丙酸睾酮预处理对HIBD新生鼠脑细胞神经生长因子表达的影响.pdf

中国儿童保健杂志2 0 0 8 年0 4 月第 1 6 卷第2 期cJC H CA p r . 2 0 0 8 ， Vol l 6 ， N o . 2 1 8 1 文 章 编 号 : 1 0 0 5 一 6 5 7 。 ( 2 0 0 5 ) 0 2 一 1 5 1 一 0 4【 基础科研论着】 丙酸墨酮预处理对H IBD新生鼠脑细胞神经生长因子表达的影响 李占魁 · ， 赵春艳2 ， 冯晋兴“ ， 柯华4 ， 倪黎明 ， 李清红 (1 映西省妇幼保健院新生儿科， 陕西 西安7 1 0 0 0 3 ; 2川北医学院附属医院， 四川 纬阳4 4 4 5 0 。 ， 3深圳市儿童医院新生儿 科， 广东 深圳5 1 0 0 2 6 ， 4西安交通大学医学院第二附属医院儿科， 陕西 西安7 1 0 o 0 4) 中图分类号: R 7 22. 1文献标识码: A 摘要:【 目 的 】 观察丙酸肇酮预处理对新生鼠缺氧缺血性脑损伤( h y po范 c- i sc hem icb ra indam age ， H I B D ) 大脑皮 质和海马区神经生长因子( nerv e g ro w thfa ct or， N G F)的表达及神经细胞凋亡的影响， 并探讨其保护作用机制。 【 方法】 新生3日龄S D大鼠随机分为3 组: 正常对照组(n=2 4 ) ， H IBD组(n=2 4)， T预处理组(n二2 4 ) 。T预处理组大鼠于3 日龄时给予 T预处理。H IBD组和 T预处理组大鼠于7日龄时进行 H I B D模型制作.于 H l 后 1 2 、 24、 72 h 、 7 d 观察各组 脑组织病理形态及应用 Niss l 染色法测定神经元数目而间接检测神经细胞坏死和凋亡。并于 H l 后 2 4 、 7 2 h 、 7d 制作石 蜡切片， 用免疫组化S A BC 法观察N G F在各组大鼠大脑皮质和海马表达的动态变化。【 结果】 H l 后 24、 72 h 和 7 d ， 正常对照组和 H I B D组大鼠脑皮质和海马区仅见极少量阳性细胞表达， 而T预处理组大鼠于H l 后 24 h和72 hN G F 表 达水平明显增高( P 0 . 0 5 ) 。正常对照组和 H I B D组大鼠海马区偶尔可见 N G F免疫阳性细胞表达， T预处理组大鼠海马 区于 H l 后 72 h出现 N G F免疫阳性细胞表达轻微增多， 与正常对照组和 H I B I 组比较差异均有显著性( P 0 . 0 1 ) 。 【 结论】 丙酸辜酮预处理可明显见减轻大脑皮质神经细胞凋亡、 增加H I B D新生大鼠脑皮质和海马区N G F表达， 从而发 挥神经保护作用。 关键词: 脑缺氧; 脑缺血; 丙酸辜酮; 雄激素受体; 神经生长因子 S t . d y 帕 p rot eCt i vee f f c t a n dlis m ech a n is mof p re t 代a t . Ie ntor t .t 朋t e r o n ep r o p i o ll a t e on 七 y POx i c- isCh 呱icb 门ind 田 . a 攀 加 t 加 e n eO ll a ta l ra二L I Zha n- k “ 1 · 刁 ， Z H A OCh“ n- 夕 a n Z ， F E N GJ n- x n g ， ， K EH ua礴 ， N I L i- m i n g ， L l q” 犷h o 九 9 . ( I D e - P a r 加 称 t o IN e o 加tao l ogy ， t h e Md t e r 邢l a n 碑 流 成 l dH a l t h伪即 Ho s P i tal oj s h a a 月 对 尸 r o 诬 n ce， X 亡 a 介 ， S haa . xi 7 1 0 0 0 3 ， C 触 月 口 ; 2几e A j j i 如t ed H 办 s P i 招l oj Chua碑 加止 舟 肠 d 亡 佣1 肠I l e g e ， A 几 口 招 ya月 9 ， 及动ua月4 4 4 5 0 0 ， C 献 几 口 ; 3 D Par t 加 朗t of 川 eo- 砚 a o l o g y ， t 几 e Chi l d r e nH o s P i t a l o jshe n 动e n ， S h e n 之 he几 ， G “ 。 儿 g d 二95 1 0 0 2 6 ， 耘 泣 月 。 ; 4D e P a r t m e n t o IP e d 勿t r 幼 5 ， the 孔c - 朋dA j j i l 她t ed Ho s P i tal ， Me d i cal Col l ege of X 细碑J 血oto . gUni ver s i t y ， 义 白n ， 5 几 a n xi 7 1 0 0 0 4 ， 为 泣 na) 肋s t r a c t : l o bj ec t i ve l T o o b s e r v e t h e e ff e c t s o f t e s to s t e r o nep r o p io n a t e p r e t r e a t m e n t o n n e r v e g r o w t h f a c t o r ( N G p ) e x p re s s i o n a n d n e u r a l nec r o s i s a n d a 卯p to s i s 。 oa s t o e x p l o r e t h e 即s s i b l e m e c h a n is m . I M e t h 侧 如 1 3 一 d a 犷 o l d s p ra g u 。 Daw l e y( S D ) r a t s w e r e r a n d o m l y d i v id e di n tot h r e e g r o u p s : con t rol g ro u p( n =2 4 ) ， H I B Dg rou p( n ，2 4 )， p r e t r eat tn e n t w i t h t e s to s t e r o n e p r o p i o n a t e g rou P ( n =2 4 ) . P r e t r e a t m e n t 初t h t e s to s t e ro n e p rop i o n a teg r o u p w a s p r e t r e a t eda t 3 d a y o l d . M a k in g H I B Dmod e l o n 7 一 d a 犷 o ld SD r a t 。 o f H l B Da n dp re t r e a t m e n t w i t ht e s t o s t e ro n e p ro p io n a t e g ro u p s . I R es u l 肠 1 0 b s e rvi n gc h a n g e s o f b r a i nn e rve c e l l s o f i s c h e mi c s i d e( l e f t s i d e )h e m i s p h e r ei nHl B Dg rou Ps h o w e ds i g n i f i c a n t d a ma g e s i n c l u d i n gi n d i s t i n c t c e l l s t r u c t u r e ， d e ra n g e m e n t o f a r r a y ， n e rve c e l l d e g e n e r a t io n ， n e c r o s i s ， c e l l c o l l a p s e ， tna s s i v e a p o p t o t i c c e l l s ， r e a c t i v e h y p e r p l a s i a o f g l i a l c e l l s ; n e rv e c e l l s o f i s c h e m i c s i d e ( l e f t s i d e ) h e m i s p h e r e i n p r e t r e a t m e ntw i t h t e s t o s t e r o n e p ro p i o n a t e g ro u p s how e d l e s s s e v e r e d a m a g e s t h a nH I B Dg r o u p ， s e l d o ms e e i n g a p o p t o s i s .A d o p t i n gN i s s l s t a i n i n ga nal y - z i n g b y i m a g e a c q u i r i n g a n d a nal y s i s s y s t e mo f c o m p u t e r ， t h e d e n s i t y o f c o r t i c a l a nd h i p p o c a m p a l n e u ron s i nH I B Dg rou p d ecreas ed o b v i o u s l y c o m p a r e dw i t h con t rol g rou P ( P 0 . 