[农业标准]-NY5070-2002 无公害食品 水产品中渔药残留限量.pdf

I C S 1 1 . 1 2 0 . 1 0 R d ， NT 中华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY 代替 5 0 7 0 -2 0 0 2 NY 5 0 7 0 - 2 0 0 1 无公害食品水产品中渔药残留限量 2 0 0 2 一 0 7 一 2 5 发布 2 0 0 2 一 0 9 一 0 1 实施 中 华 人 民 共 和 国 农 业 部 发 布 N Y 5 0 7 0 -2 0 0 2 前言 本标准是对N Y 5 0 7 0 -2 0 0 1 无公害食品 水产品中渔药残留限量 的修订。 本标准的修订主要参考了国际食品法典委员会( C A C ) ( 食品中兽药残留) ( “ R e s i d u e o f V e t e r i n a r y D r u g s i n F o o d s “ ) 第二版第三卷( 1 9 9 5 修订) 和 食品中兽药最大残留限量标准 ( “ C o d e x Ma x i m u m R e s i d u e L i m i t F o r V e t e r i n a r y D r u g s i n F o o d s “ ) ， 同时根据我国 水产品贸易情况参考了欧盟法规( E E C R e g u l a t i o n 2 3 7 7 / 9 0 . ) ， 美国食品与药品管理局( F D A) 法规 2 1 C F R C h . 1 ( 4 - 1 - 0 1 E d i t i o n ) P a r t 5 5 6 - T o l - e r a n c e f o r R e s i d u e o f N e w A n i m a l D r u g s i n F o o d 以 及日 本、 加拿大、 韩国 和 我国 香港地区 的动物 性食 品中兽药最大残留限量标准( MR L ) ， 并结合我国水产品养殖生产过程中渔药的使用情况。 本标准保持了原标准的结构形式; 在内容上保留了原标准中科学、 合理的内容， 删除了目 前我国水 产 养 殖 中 没 有 使 用 的 药 物， 修订 了 叙 每 承 测 定 方 法， 增 加了 附 录A 、 附 录B , 同 时 对 部 分内 容 作了 修 改 和 补充。 本标准的附录A、 附录 B为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会归口。 本标准起草单位: 国家水产品质量监督检验中心、 青岛出人境检验检疫局、 广东出人境检疫检疫局。 本标准主要起草人: 周德庆、 李晓川、 李兆新、 冷凯良、 林黎明、 宜齐、 吴建丽。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为: N Y 5 0 7 0 -2 0 0 1 , N Y 5 0 7 0 -2 0 0 2 无公害食品水产品中渔药残留限A 1 范 围 本标准规定了无公害水产品中渔药及通过环境污染造成的药物残留的最高限量。 本标准适用于水产养殖品及初级加工水产品、 冷冻水产品， 其他水产加工品可以参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。 凡是注日期的引用文件， 其随后所有的 修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究是 否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 N Y 5 0 2 9 -2 0 0 1 无公害食品 猪肉 N Y 5 0 7 1 无公害食品 渔用药物使用准则 S C / T 3 3 0 3 -1 9 9 7 冻烤鳗 S N / T 0 1 9 7 -1 9 9 3 出口肉中哇乙醇残留量检验方法 S N 0 2 0 6 -1 9 9 3 出口活鳗鱼中嗯哇酸残留量检验方法 S N 0 2 0 8 -1 9 9 3 出口肉中十种磺胺残留量检验方法 S N 0 5 3 0 -1 9 9 6 出口肉品中 峡喃哇酮残留量的检验方法 液相色谱法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3 . 