统计学方法实验数据以石±s 表示，两组数 据间的比较采用S P S S 统计软件进行双侧t 检验。 2 结果 2 1 豚鼠心衰后心肌细胞膜N a + 。K + - A T P 酶活 性的变化结果显示，两对照组N a + ，K + 一A T P 酶活 性分别为( 1 2 2 ±0 2 0 ) 和( 1 2 6 士0 1 9 ) t L m o l P i · m g P r o ·h ，差异无显著性( P 0 0 5 ) 。C D A 法 和I S O 法所致豚鼠心衰后N a + ，K + 一A T P 酶活性分 别为( 1 0 3 ±0 2 3 ) 和( 1 3 3 ±0 3 6 ) I 山m o l P i ·m g 。1 P r o ·h ，与对照组比较差异均无显著性( 尸 0 0 5 ) 。 · 2 2 豚鼠心衰后心肌细胞N a + ，K + - A T P 酶码、她 亚单位在m R N A 水平的变化N a + ，K + 一A T P a s e0 t 与0 t ：亚单位的扩增产物均呈单一条带，大小与理论 值( 分别为2 4 7b p 与2 6 4b p ) 吻合( F i g1 A 和F i g 2 A ) 。C D A 法所致豚鼠心衰后N a + ，K + 一A T P 酶碰，、 O t ，亚单位在m R N A 水平的表达量均下降( P 0 0 5 ) ，结果见F i g3 ；仅： 亚单位未被检测到，可能因为O t ：亚单位在豚鼠心脏 表达量极少之故。 A B F i g1 T h ec h a n g e so ft h eN a + ，K + - A T P a s ea I s u b u n i tm R N Ae x p r e s s i o nb yR T - P C R a n a l y s i si n n o r m a la n dC H I Cg u i n e ap i gl e f tv e n t r i c l e L a n e1 ：M a r k e r ；L a n e2a n d4 ：C o n1a n dC o n2 ；L a n e3 ：C D A ：I J a n o 5 ：I S O ( C o n1 ：s h s , mg r o u p ；C D A ：c o n s t r i c t i n gt h ed e s c e n ta o r t ag r o u p ： C o n2 ：1 5 0c o n t r o lg r o u p ；I S O ：i s o p r o t e r e n o l i n j e c t e dg r o u p ) A ：A g a r o g e le l e c t r o p h o r e s i sp h o l o 争a p ho ft h ee x p r e s s i o no fN a + ，K + - A T P a s e 口， m R N A B ：T h eq u a n t i t i v e a n a l y s i so fN a + ，K + 一A T P a s eO t ，s u b u n i tm R N Ae x p r e s s i o nb yR T P C R ¨P 0 0 1 埘C o n l ，6 P O O l 埘C 帆2 1 O O O O Qu喜ur一号藿羞gDTId廿Al苗la冒 万方数据 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n2 0 0 9F e b ；2 5 ( 2 ) ·2 2 3 · A B C o n IC D A C o n 2I S O F i g2T h ec h a n g e so ft h eN a + ，K + - A T P a s e 嘞s u b u n i t m R N Ae x p r e s s i o nb yR T - P C Ra a a t y s l si nn o r m a la n d C H I Cg u i n e ap i gl e f tv e n t r i c l e I A H i e1 ：M a r k e r ；L a n e2a n d4 ：C o n1a n dC o n2 ；L a n e3 ：C D A ；L a l e 5 ：I S O ，( C o nl ：s h a l l 3g r o u p ；C D A ：c o n s t r i c t i n gt h ed e s c e n ta o r t ag r o u p ； C o n2 ：I S Oc o n t r o lg r o u p ；I S O ：i s o p r o t e r e n o l i n j e c t e dg r o u p ) A ：A g a r o s e g e le l e c t r o p h o r e s i sp h o t o g r a p ho ft h ee x p r e s s i o no fN a + ，K + - A T P a s e “2 m R N A B ：T h eq u a n t i f i v e a l y s i so fN a + ，K + 一A T P a s ed 2s u b u n i tm R N A e x p r e s s i o nb yR T P C R P O 0 1 C o n l 3 讨论 N a + ，K + A T P 酶通过其离子转运功能，在维持 细胞内外N a + 和K + 的稳态、以及通过N a + C a “交 换间接调控细胞内c a 2 + 的活动中起着重要作用。 豚鼠心衰后心肌细胞钙瞬变减小，因此，有必要考察 心衰后N a + ，K + A T P 酶活性及其表达的变化，从而 检测其是否参与心衰后心肌细胞内钙的变化。 