0 5 ) ， w h i 1 e d e g ree o f n e u ronl o s s i n p r e t rea t m e n t wit h t e s t o s t e rone p ro p i o n a t e g r o u p was r e l i e v e dt h a n H I B Dg ro u p ( P 0 . 0 5 ) . V i e w i n ga s m a l l q u a n t i t y o f N G Fp o s i t i v e c e l l s i n c o r t e xa nd h i p p o c a m p u s o f c o n t r o l a n d H I B Dg ro u p s a t 2 4 、 7 2 h a n d 7 d a f t e r H I ， w h i l e t h e e x p r e s s i o n o f A Rp o s i t i v e c e l l s i n p r e t r e a t - m e n t w i t h t e s to s t e ro n e p r o p i o n a t e g ro u p i n c r ea s e d a p p a r e n t l y a t 2 4 h a n d 7 2 h a f t e r H I ( p 0 . 0 5 ) . C ouc l us i o ns1 T e s - t o s t e ron e p r o p i o n a t e p r e t r eat m e n t c o u l d a P p a r e n t l y u 介r e g u l a t e N G Fe x p r e s s i o n o nc o r t e x a n d h i p p o c a m p u s i n n e o n a t a l r a t s a f t e r H I B Dt o r e d u c e . l e v e l s o f c e l l u l a r n e c r o s i s a n d a p o p t o s i s o nc o r t e x a n d h i p p o c a m p u s a l l e v i a t e d t o c o m p a r e w i t hp u r e l y H I B Dg rou pa f t e r H I .S u g g e s t i n gt h a t p r e t r e a t m e n t o f e x t r i n s i c a n dr o g e nc o u l dd e c r e a s e i m p a i r m e n t i nH I B D . K e yw o r dS: c e r e b r a l h y p o 对 a ; c e r e b r a l i s c h e mi a ; t e s t o s t e rone p r o p i o n a t e ; a n d r o g e nr e c e p t o r ; a p o P t o t i c 金项目: 国家自 然科学基金项目 部分资助( 3 o 4 7 1 8 2 7) 作者简介: 李占魁( 1 958 一 ) ， 男， 河南人， 主任医师， 硕士研究生导师， 主攻方向为新生儿缺氛缺血性脑病。 研究表明， 雄激素对缺血后脑损伤有神经保护作用。 一3 ， 但确切机制尚不完全清楚。探讨雄激素对缺氧缺血性脑损 伤( h y pox i c- i s c h e m i c b r a i n d a m a g e ， H I B D ) 的保护作用及其 万方数据 1 8 2中国儿童保健杂志 2 0 0 8 年 0 4 月第 1 6 卷第 2 期C J C H CA p r . 2 0 0 8 ， V o l l 6 ， N o . 2 机制是一个全新的课题。本实验以新生鼠 H I B D模型为研物工程有限公司提供。 究对象， 观察丙酸皋酮( t e s t o s t e r o n e ， T ) 预处理对 HI B D新1 . 