1 渔用药物 f i s h e r y d r u g s 用以预防、 控制和治疗水产动、 植物的病、 虫、 害， 促进养殖品种健康生长， 增强机体抗病能力以及改 善养殖水体质量的一切物质， 简称“ 渔药” 。 3 . 2 渔药残留 r e s i d u e s o f f i s h e r y d r u g s 在水产品的任何食用部分中渔药的原型化合物或/ 和其代谢产物， 并包括与药物本体有关杂质的 残留。 3 . 3 最高残留限f m a x i m u m r e s i d u e L i m i t , MR L 允许存在于水产品表面或内部( 主要指肉与皮或/ 和性腺) 的该药( 或标志残留物) 的最高量/ 浓度 ( 以鲜重计， 表示为: W g / k g 或m g / k g ) , 4 要求 4 . 1 渔药使用 水产养殖中禁止使用国家、 行业颁布的禁用药物， 渔药使用时按N Y 5 0 7 1 的要求进行。 4 . 2 水产品中渔药残留限f要求 水产品中渔药残留限量要求见表 1 , N Y 5 0 7 0 -2 0 0 2 水产品中渔药残留限t 药物类别 表 1 中文 药物名称 指标( MR L ) / ( p g / k g ) 100一100一10C 四环素类 抗生素类 氯霉素类 不得检出 磺胺类及增效剂 英文 c h l o r t e t r a c y c l i n e O x y t e t r a c y c l i n e T e t r a c y c l i n e C h l o r a mp h e n i c o l S u l f a d i a z i n e S u l f a me r a z i n e S u l f a d i mi d i n e s v l f a me t h o x a z o l e 1 0 0 ( 以总量计) 嚓诺酮类 T r i m e t h o p r i m Ox i l i n i c a c i d 硝基峡喃类 F u r a z o l i d o n e 其他 金霉素 土霉素 四环素 氯霉素 磺胺啥陡 磺胺甲基略吮 磺胺二甲基咯吮 磺胺甲嗯 W $ 甲氧苇吮 嗯喳酸 吠喃畦酮 己烯雌酚 唆乙醇 D i e t h y l s t i l b e s t r o l O l a q u i n d o x 不得检出 不得检出 不得检出 5 检测方法 5 . 1 金尽素、 土霉素、 四环紊 金霉素测定按N Y 5 0 2 9 -2 0 0 1 中附录B 规定执行， 土霉素、 四环素按S C / T 3 3 0 3 -1 9 9 7 中附录A 规定执行。 5 . 2 氮霉素 氯霉素残留量的筛选测定方法按本标准中附录A执行， 测定按N Y 5 0 2 9 -2 0 0 1 中附录D ( 气相色 谱法) 的规定执行 5 . 3 磺胺类 磺胺类中的磺胺甲基喃吮、 磺胺二甲基啥吮的测定按 S C / T 3 3 0 3 的规定执行， 其他磺胺类按 S N / T 0 2 0 8 的规定执行。 5 . 4哇酸 嗯喳酸的测定按S N/ T 0 2 0 6的规定执行。 5 . 5 吠喃哇酮 吠喃哇酮的测定按S N / T 0 5 3 。 的规定进行。 5 . 6 己烯雌酚 己烯雌酚残留量的筛选测定方法按本标准中附录B规定执行。 5 . 了 哇乙醉 峰乙醇的测定按S N/ T 0 1 9 7的规定执行。 6 检验规则 6 . 1 检验项目 按相应产品标准的规定项目进行 6 . 2 抽样 N Y 5 0 7 0 -2 0 0 2 62 . 1 组批规则 同一水产养殖场内， 在品种、 养殖时间、 养殖方式基本相同的养殖水产品为一批( 同一养殖池， 或多 个养殖池) ; 水产加工品按批号抽样， 在原料及生产条件基本相同下同一天或同一班组生产的产品为 一批 。 6 , 2 . 2 抽样方法 6 . 2 . 2 . 1 养殖水产品 随机从各养殖池抽取有代表性的样品， 取样量见表2 0 表 2 取样f 生物数量/(尾、 只) 取样量/(尾、 只) 5 0 0以内 2 5 0 0 - 1 0 0 0 4 1 0 0 1 . 