SN-T 1248-2003 国境口岸淋病检验规程.pdf.pdf

rJ拍 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N / T 1 2 4 8 -2 0 0 3 国 境 口 岸 淋 病 检 验 规 程 I n s p e c t i o n c o d e s f o r g o n o r r h e a a t f r o n t i e r p o r t 2 0 0 3 - 0 5 - 2 8 发布2 0 0 3 - 1 2 - 0 1实施 中 _ 华人民共和国.* 国家 质 量 监 督检 验 检 疫 总 局. IIJ S N汀1 2 4 8 -2 0 0 3 前言 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位: 中华人民共和国山东出人境检验检疫局、 中华人民共和国江苏出人境检验检疫 局、 中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。 本标准主要起草人: 王远忠、 于长友、 刘福奎、 杨启生、 易晨。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准. S N/ T 1 2 4 8 -2 0 0 3 国 境 口 岸 淋 病 检 验 规 程 1 范围 本标准规定了国境口岸实验室淋病检验标本的采集及运送、 检验的方法步骤和结果报告. 本标准适用于国境口岸对淋球菌感染的实验室诊断。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件， 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 G B 1 5 9 7 5 -1 9 9 5 淋病诊断标准及处理原则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 淋病 g o n o r r h e a 由淋病奈瑟菌引起的泌尿生殖道的化脓性感染. 淋球菌 g o n o c o c c u s 是引起淋病的病原体， 在分类学上属奈瑟菌属， 学名为淋病奈瑟菌。 4 标本的采集及运送 41 标本的采集 标本的采集部位及方法步骤. 按照G B 1 5 9 7 5 -1 9 9 5 附录 A的规定。标本采集后， 接种于培养基培 养或直接涂片. 防止菌体死亡影响培养或标本干固无法涂片。 4 . 2 标本的运送 取材地点离实验室较远时， 应接种到改良的S t u a r t 运送培养基上， 并在 1 2 h以内送达实验室培养。 运送过程中， 应保持样品温度在 3 5 0 C 3 6 之间、 湿度在 8 0 %以上。 5 实验室检验 5 . 1 实验室诊断流程 实验室诊断流程( 见附录A) 52 试剂的准备 5 . 2 . 1 革兰氏染色液( 或美蓝染色液) : 成分及配制方法按照G B 1 5 9 7 5 -1 9 9 5 附录 A的规定。 5 . 2 . 2 T h a y e r - M a r t in ( T - M) 培养基及改良的S t u a r t 运送培养基: 成分及配制方法按照G B 1 5 9 7 5 - 1 9 9 5附录A的规定。 5 . 2 . 3 糖发酵试剂: 成分及配制方法按照 G B 1 5 9 7 5 -1 9 9 5附录A的规定。用于糖发酵试验的搪类试 剂应为分析纯级。 5 . 2 . 4 氧化酶试剂: 成分及配制方法按照 G B 1 5 9 7 5 -1 9 9 5附录A的规定。 1 S N/ T 1 2 4 8 -2 0 0 3 5 . 3 涂片显徽镜检查 5 . 3 . 1 涂片固定 5 . 3 . 1 . 1 分泌物的直接涂片固定 5 . 3 . 1 . 1 . 1 将采集的棉拭子标本， 在洁净载玻片上轻轻滚动， 防止细胞破裂或变形， 厚薄要均匀适当。 5 . 3 . 1 . 1 . 2 自然干燥后加热固定。固定时， 将玻片迅速通过酒精灯火焰上三分之一处 2次3 次， 应 防止加热过度使细胞变形， 以玻片放到手背上不感到太烫为宜。 