4 统计学方法数据用 E x c e l 7 。 0 版软件和 S P SS1 0 ， 0版 生鼠大脑皮质和海马区神经生长因子( nerv e g ro w thf ac t or，软件包进行分析， 结果王 士: 表示， 两样本均数比 较用 t 检 N G F ) 的表达， 了解雄激素对 H IBD的保护作用并初步探讨验， 多样本均数比 较采用方差分析( A N O V A ) 。尸 0 . 05 为 其保护作用机制。差异有显著性. 1 材料和方法2 结果 1 。 1 材料健康3日 龄 S D新生大鼠( 清洁级) 共 72 只， 雌2 . 1 脑组织病理形态学改变 正常对照组动物双侧大脑半 雄不限， 体重 10一12 9 ， 由西安交通大学医学院实验动物中球对称， 未见出血、 肿胀现象; H I B D组缺氧后 12 h ， 可见左 心提供。 按窝随机分为正常对照组( co ntrol g rouP， 二 二2 4)，侧大脑半球轻度肿胀， 颜色稍苍白， 24 h 可见左侧大脑半球 缺氧缺血性脑损伤组( H I B Dg rou p ， n =2 4)、 丙酸皋酮预处明显肿胀， 颜色苍白， 以额顶叶为主， 72 h 肿胀有所减轻， 但 理组( T +H IBDgroup ， n =2 4)。正常对照组不作任何处理;额顶叶仍可见局灶性苍白区， 7d 双侧大脑半球基本对称。 丙酸皋酮预处理组每只大鼠均给予皮下注射0 . s m g 丙酸辜丙酸皋酮预处理组的鼠脑肉眼未见明显异常， 偶可见轻微苍 酮， 每日 一次， 连续3 d ， 缺氧缺血性脑损伤组每只大鼠均给白区和极小出血点。光镜下镜可见， 正常对照组双侧大脑半 予皮下注射0 . 05 m I J 芝麻油( 安慰剂) ， 每日一次， 连续3d 。球组织结构层次清晰， 细胞轮廓正常， 细胞核居中， 核仁清 待幼鼠达7日 龄时， 对缺氧缺血性脑损伤组和丙酸肇酮预处楚; H l 后 12h ， 可见左侧大脑皮质出现局灶性少量的神经元 理组的大鼠制作 H IBD模型; 正常对照组无任何处理。细胞核固缩现象， 海马、 丘脑亦有此小病灶， 但数量较皮质 1 . Z H I BD 模型制作方法采用传统的新生鼠H IBD模型少沼 4 h 病变最为严重， 上述部位出现大片坏死， 细胞溶解、 制作方法a， 新生大鼠于 7日龄时建立 H IBD模型: 无水乙消失， 且 细胞结构不清、 排列紊乱， 局部神经细胞发生变性、 醚吸人麻醉(13 m i n)后， 取仰卧位， 固定四肢于手术板上，坏死和崩解， 大量凋亡细胞; 72 h 病灶周围可见胶质细胞反 碘酒和75%酒精消毒皮肤， 颈部正中切口， 长约 1 一1 . s c m，应性增生， 病灶中心仍可见大量核固缩和核碎片; 7 d 病灶中 分离皮下脂肪， 于胸锁乳突肌内侧的深部游离左颈总动脉，心仅见极少量的核固缩和核碎片， 病灶周围增生的胶质细胞 用 5 一0 灭菌找线双线结扎， 缝合伤口并再次消毒皮肤。术较 72 h 增多， 呈网状或条索状。丙酸皋酮预处理组左侧脑 后动物放置于正常室内空气中缓和 60100 m in后， 放入自神经细胞排列较整齐、 结构较完整， 神经元变性、 坏死程度均 制的常温常压密闭有机玻璃舱内( 容积 4L)， 持续充以8 %较 H I B D组轻， 细胞凋亡少见。 氧浓度的氮氧混合气体， 气流量 0 . 5 I L / m in， 以测氧仪监2 . 2 各组大风脑皮质神经元数目 测定 正常对照组大鼠脑 测氧浓度， 舱内温度控制在 36 士1 ， 维持 2 . s h 。处理皮质神经元密度如下表所示; H I B D组大鼠脑皮质神经元密 完毕后取出大鼠， 放回鼠笼由母鼠喂养。度于 H I 后 1 2 h 即明显减小， 24 h 和72 h 脑皮质神经元密 1 . 3 脑组织固定和常规石蜡包埋各组大鼠于 H l 后 12、度减少幅度最大， 7 d 降至最低值， 与正常对照组比 较差异均 2 4 、 7 2 h 、 7 d 四个时点进行分批处死， 每组每时点杀鼠6 只，有显著性( 尸 0 . 0 5); 丙酸皋酮预处理组大鼠脑皮质神经元 用 10%水合氯醛( 40 m g 八。 0 9 ) 腹腔麻醉、 4 %多聚甲醛心脏密度于H l 后 12、 24、 7 2 h 和7 d明显高于 H I B D组， 差异均 灌注， 断头取脑， 将之保存于4 %多聚甲醛溶液中， 固定 72h有显著性( 尸 。 . O 5 ) ， 而与正常对照组较接近。见表1 。 以上。