由于N a + ，K + A T P 酶在细胞质内合成后分布 到细胞膜上才能发挥功能，故本实验建立豚鼠C H F 模型后，提取左室心肌细胞膜，然后检测N a + ，K + 一 A T P 酶活性及其在蛋白水平表达的变化。结果表 明，两种方法致豚鼠C H F 后，左室心肌细胞膜N a + ， K + - A T P 酶活性及其a 。亚单位在蛋白水平的表达 量均没有明显变化。但尽管多次改变上样量、抗体 浓度、细胞膜量等因素，均不能在蛋白水平检测出 1 4 喜1 2 a 景1 0 工 凸 尝0 8 望 80 6 皇o 4 0 2 Z 0 O B C 0 1 1 1C D AC o n 2I S O F i g3 T h ed t a n g e so ft h eN a + ，K + - A T P s s eqs u b u n i t b yW e s t e r ni m m u n o b l o ta n a l y s i si nn o r m a la n dh e a r t f a i l u r eg u i n e ap i gl e f tv e n t r i c l e C o n1 ：s h a mg r o u p ；C D A ：c o n s t r i c t i n gt h ed e s c e n ta o r t ag r o u p ；C o n 2 ：I S Oc o n t r o lg r o u p ；I S O ：i s o p r o t e r e n o l ·i n j e c t e dg r o u p A ：S D S ·P A G Ee 1 e c t r o p h o r e s i sp h o t o g r a p ho ft h ee x p r e s s i o no fa ls u b u n i ti np r o t e i n B ： T h eq u a n t i t i v ea n a l y s i so ft h eN a + ，K + - A T P a s ea ls u b u n i tb yW e s t e r n b l o t d ：亚单位的表达，而相同条件下脑组织及大鼠心肌 细胞可以检测出，可能因为O t ：亚单位在豚鼠心脏表 达量极小的缘故。考虑豚鼠心肌细胞仅含少量的 N a + ，K + 一A T P 酶a 2 亚单位，大部分是O t l ，所以仅l 的含量即可代表N a + ，K + 一A T P 酶的含量。 另外，两种方法致豚鼠C H F 后，仪亚单位在 m R N A 水平的表达量均下降，而O t 。变化不同，其中 C D A 法表达量下降，I S O 法无变化。N a + ，K + 一A T P 酶仅，亚单位在m R N A 水平表达量的变化与其在蛋 白水平的表达不一致，原因可能是与基因转录后调 节有关，从m R N A 翻译为蛋白质的过程中还受多种 因素的调节，而这种调节在不同蛋白质之间存在差 异。N a + ，K + 一A T P 酶在m R N A 水平表达量的变化 与其酶活性的变化也不一致，通常认为蛋白的表达 量与其功能一致，本实验测得酶活性与O t 。皿单位蛋 白表达量的变化相一致。因豚鼠心肌仅含少量 N a + ，K + 一A T P 酶O t ：亚单位，即使O t ：有变化，可能酶 活性也不能反映出来。因此，不能排除心衰后O t ：的 变化。有报道归J ，豚鼠心衰后N a + ，K + ·A T P 酶a 。 亚单位在蛋白水平的表达量不变，而O t ：升高，这可 7 6 5 4 3 2 1 O 们 晰 吣 ¨ 们 毗 叭 呻 oo鲁口un嘎Zg篇暑山rtd o罩苷lD醋 万方数据 ·2 2 4 · 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n2 0 0 9F e b ；2 5 ( 2 ) 能是心衰后心肌细胞内静息钙升高的原因之一。 皮下大剂量注射I S O 可造成心肌细胞弥漫性坏 死、纤维化及心室扩张，从而导致进行性心衰¨0 | 。 尽管I S O 法致心衰后N a + ，K + - A T P 酶o t 。亚单位在 m R N A 水平降低了，而酶的活性及其在蛋白水平的 表达与C D A 法一样也未改变，其m R N A 的改变可能 系I S O 的影响，因为I S O 可兴奋B 受体，通过c A M P P K A 途径与N a + ，K + - A T P 酶的0 【。亚单位相偶联， 从而抑制N a 泵电流L ¨1 1 2 。但其o t 2 在m R N A 水 平没有明显变化，与缩窄法不一致，值得进一步探 讨。 总之，尽管C D A 和I S O 法致豚鼠C H F 后N a + ， K + 一A T P 酶仅，、o t ：亚单位在m R N A 水平有所变化， 但酶的活性及其o t ，亚单位在蛋白水平的表达量均 未明显改变，因此认为，豚鼠C H F 后钙瞬变的减小， 可能没有N a + ，K + 一A T P 酶的参与。 参考文献： 1 X i ezJ 。