TMV 54K基因的3个突变体介导抗病性的研究.pdf

!“# !“# 基因的 $ 个突变体介导抗病性的研究 安利忻刘一飞陈章良李毅! （北京大学生命科学学院蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室，北大!耶鲁植物分子遗传农业生物技术联合中心，北京 “#$%“） 摘要： 利用 9 )?;） 介导的方法转化烟草 （3-*+-)1) +)()*./ AB） 。用 )*+ 侵染转基因 植物的 (#代和 (“代， 结果显示这 5 个缺失突变体均能介导对 )*+ 的抗病性。 关键词： )*+；!“# 突变体；复制酶介导的抗病性 中图分类号：CD-5B1文献标识码：E 文章编号：#,%!%-D2 （1#“） #-!#5D,!#- %8，KL0 M:NO!A8NO，AG I8! （4,5-1%67)8, 9-1+ :,1+,8,*.8)8Q8O “#$%“，:8N） 82+; ;S;989? ; （!“#）=;R; ; 3X 899 ;Y4R;?8?U9?;） )8 4SN?78!7;8N9; 9RN?UB ESS 9:; 9RN?O;8V 4SN9? =89: 9:; 0!9;R78NS ;S;989，9:; !9;R78NS ;S;989 N 9:; T! VS; UR9RNS 4NR9 8U8VN9 R;?8?9NV; NON8?9 )*+B 9*3 :,4(+： )*+；!“# 7T9N9?；R;4S8VN?;!7;8N9; R;?8?9NV; 自从 “DD# 年 1 通过 原生质体实验初步证明了 )*+ !“# 所介导的抗病 性是作用在单细胞水平， 在侵染部位强烈地抑制了 病毒的复制。而 0OTX; 等 5的实验则证明在 )*+ !“# 转基因植株中， 病毒 (0E 在细胞间的运动也受 到抑制。最初， NRR 等 -认为这种抗病性是由蛋白 介导的， 因为在他们建立的原生质体瞬间表达系统 里， )*+ !“# 能够介导对 )*+ 的抗性， 但 !“# 的移 码突变却不能介导抗性； 而 *NRN） 的现象， 即当外源基因转入植物后， 外源基因和 与它同源的内源基因的表达都受到抑制极为相 似 2 。 为了更深入了解 )*+ !“# 所介导的抗病机理， 我们构建了 )*+ !“# 的 5 个缺失突变体， 与野生型 !“# 一起分别转化烟草， 结果显示这 5 个缺失突变 体均能介导对 )*+ 的抗病性。 ;材料和方法 ;?;） APE-#-， 克隆质粒载体为 4PST;?VR849 6 （ _ ） ， 植 物转化中间载体质粒为 41#$， 均为本实验室保存。 ;?AB 缺失突变体的构建 任兵等 % 从国内普通株系的 )*+ 中克隆了完整 “ 收稿日期：1#!#-!1#接受日期：1#!#%!1- 基金项目：国家 “$25” 项目 （“#5!“5!#1!#,） 。6T44NS“$25”K8O: 6V8;V; N );V:;V;B 植物学报1#“，?$ （-） ： 5D, _ 5D$ “ # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # $%? 载体上， 对其两端进行了序列测 定， 证明起始密码子和终止密码子正确。 !“#植物转化 将 $ 个突变体和野生型 !“#（命名为 !?*、 =?;-+ /，!123? !“#/A“8;,B+,；;-+ .，$%;-+ ，-F),;-;-+ #，HI#G2 ),;-;-+ I，HI#! ),;-;-+;-+ N，HI#D ),;-;-+ O，HI#D ),;- 卡那霉素的 !“ 培养基上萌发， 将生 长正常的小苗移入土中， 进行 $%HH T ED F;C:?C7 G U9C9:;7L C7 :H;7987CL :6-;LL6 .?;7:9 V.H99C78 ; 7679:HNL:NH;? 87 9ON7L 6)8NW7 5D 5NL;9 Y TD 0C78 2D F;C:?C7 G (CH;? U)Z :H;*;HH T ED ;H9K 5 D 56A676996;H;76 UD 2;N?L6A- 0G E;:K6871IHCMI H9C9:;7L :;H8:I ;8;C79: :K 78;:CM19:H;7I U)Z 678?C9K T TD N?H D 2;N?L6A- 0 *G NH99C67 6U7 2_任兵 D Y;78 *14 _王春香 D E;7 )1 _潘乃 禾 遂 D *K7 F15 _陈章良 G *?67 ;7I 9ON7L 6a6H9LK U 2D bHW T /D a6NHH;W /D .CI C96?;:C67 6/6?: ED 56A67699656789:;2:? 81 ,PP“ 1 (Q“!P R “X$G （责任编辑：谢巍） “PX植物学报,*) :&*)3/) ./3/)“ 卷