5 0 0 0 1 0 5 0 0 1 - 1 0 0 0 0 2 0 )1 0 0 0 1 3 0 622 . 2 水产加工品 每批抽取样本以箱为单位， 1 0 0 箱以内取3 箱， 以后每增加功。 箱( 包括不足1 0 0 箱) 则抽1 箱。 按所取样本从每箱内各抽取样品不少于3 件， 每批取样量不少于1 0 件。 63 取样和样品的处理 采集的样品应分成两等份， 其中一份作为留样。 从样本中取有代表性的样品， 装入适当容器， 并保证 每份样品都能满足分析的要求; 样品的处理按规定的方法进行， 通过细切、 纹肉机纹碎、 缩分， 使其混合 均匀; 鱼、 虾 贝、 藻等各类样品量不少于2 0 0 9 。各类样品的处理方法如下: 。 ) 鱼类: 先将鱼体表面杂质洗净， 去掉鳞、 内脏， 取肉( 包括脊背和腹部) 肉和皮一起绞碎， 特殊要 求除外。 b ) 龟鳖类: 去头、 放出血液， 取其肌肉 包括裙边， 纹碎后进行测定。 。 ) 虾类: 洗净后， 去头 壳， 取其肌肉进行测定。 d ) 贝类: 鲜的、 冷冻的牡砺. 蛤蒯等要把肉和体液调制均匀后进行分析测定。 。 ) 蟹: 取肉和性腺进行测定。 f ) 混匀的样品， 如不及时分析， 应置于清洁、 密闭的玻璃容器， 冰冻保存。 6 . 4 判定规则 按不同产品的要求所检的渔药残留各指标均应符合本标准的要求， 各项指标中的极限值采用修约 值比较法。超过限量标准规定时， 允许加倍抽样将此项指标复验一次， 按复验结果判定本批产品是否合 格。经复检后所检指标仍不合格的产品则判为不合格品。 NY A. 1 5 0 7 0 - 2 0 0 2 附录A ( 规范性附录) 氮砚素残留的酶联免疫测定法 适用范围 本方法适用于测定水产品肌肉组织中氯霉素的残留量 A. 2 原理 利用抗体抗原反应。 微孔板包被有针对兔免疫球蛋白( I g G )氯霉素抗体) 的羊抗体， 加人氯霉素抗 体、 氯霉素标记物、 标准和样品溶液。 游离抓霉素与抓霉素酶标记物竞争抓霉素抗体， 同时氯霉素抗体与 羊抗体连接。 没有连接的酶标记物在洗涤步骤中被洗去。 将酶基质( 过氧化尿素) 和发色剂( 四甲基联苯 胺) 加人到孔中并孵育; 结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加人反应停止液后使颜色 由 蓝 变为 黄， 在4 5 0 n m处 测 量， 吸 光 度 与 样品 的 抓 霉素 浓 度成 反比 。 A . 3 检测限 筛选方法的检测下限为1 p g / k g , A . 4 仪器 A . 4 . 1 ，L，J月马 A . 4 . A . 4 . A 4 . A. 车 A. 4 . 微孔酶标仪( 4 5 0 n m) , 离心机。 旋转蒸发仪。 混合器。 移液器。 5 0 p L , 1 0 0 p L , 4 5 0 p L 微量加液器等。 A . 5 药品和试荆 除非另有说明， 在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。 A . 5 . 1 乙酸乙醋。 A . 5 . 2 乙睛。 A . 5 . 3 正己烷。 A . 5 . 4 磷酸盐缓冲液( P B S ) ( p H 7 . 2 ) : 0 . 5 5 g 磷酸二氢钠( N a H 2 P O , · H , 0 ) , 2 . 8 5 g 磷酸氢二钠 ( N a 2 H P 0 , · 2 H 2 0 ) , 9 g 抓化钠( N a C l ) 加入蒸馏水至1 0 0 0 m L , A . 6 1 5 0 A. 7 标准溶液 分别取标准浓缩液5 0 1 I用4 5 0 p 1缓冲液1 ( 试剂盒提供) 稀释并混均匀， 制成0 , 5 0 n g / l n g / 1 , 4 5 0 n g / I _ , 1 3 5 0 n g / L , 4 0 5 0 n g / L的 标准溶液。 A. 7 . 1 样品提取和纯化 取 5 . 0 g 粉碎的鱼肉样品( 样品先去脂肪组织)与 2 0 mL乙睛水溶液( 8 6 +1 6 ) 混合 1 0 m i n 1 5 C 离心1 0 m i n ( 4 0 0 0 r / m i n ) . A . 