C a i lT N a + ，K + 一A T P a s e ·m e d i a t e ds i g n a l t r a n s d u c t i o n ： f r o mp e t e i ni n t e r a c t i o nt oc e l l u l a rf u n c t i o n J M o lI n t e r v ，2 0 0 3 3 ( 3 ) ：1 5 7 6 8 2 齐亚娟，郭芳，李吉和，等豚鼠心衰时心肌细胞收缩功能和 钙瞬变的变化 J 第三军医大学学报，2 0 0 6 ，2 8 ( 1 8 ) ：1 8 5 0 3 2 Q iYJ ，G u oF ，L iJH ，e ta 1 C h a n g e so fc e l ls h o r t i n ga n dc a l c i u m t r a n s i e n ti nh e a r tf a i l u r eg u i n e ap i gv e n t r i c u l a rm y o c y t e s J A c t a M e dM i lT e r t ，2 0 0 6 ，2 8 ( i 8 ) ：1 8 5 0 3 3 R o b e sHG ，H e n n i n gB ，J e c h e nME ，e ta 1 T h eN a + ，K + 一A T P a s e i nt h ef a i l i n gh u m a nh e a r t J C a r d i o v a s c 如，2 0 0 3 ，( 5 7 ) ：9 1 3 一 4 5 6 7 7 】 8 9 2 0 D e s p aS ，I s l a mMA ，P o g w i z dSM B e t sDM I n t r a c e l l u l a rN ac o n · e e n t r a t i o ni se l e v a t e di nh e a r tf a i l u r e ，b u tN a ，K p u m pf u n c t i o ni s u n c h a n g e d J C i r c u l a t i o n ，2 0 0 2 ，1 0 5 ：2 5 4 3 8 L o p i n a0D I n t e r a c t i o no fN a ，K A T P a s ec a t a t y t i cs u b u n i tw i t h c e l l u l a rp r o t e i n sa n do t h e re n d o g e n o u sr e g u l a t o m J B i o c h e m i s t r y ，2 0 0 1 。6 6 ：1 1 2 2 3 1 G a oJ ，W y m o r eR ，W y m o r eRT e ta 1 I s o f o r m s p e c i f i cr e g u l a t i o no f t h es o d i u mp u m pb yqa n dB - a d r e n e r g i ca g o n i s t si nt h eg u i n e a p i g v e n t r i c l e J J P h y s w l 。1 9 9 9 ，5 1 6 ( 2 ) ，3 7 7 8 3 苏素艾，王永利，张永健低浓度毒毛旋花子苷原对离体豚鼠 衰竭心脏的影响 J 中国药理学通报，2 0 0 3 ，1 9 ( 2 ) ：1 6 7 7 1 s uSW ，W a n gYL Z h a n gYJ E f f e c to f l o wc o n c e n t r a t i o n so fs t r o - p h a n t h i d i no ni s o l a t e dg u i n e ap i gf a i l u r eh e a r t s 【J C h i nP h a r m a c o lB u l l ，2 0 0 3 1 9 ( 2 ) ：1 6 7 7 1 P a y n eJA F o r b u s hBR M o l e c u l a rc h a r a c t e r i z a t i o no ft h ee p i t h e l i a IN 8 - K C Io o t r a n s p o r t e ri s o f o r m s J ，C u r rO p i nC e l lB i o l ，1 9 9 5 ， 7 ：4 9 3 5 0 3 T r o u v eP ，C a r t eF ，B e l i k o v aI ，e ta 1 N a + ，K + 一A T P a s ea 2 i s o f o r m e x p r e s s i o ni ng u i n e ap i gh e a r t sd u r i n gt r a n s i t i o nf r o mc o m p e n s a t i o n t od e c o m p e n s a t i o n 【J A mJP h y s i o lH e a r tC i r cP h y s i o l 。2 0 0 0 。 2 7 9 ：1 9 7 2 8 1 G a nRT ，L iWM ，X i uCH 。e ta 1 C h r o n i cb l o c k i n go f1 3 3 一a d r e n o - c e p t o ra m e l i o r a t e sc a r d i a cf u n c t i o ni nr a tm o d e lo fh e a r tf a i l u r e J C h i nM e d ，2 0 0 7 ，1 2 0 ( 2 4 ) ：2 2 5 0 5 W o oAL ，J a m e sPF L i n g r e lJB C h a r a c t e r i z a t i o no f t h ef o u r t hi s o - f o r mo f t h eN a + ，K + ·A T P a s e J J M e m b rB i o l ，1 9 9 9 ，1 6 9 ：3 9 4 4 S i l v e r m a nBD ，F u l l e rW ，E a t o nP ，e ta 1 S e r i n e6 8p h o s p h o r y