三磷酸胞苷二钠对局灶性脑缺血大鼠海马CA3区脑源性神经生长因子表达的影响.pdf

中国临床康复第!“卷 第#$期2006-07-10 !“ Chine6 三磷酸胞苷二钠对局灶性脑缺血大鼠海马 CA3 区脑源性神经生长因子 表达的影响! 郭瑞芳 1!李英平2!王洪芳1 ! 基础研究 ! 1承德医学院附属医院老年病科,河北省承德市 067000;2承德医学院 解剖教研室,河北省承德市067000 郭瑞芳!,女,1966年生,汉族,河北省邯郸市人,2003年河北医科大 学毕业,硕士,副主任医师,副教授,主要从事脑血管病基础与临床研 究。 中图分类号:R329.29文献标识码:A文章编号:1671-5926(2006)25-0077-03 收稿日期:2005-12-31修回日期:2006-02-13(05-50-12-10419/YH“S) Effe t of sodium ytidine triphosphate on the expression of brain5deri6ed neurotrophi fa tor in hippo ampa7 89: in rats after fo a7 erebra7 is hemia %2Department of AnatomMD CGenHFe IeFicaE CoEEeHeD CGenHFe067000D HeJei KroLinceD CGina %e ei6ed?ABCD :?;)=)-9 ;)2A2,E FGH )- ,;),7h(nAA)( Bin/h)+nA C+nA-) #“IJ!“K#$LMNNOPQFA)-,R 郭瑞芳!李英平!王洪芳7三磷酸胞苷二钠对局灶性脑缺血大鼠海马FGH区脑源性 神经生长因子表达的影响STU7中国临床康复!#“I!“K#$RMNNOP SVVV7W.E:X+7:U 摘要 目的:观察三磷酸胞苷二钠QCOK)对缺血神经元修复、再生及结构重建的 影响及其作用机制。 方法:实验于2002-03/10在河北医科大学组胚教研室及河北医科大学 第三医院中心实验室进行。 选取SD大鼠60只,随机分为脑缺血自然恢 复组、药物干预组和假手术对照组,每组20只。 采用线栓法建立大脑中 动脉脑缺血大鼠模型, 药物干预组大鼠术后立即将三磷酸胞苷二钠 (70 mH/XH体质量)经1 mV生理盐水溶解后给予腹腔注射,此后以相同 剂量每日一次腹腔注射;自然恢复组及假手术组大鼠给予生理盐水 1 mV每日一次腹腔注射,分别于术后7、14、21及30 F时各取5只大鼠 处死,应用苏木精-伊红染色、免疫组化技术观察海马CA3区脑源性神 经生长因子的表达, 比较各组脑缺血后脑源性神经生长因子阳性细胞 吸光度值。 结果:实验选取的各组大鼠全部进入结果分析。各组大鼠脑缺血后细 胞形态观察结果:假手术组大鼠顶叶及海马区神经元排列整齐,形态完 整,细胞数量较多,细胞核圆大且核仁明显。 缺血组可见梗死灶,表现为 正常结构消失,排列紊乱,细胞数量减少,胞核浓缩呈梭形或三角形,细 胞质深染。免疫组化染色及图像分析结果:光镜下观察,假手术组海 马CA3区脑源性神经生长因子免疫组化染色阳性细胞神经元的胞浆内 充满弥漫性的棕黄色颗粒,但其表达数量较少、染色较浅,自然恢复组 脑源性神经生长因子表达与假手术组相比逐渐增多,第21天时达到高 峰,并且免疫反应产物染色较深,部分神经元可见长的轴突,三磷酸胞 苷二钠干预组脑源性神经生长因子阳性表达同自然恢复组相比均明显 增加。脑缺血后各组脑源性神经生长因子阳性细胞吸光度值的比较: 与假手术组相比, 自然恢复组脑源性神经生长因子吸光度值明显升高 且差异有显著性(? 0.01),与自然恢复组相比,三磷酸胞苷二钠干预 组各时间点吸光度值均升高, 而且7 F和14 F时同自然恢复组比较差 异有显著性(? 0.01)。 结论:脑缺血损伤可诱导海马CA3区脑源性神经生长因子表达增多。三 磷酸胞苷二钠可上调脑缺血后脑源性神经生长因子的表达, 具有促进 缺血神经元的修复、再生及结构重建的作用。 主题词神经生长因子;胞苷三磷酸;脑缺血;大鼠 I引言 脑梗死的超早期, 溶栓治疗可挽救部分濒临死亡 的神经元,但是由于受到“时间窗“的限制,多数患者失 去机会,因此,脑缺血后神经元修复及结构重塑,成为 基础神经科学及康复医学等研究的新热点。 脑源性神 经生长因子具有促进和维持特异性神经元生长、 存活 和分化作用,并能促进神经元的修复及结构重建a1b。 以 ! 三磷酸胞苷二钠对局灶性脑缺血大鼠海马CA3区脑源性 神经生长因子表达的影响 郭瑞芳!等. %, 由河北医科大学实验动物中心提供 (冀).663+8+663?。 随机分为自然恢复组及药物干预 组,每组.0只;同时选取.0只行假手术,作为对照 组。 试剂及药品:抗体为兔抗脑源性神经生长因子的 单克隆抗体 (购自武汉ABCDE生物工程有限公司);二 抗、三抗、正常羊血清及FA显色剂均购自北京中山 生物有限公司;三磷酸胞苷二钠由北京市永康制药厂 (京卫药准字(-),第(,*0.-号)提供。 设计、实施、评估者:设计和实施为本文第一作 者,评估为全部作者,所有参与者均接受过培训。 方法: 模型制备:参考GDH IAJ;H等K3L报道的方法,加以 改进,制成右侧大脑中动脉脑缺血模型。 药物干预方法:药物干预组大鼠,术后立即将三 磷酸胞苷二钠(*6 M;1N;体质量)经( MI生理盐水溶 解后给予腹腔注射,此后以相同剂量每日一次腹腔注 射; 自然恢复组及假手术组大鼠给予生理盐水( MI, 每日一次腹腔注射,直至被处死时为止。 取材:分别于术后*、(/、.