了2 取3 m l ， 上清液与3 m l蒸馏水混合， 加人4 . 5 m l乙酸乙醋混合1 0 m i n , 1 5 C 离心 1 0 m i n N Y 5 0 7 0 -2 0 0 2 ( 4 0 0 0 r / mi n ) . A . 7 . 3 将乙酸乙醋层转移至另一瓶中继续干燥， 用 1 . 5 m l缓冲液 1 溶解干燥的残留物， 加人 1 . 5 m l , 正己烷混合。 A . 7 . 4 完全除去正己烷层( 上层) ， 取5 0 I L水相进行分析。 A. 8 A. 8 . 1 样品测定程序 将足够标准和样品所用数量的孔条插人微孔架， 记录下标准和样品的位置， 每一样品和标准做 两个平行实验。 A . 8 . 2 微孔中。 A. 8 . 3 A . 8 . 4 加人5 0 p L稀释了的酶标记物到微孔底部， 再加人5 0 p L的标准或处理好的样品液到各自的 加人5 0 I A L 稀释了的 抗体溶液到每一个微孔底部充分混合， 在室温孵育2 h . 倒出孔中的液体， 将微孔架倒置在吸水纸上拍打( 每行拍打3 次) 以保证完全除去孔中的液体， 然后用2 5 0 班 ， 蒸馏水充人孔中， 再次倒掉微孔中的液体， 再重复操作两次。 A . 8 . 5 加人5 0 讨 基质、 5 0 p i发色试荆到微孔中， 充分混合并在室温 A . 8 . 6 加入1 0 0 jA L反应停止液到微孔中， 混合好， 以空气为空白， 在 、 暗处孵育3 0 m i n . 4 5 0 n m处测量吸光度值( 注意 必须在加人反应停止液后6 0 m i n内读取吸光度值) 。 A. 9 结果 所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准( 0 标准) 的吸光度值再乘以1 0 0 ， 得到以百 分比给出的吸光度值， 以式( A . 1 ) 表示: F ( V ) _些x 1 0 0 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . · . . · . ( A . 1 ) _ 、A a - 式中: E 一一吸光度值， %; A 标准或样品的吸光度值; A a - 一。 标准的吸光度值。 以计算的标准值绘成一个对应抓霉素浓度( n g 八) 的半对数坐标系统曲线图， 校正的曲线在 5 0 n g / L -1 3 5 0 n g / L的范围内 应成为线性， 相对应的每一个样品的浓度， 可以从曲 线上读出。 乘以稀 释倍数即可得到样品中抓霉素的实际浓度( n g / k g ) . 5 0 7 0 -2 0 0 2 附录B ( 规范性附录) 己烯雌酚( D E S ) 残留的酶联免疫测定法 适用范围 Y门 NB 本方法适用于测定水产品肌肉等可食组织中己烯雌酚的残留量。 B - 2 原理 测定的基础是利用抗体抗原反应。 微孔板包被有针对兔I g G ( D E S 抗体) 的羊抗体， 加人D E S 抗体、 标准和样品溶液。 D E S与D E S抗体连接， 同时D E S抗体与羊抗体连接。 洗涤步骤后， 加人D E S酶标记 物， D E S酶标记物与孔中未结合的D E S抗体结合， 然后在洗涤步骤中除去未结合的D E S酶标记物。将 酶基质和发色剂( 四甲基联苯胺) 加人到孔中并孵育; 结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产 物加入反应停止液后使颜色由蓝变为黄， 在4 5 0 n m处测量， 吸光度与样品的己烯雌酚浓度成反比。 B . 3 检测限 己烯雌酚检测的下限为 1 p g / k g , B . 4 仪器 B . 4 . 1 微孔酶标仪( 4 5 0 n m) , B . 4 . 2 离心机。 B - 4 . 3 3 7 C恒温箱。 B . 4 . 4 移液器 B . 4 . 5 5 0 1, 1 , , 1 0 0 u L , 4 5 0 K L微量加液器 B - 4 . 6 R 工 D A C: 柱等。 BS 试剂和标准溶液 除非另有说明， 在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和燕馏水或去离子水或相当纯度的水。 