固定后的鼠脑从正中矢状面切开， 分别于80%酒精、2 3 各组大鼠海马区神经元数目 测定正常对照组大鼠海 95%酒精和 1 00%酒精中各浸泡 l h 行常规脱水， 组织再行马区神经元密度如下表所示; H IBD组大鼠海马区神经元密 透明处理， 然后在 38 的工、 n和 nl号熔蜡液中分别浸泡度于Hl 后 12 h 呈明显减小， 72 h 神经元密度降至最低值， 7 40、 4 0 、 5 0 m in后， 快速取出进行石蜡包埋， 后行矢状切片(5d 逐渐恢复， 但仍低于正常对照组水平， 且与正常对照组比 拼 m ) ， 进行常规 H E染色和Niss l 染色， 切片经Niss l 染色后，较均有显著性差异( P 0 . 0 5 ) ; 丙酸皋酮预处理组大鼠海马 采用计算机图像分析仪， 经光栅复形照片标定标准长度和标区神经元密度于H l 后 12 h 开始减小， 2 4 、 7 2h 和7 d 虽低 准面积后， 选取脑皮质和海马区神经细胞， 计数其密度。并于正常对照组， 但明显高于 H I B D组水平， 差异有显著性( P 采用免疫组化 S A BC 染色法检测 N G F的表达1， N G F试0 . 0 1 ) 。见表 1 。 剂盒， S A BC 试剂盒及 D A B显色试剂盒均由武汉博士德生 衰1 靳生大暇缺权缺血后不同时期脑皮质和海马区神经元密度的变化( xl 让 弓 / 拌 m 3 ) 王 土: 组别 脑皮质神经元密度海马区神经元密度 1 2h2 4h7 2 h1 2h2 4h 正常对照组 HI B D组 T预处 理组 9 0 1 士 1 . 8 9 5 1 2 士1 . 3 4 . 82 1 士1 . 0 4 9 . 0 0 士1 . 9 2 3 . 4 5 士1 。 2 3 . 7 . 8 8 士1 . 0 2 1 15 6 士2 . 3 8 3 . 0 8 士0 . 9 8 . 7 . 8 5 士1 . 0 1 1 2 . 4 4 士2 。 5 6 2 . 9 7 士1 . 3 6 8 ， 0 9 士0 . 8 4 7 . 8 8 士 1 . 8 7 3 . 8 5 士1 . 3 2 圣 5 . 6 7 士1 . 0 0 8 . 2 0 士 1 . 9 4 2 . 3 3 士1 . 1 0 “ 5 . 4 4 士1 . 0 1 1 0 . 3 5 士1 . 9 8 2 . 2 5 士1 . 0 9 . 5 . 0 1 士0 。 9 9 1 1 . 7 3 士2 1 1 2 . 5 5 士0 . 7 9 . 5 . 2 6 士0 . 9 6 注: 为与正常对照组比较， 尸 。 . o 5 ; 为与H I B D组比较， 尸 。 . 0 5 . 2 . 4 脑皮质 N G F的表达H l 后 2 4 、 7 2h 和 7d， 正常对照阳性反应， 而二者与丙酸辜酮预处理组大鼠脑皮质比较差异 组和 HIBD组大鼠脑皮质仅见极少量 N G F阳性细胞表达，均有显著性( 尸 0 . 0 1 ) ， 但 H l 后 7 d 正常对照组与丙酸攀酮 两者间差异无显著性， 镜下免疫阳性细胞呈浅棕黄色， 为弱预处理组差异无显著性， 丙酸皋酮预处理组大鼠左侧脑皮质 万方数据 中国儿童保健杂志2 0 0 8 年0 屯 月第 1 6 卷第2 期CJC H CA p r . 2 0 0 8 ， V of1 6 ， N o . 2 1 8 3 于 H l 后 24 h ， N G F免疫阳性细胞表达开始增多， 72 hN G F 免疫阳性细胞表达最为显著， 不仅阳性细胞数增多， 且可见 阳性细胞胞浆内颗粒状着色物呈棕黄色或深棕黄色， 多为阳 性或强阳性反应， 7 d阳性细胞表达水平下降。见表2 。 2 . 5 海马区N G F的表达正常对照组和 H IBD组大鼠海 马区偶尔可见N G F 免疫阳性细胞表达， 分布散在， 呈弱阳性 或阳性， 镜下可见胞浆内棕黄色颗粒状物质， 两组比较差异 无显著性; 丙酸皋酮预处理组大鼠海马区于 H l 后 24 h ， N G F 表达水平无明显改变， 接近正常对照组和 HI B D组阳性细胞 表达水平， 且三者比较差异无显著性， 72 h出现N G F免疫阳 性细胞表达轻微增多， 集中成片分布， 镜下可见聚集成片的 阳性细胞胞浆内棕黄色团块状或颗粒状着色物， 偶可见强阳 性细胞， 与正常对照组和H IBD组比较差异均有显著性( P 0 . 01 ， 7 d时 N G F免疫阳性细胞表达水平降低， 恢复至近 HI B D组表达水平， 且与 H I B D组比较差异无显著性， 但仍高 于正常对照组表达水平， 并与正常对照组比较差异有显著性 ( P 0 . 0 1 ) )。见表 2 。 