(及30 O时各取,只大 鼠采用(P戊巴比妥钠过量麻醉处死, 经/6 ;1I多聚 甲醛灌注固定后,选取视交叉至乳头体之间的脑组织 后固定./ Q,常规乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。 自视交叉向后呈冠状位连续石蜡切片, 每片厚度为 ) µM,每各.6张连续选取3张分为3套切片,分别用 于苏木精+伊红染色、免疫组化染色及阴性对照实验, 每套取,张切片R常规苏木精+伊红染色。 苏木精+伊红染色:“脱蜡: 将切片放入二甲苯 #、$中各, MSJ。%浸水:将切片依次放入体积分数 为8的乙醇%分别经蒸馏水、6T68 MAX1I 磷酸盐缓冲液(U ,滴加6T68 MAX1I枸橼酸缓冲液(YV )T6),微波炉抗 原修复(-9 Z).6 MSJ,自然冷却至室温;(滴加86P正 常山羊血清(6T68 MAX1I U)加入兔抗鼠脑源性神经生长因子的单克隆 抗体(一抗,8866、用6.68 MAX1I U*滴加生物素 标记的二抗%;工作液 (羊抗兔),3* Z湿盒内孵育 36 MSJ;-滴加辣根酶V2U标记链酶卵白素工作液 (三 抗 ),3* Z湿 盒 内 孵 育36 MSJ,6T68 MAX1I U.FA显色,P苏木 精轻度复染,86 ;1I盐酸分色,上行梯度乙醇脱水,二 甲苯透明,中性树脂封固。 阴性对照用6T68 MAX1I U“三磷 酸胞苷二钠既是脑磷脂、核酸合成的必备物质,又为 其合成反应提供能量,因而可以促进神经细胞膜性结 构的合成与构建,支持神经元存活,增加神经细胞抗 缺血、再生及修复能力,促进神经细胞功能的恢复,减 少缺血受损神经元数量,上调脑缺血后脑源性神经生 长因子的表达。 提示三磷酸胞苷二钠具有保护缺血性 神经元,促进受损神经元的修复、再生以及结构重建 的作用。 (图14见插图25-5页) 4参考文献 McAlliDEFG AHI HaEJ LCK LL DC. NFMGLEGLNOinD and DPnaNEic NlaDEiciEP.Annu Rev Neuro-./ 1999Q22R295-318 SaTaDaUi SKVOiWFnL XKYMGMUaZa SKe0 12.FdMcEiLn in cFGFGaldFGivFd nFMGLEGLNOic acELG NGLEFin lFvFl in EOF OiNNLcaTNal CA1 dFndGiEic iFld NGF cFdFD EOF dFlaPFd nFMGLnal daTaWF in EOF GaE cFGFGal.3 Neuro-./ Re- 1998 1Q 53(3_R318-29 LLnWa aK bFinDEFin cK CaGlDLn VKe0 12. FvFGDilF TiddlF cFGFGal aGEFGP LcclMDiLn ZiEOLME cGaniFcELTP in GaED.40ro5e 1989Q20(1_R84-91 LindDaP MK biFWand VdK AlEaG CAK e0 12. NFMGLEGLNOic acELGDR GLT TLlFcMlF EL Tan.6ren7- Neuro-./ 1994Q17(5_R182-90 Lindvall eK HLUaia aK fFnWJLn dK e0 12. NFMGLEGLNOinD and cFGFGal inDMlED. 6ren7- Neuro-./ 1994Q17(11_R490-6 fGandLli CK Vanna AK DF fFGnaGdi MAKe0 12. CFGFGaldFGivFd nFMGLEGLNOic acELG and aDic iGLlaDE WGLZEO acELG dLZnGFWMlaEF NMDA GFcFNELG MncEiLn in cFGFFllaG WGanMlF cFllD.3 Neuro-./ 1998Q18(19_R7953-61 COFnW fKMaEEDLn Mc.NX3 and fDNY NGLEFcE CNV nFMGLnD aWainDE TFEaLl icgFhciELELhic inDMlED.8ere9r12 Re- 1994Q640(1-2_R56-67 HiNGianLva iK YGFiTan XMK DFDidFGaEL VK e0 12. CFGFGaldFGivFd nFMGLEGLNOic acELG NGFvFnED nFMGLnal dFaEO and Wlial acEivaEiLn aEFG WlLal iDcOFTia in EOF GaE.3 Neuro-./ Re- 1999Q56(1_R21-7 XaGEaWlia NK DM dK XPlFG bdKe0 12. cGLEFin DPnEOFDiDdFNFndFnE and indFNFn dFnE GFWMlaEiLn L OiNNLcaTNal DPnaNDFD P cFGFGaldFGivFd nFMGLEGLNOic ac ELG. 3 :/o2 8;e l 0.01Q与假手术组及自然恢复组比较, l 0.01;与自然恢 复组相比 c m 0.05 ;与自然恢复组7d比较,d l 0.01;与自然恢复组14 d比较, F l 0.01 8.57k0.39 35.13k0.80a 38.78k0.71c 8.58k0.36 35.46k0.99aF 39.9k0.69ac iVVN 1671-5926CN 21-1470n ?AB2.5CD.o!“#$%&2006 7 ( 10 )* 10 +* 25 , !“