B5 . 1 叔丁基甲基醚。 B . 5 . 2 石油醚。 B . 5 . 3 二氯甲烷。 B . 5 . 4 6 mo l / L磷酸。 B . 5 . 5 乙酸钠缓冲液等。 B . 5 . 6 提供的 D E S标准液为直接使用液， 浓度为 0 , 1 2 . 5 X 1 0 - s m o l / L , 2 5 X 1 0 - 0 m o l / I 5 0 X1 0 0 mo l / I 1 0 0 X1 0' mo l / 1 . , 2 0 0 X1 0 - ' mo l / L, B . 6 样品处理 B . 6 . 1 取5 . 0 g肌肉( 除去脂肪组织) ， 用1 0 m L p H为7 . 2 的6 7 m m o l / L磷酸缓冲液研磨后， 用8 m L 叔1 一 基甲基醚提取研磨物， 强烈振荡2 0 m i n ; 离心1 0 m i n ( 4 0 0 0 r / m i n ) ; 移去上清液， 用8 m L叔丁基甲 基醚重复提取沉淀物。 8 . 6 . 2 将两次提取的醚相合并， 并且蒸发; 用 1 mL甲醇( 7 0 0 0 ) 溶解干燥的残留物; 用 3 m L石油醚洗 涤甲醉洛液 研磨 1 5 S ， 短时间离心， 吸除石油醚) 。 N Y 5 0 7 0 -2 0 0 2 B . 6 . 3 蒸发甲醇溶液， 用 1 m L二氯甲烷溶解后， 再用3 mL 1 m o l / I _ 的氢氧化钠( N a O H) 溶液提取; 然 后3 0 0 衅 一 6 m o l 几 磷酸中和提取液， 用R I B A C ,。 柱进行纯化 B . 7 测定程序( 室温 2 0 C .' -2 4 ,c 条件下操作) B . 7 . 1 将足够标准和样品所用数量的孔条插人微孔架， 标准和样品做两个平行实验， 记录下标准和样 品的位置。 B7 . 2 加人2 0 1A的 标准和处理好的 样品到各自 的 微孔中· 标准和样品做两个平行实验 B . 7 . 3 加人5 0 可 一 稀释后的】 ) E S 抗体到每一个微孔中， 充分混合并在2 C -8 C 孵育过夜( 注意: 在第 二天早上继续进行实验之前， 微孔板应在室温下放置3 0 m i n以上， 稀释用缓冲液也应回到室温， 因此最 好将缓冲液放在室温下过夜) 。 B . 7 . 4 倒出孔中的液体， 将微孔架倒置在吸水纸上拍打( 每行拍打3 次) 以保证完全除去孔中的液体， 用2 5 0 I L 蒸馏水充人孔中， 再次 倒掉微孔中液体， 再重复 操作一次。 B . 7 . 5 加人5 0 A I 稀释的酶标记物到微孔底部。 室温孵育1 h , B7 . 6 倒出孔中的液体， 将微孔架倒置在吸水纸上拍打( 每次拍打3 次) 以保证完全除去孔中的液体， 用2 5 0 刃 . 燕馏水充人孔中， 再次倒掉微孔中液体， 再重复操作两次。 B了了 加人5 0 叮 一 基质和5 0 k L发色试剂到微孔中， 充分混合并在室温暗处孵育1 5 m i n . B . 7 . 8 加人1 0 0 川 ， 反应停止液到微孔中， 混合好在4 5 0 n m处测量吸光度值( 可选择6 0 0 n m的参比 滤光片) ， 以空气为空白， 必须在加人停止液后6 0 m i n内 读取吸光度值。 B . 8 结果 所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准(t 0 标准) 的吸光度值再乘以1 0 0得到以百 分比 给出的吸光度值， 以式( B . ”表示: _ _ ， A_ _ _ E ( % 一 戈x 1 0 0” “ .“” “ ” B . ) 式中: E -吸光度值， %; 八 - 一 标准或样品的吸光度值; A 。 一一 。 标准的吸光度值。 以 计算的标准值绘成一个对应 D E S浓度C n g / L ) 的半对数坐标系统曲线图， 校正的曲线在 2 5 n g / I _ - 2 0 0 n g / I 的范围内应成为线性， 相对应的每一个样品的浓度， 可以从曲 线上读出。乘以稀释 倍数即可得到样品中D E S 的实际浓度( n g j k g ) ,