l a t i o n o fp h o s p h o l e m m a n ：a c u t ei s o f o r m s p e c i f i ca c t i v a t i o no fc a r d i a cN a KA T P a s e J 】( 知r d o v a s cR e s ，2 0 0 5 ，6 5 ：9 3 1 0 3 N a + ，K + - A T P a s em a yn o ti n v o l v ei nt h ed e c r e a s eo fc a l c i u m t r a n s i e n ti nc a r d i a cm y o c y t e sf r o mg u i n e ap i gw i t hc h r o n i ch e a r tf a i l u r e Q IY a - j u a n l ，2 ，B A IJ i n 9 2 ，L IJ i h e l ，L IS h u m i n l ，G U OH u i c a i l ，L I UX u e 1 i 1 ，W A N GY o n g 1 i 1 ( 1 D e p to f P h a r m a c o l o g y ，H e b e iM e d i c a lU n i v e r s i t y ，S h i j i a z h u a n g0 5 0 0 1 7 ，C h i n a ； 2 D e p to f P h a r n m c o l o g y ，N o r t hC h i n aC o a lM e d i c a lC o l l e g e ，T a n g s h a nH e b e i0 6 3 0 0 0 ，C h i n a ) A b s t r a c t ：A i mT oe x p l o r ew h e t h e rN a + ，K + A T P a s e i n v o l v e si nt h ed e c r e a s eo fc a l c i u mt r a n s i e n ti nc a r d i a c m y o c y t e sf r o mg u i n e ap i gw i t h c h r o n i ch e a r tf a i l u r e ( C H F ) M e t h o d s T h eC H Fm o d e li ng u i n e ap i gw a g p r o d u c e db yc o n s t r i c t i n gt h ed e s c e n ta o r t a ( C D A ) o r s u b c u t a n e o u s l yi n j e c f i n gi s o p r o t e r e n o l ( I S O ) L e f tv e n t r i c u l a rm y o c y t e sw e r ee n z y m a t i c a l l yi s o l a t e d I n o r g a n i cp h o s p h o r u sm e t h o dw a su s e dt od e t e r m i n ec a r d i a c S a r c o l e ：m m a lN a + K + 一册a g ea c t i v i t y T h e nt h ee x p r e s s i o no fN a + ，K + - A T P a s e 仅la n d 仪2s u b u n i ti nm R N Al e v e la n di np r o t e i nl e v e lw e r ed e t e c t e dw i t hR T P C Ra n dW e s t e r nb l o t ，r e s p e c t i v e l y R e s u l t s T h e e x p r e s s i o n so fN a + ，K + 一A T P a s eda n do t 2s u b u n i ti n m R N Al e v e ld e c r e a s e di nC D AC H Fg u i n e ap i g s ，仪l s u b u n i ta l s od e c r e a s e sb u t 仅2s u b u n i tu n c h a n g e si nI S O C H Fg u i n e ap i g s B o t ht h eN a + ，K + 一A T P a s ea c t i v i t y a n dt h ee x p r e s s i o no fN a + ，K + 一A T P a s ea ls u b u n i ti n p r o t e i nl e v e lw e r eu n c h a n g e di nt h et w oC H Fg u i n e a p i g s C o n c l u s i o n N a + ，K + ·A T P a s em a yn o ti n v o l v e i nt h ed e c r e a s ei nc a l c i u mt r a n s i e n ti n d u c e db yC H F K e yw o r d s ：g u i n e ap i g ；c h r o n i ch e a r tf a i l u r e ；c a l c i u m t r a n s i e n t ：N a + K + A T P a s e 1 J 1 J 1 J m ¨ 坦 r【rL r L 万方数据