5 . 3 . 1 . 2 培养物的涂片固定 5 . 3 . 1 . 2 . 1 滴一滴生理盐水于洁净的载玻片上， 用白金耳取菌环从培养基典型或可疑菌落上轻轻葫取 细菌， 在载玻片盐水上混匀、 铺平。 5 . 3 . 1 . 2 . 2 按 5 . 3 . 1 . 1 . 2的规定操作. 5 . 3 . 2 革兰氏染色 按照GB 1 5 9 7 5 -1 9 9 5 附录 A的规定. 5 . 3 . 3 检验结果 5 . 3 . 3 . 1 分泌物的直接涂片镜检 可见到大量红色多型核白细胞， 有些细胞吞噬双球菌， 细胞内可有一对或数十对不等的革兰氏染色 阴 性菌， 呈肾型或 卵圆型. 常为 成对排列， 两菌接触面扁平或稍凹， 菌体长约为0 . 7 p m ， 宽为。 . 5 p m ， 两 菌大小可有差异。有时可见到单个、 四联型或八叠状的双球菌， 为阳性结果。 5 . 3 . 3 . 2 培养物的涂片镜检 菌体符合 5 . 3 . 3 . 1 的形态， 但菌体大小及染色深度有差异， 排列也不一致。约2 5 %为双球菌， 而多 数为单球菌， 个别呈四联型或八叠状， 为阳性结果。 5 . 4 分离培养 5 . 4 . 1 方法步骤 按照G B 1 5 9 7 5 -1 9 9 5附录A的规定。 5 . 4 . 2检验结果 经2 4 h - - 4 8 h 培养 后， 淋球菌可在培 养基上形成圆形、 凸起、 表面光滑、 湿润、 半透明或灰白 色菌 落， 边缘呈花瓣状， 直径约为0 . 5 mm-1 . 0 m m， 用接种环触之带粘性， 培养超过 4 8 h时， 菌落面积增 大， 表面粗糙， 边缘皱缩， 为阳性结果。 5 . 5 妞化酶试验 5 . 5 . 1 方法步骤 按照 G B 1 5 9 7 5 -1 9 9 5 附录A的规定。直接向菌落滴加氧化酶试剂时， 应先挑取留做其他试验的 备用菌种。 5 . 5 . 2检验结果 加人试剂后， 经 1 5 s -2 0 s 菌落呈红色， 并逐渐变为紫色， 最后呈黑色， 为阳性结果. 5 . 6 福发酵试验 5 . 6 . 1 方法步骤 按照G B 1 5 9 7 5 -1 9 9 5 附录 A的规定。 5 . 6 . 2 检验结果 淋球菌只发酵葡萄糖， 葡萄糖管颜色变为黄色， 其他搪管不变色， 保持红色， 为阳性结果。 5 . 7 直接荧光抗体试验 5 . 7 . 1 方法步骤 按照G B 1 5 9 7 5 -1 9 9 5 附录A的 规定。 封固玻片的甘油 应为 分析纯级。 5 . 7 . 2 检验结果 5 . 7 . 2 . 1 分泌物的直接涂片荧光显微镜检查可见到发蓝绿色荧光的双球菌。菌体大小、 形态符合 S N/ T 1 2 4 8 -2 0 0 3 5 . 3 . 3 . 1 的规定， 为阳性结果。 5 . 7 . 2 . 2 培养物的涂片荧光显微镜检查， 菌体形态、 特征符合 5 . 7 . 2 . 1 的规定， 为阳性结果。 6结果报告 6 . 1 淋球菌阳性感染的报告 本标准5 . 3 . 3 . 1 , 5 . 3 . 3 . 2 , 5 . 4 . 2 , 5 . 5 . 2 , 5 . 6 . 2 , 5 . 7 . 2 . 1 , 5 . 7 . 2 . 2其中任何一项符合者， 应报告为 淋球菌阳性感染。 6 . 2 琳球菌阴性感染的报告 与5 . 3 . 3 . 1 , 5 . 3 . 3 . 2 , 5 . 4 . 2 , 5 . 5 . 2 , 5 . 6 . 2 , 5 . 7 . 2 . 1 , 5 . 7 . 2 . 2 各项均不符合， 应报告为淋球菌阴性 感染 。 S N/ T 1 2 4 8 -2 0 0 3 附录A ( 规范性附录) 淋病感染诊断流程圈 采集标本 女性标本不推称采用 分洛物涂片镜植( 运送)培养荃培 养 阳 性阴 性 初 步 阳 性 诊 断果 集 标 木 培 养 结合其他试 毅 进 行 确 定 诊 断 典型革兰 氏 阴性双球菌 典型曲落形杏特征 筑化醉试脸阳性 初步诊断阳性培养 物 箱发醉 试 验阳 性 荧光抗体试脸阳性 确定阳性诊断 图 A.