衰 2 各组大限脑皮质、 海马区不同 H l 后时间的 N G F衰达变化( 王 士: ) 组别 正常对照组 HI B D组 T预处理组 脑皮质 N G F海马区 NGF 2 4h7 2h2 4h7 2卜 2 5 . 4 6 士4 . 7 8 . 2 6 . 3 2 士3 。 8 6 5 3 . 6 5 士4 . 1 1 2 6 . 2 7 士4 . 3 3. 3 0 . 1 9 士5 . 7 1 7 6 . 2 0 士7 . 5 0 2 8 。 4 1 士5 . 9 2 2 6 。 5 4 士5 . 6 2 3 4 . 7 7 士6 。 5 4 1 1 . 4 8 士3 . 7 6 1 1 . 0 7 士2 。 4 7 1 3 . 2 2 士4 . 1 5 1 0 . 1 3 士3 . 5 2 . 1 1 。 4 3 士3 . 1 0 4 4 2 6 士 5 。 7 8 9 . 0 5 士3 5 7 . 1 0 . 6 1 士2 . 5 1 4 。 3 4 士4 . 6 3 注: 为与T顶处理组比较， P 。 . o 1 沪为与H I B D组比较， P 0 . o 1 。 讨论达水平， 并存在一定的时间依从性大多数的研究认为， 3 . I T预处理可减低 C G C所受的氧化性报害大量研究 证实T及其受体在人及动物脑中广泛存在， 并参与对神经系 统功能的 调节和保护作用， 一习 。E vaA hl bom等 7一 幻 动物实验 研究T对新生大鼠C G C氧化性损伤的保护作用， 结果显示 采用T预处理， 可减低 C ( 汇所受的氧化性损害， 表现发生凋 亡形态改变的细胞数较对照组降低了30%。并且 A R拮抗 剂一氛他胺( Flut ami de， F)可抑制 丁的这一作用。提示这些 作用受 A R介导。同时通过检侧过氧化氢酶的活性， 发现经 T处理的细胞中过氧化氢酶活性增加， 而在 T与 F共同处理 的细胞中则无此现象。其机制可能是 T可通过 A R介导上 调过氧化物醉的活性， 从而减低氧自由 基的毒性作用9-1 O J . 3 . 2 应用外泽性 A预处理可改善 H IBD的报害， 从而起到 脑保护作用本实验观察可见， 脑缺血术后 1 3d ， 海马内 见散在神经元肿胀， 核固缩、 核仁消失， 尼氏体混浊; 术后 5 7 d ， 海马区神经元数目明显减少， 尼氏体溶解或消失， 故染色 较浅淡。结果还显示， HI B D损伤组大鼠脑皮质神经元于 H l 后， 出现广泛坏死、 凋亡， 神经元密度于 H l 后 12 h明显小于 同时刻的正常对照组水平， HI 后 24 h和 72 h脑皮质神经元 密度减少幅度最大， Hl 后 7 d 降至最低值， 与正常对照组比 较差异均有显著性( 尸 。 . 0 5 ) ; 丙酸辜酮预处理组大鼠脑皮 质神经元密度于 H l 后 1 2 、 2 4 、 7 2h和 7d明显高于 HI B D 组， 差异均有显著性( P 0 . 0 5 ) ， 而与正常对照组较接近。而 H IBD组大鼠海马区神经元于 H l 后坏死、 凋亡表现更为严 重， 神经元密度于 Hl 后 12 h明显减小， H l 后 72 h 神经元密 度降至最低值， H I 后 7 d 逐渐恢复， 但仍低于正常对照组， 且与正常对照组比较差异均有显著性( 尸 0 . 0 5 ) ; 丙酸攀酮 预处理组大鼠海马区神经元密度于 H l 后 12 h开始减小， H l 后24、 72 h 和7 d 虽低于正常对照组， 但明显高于 H IBD 组水平， 并与这两组比较均有显著性差异( 尸 0 . 0 1 ) .本研 究结果显示， 给予丙酸辜酮预处理， H I B D后的脑皮质及海马 区的神经元坏死和凋亡程度均较单纯 H IBD组有所减轻， 提 示应用外源性 A预处理可改善 HI B D的损害， 从而起到脑保 护作用。 3 . 3 丙故辛阴预处理可增加脑皮质和/ 或海马区N G F的表 HI B D后 2 4hN G F的表达就增加， 1 3d 表达受抑， 1 一2 周 出现第二次高峰， 表达时程依缺血时间长短和程度轻重而不 同。实验证明， 脑损伤时 N G F表达时程越长， 对受损神经元 的保护作用就越全面、 持久 川.本实验结果显示， 正常对照 组和 H I B D组大鼠海马区偶尔可见 N G F免疫阳性细胞表 达， 分布散在， 呈弱阳性或阳性， 镜下可见胞浆内棕黄色颗粒 状物质， 两组比较并无显著性差异; 丙酸皋酮预处理组大鼠 海马区于 H I 后 24 h ， N G F表达水平无明显改变， 接近正常 对照组和 HIBD组阳性细胞表达水平， 且三者比较差异无显 著性， 72 h 出现 N G F 免疫阳性细胞表达轻微增多， 集中成片 分布， 镜下可见聚集成片的阳性细胞胞浆内棕黄色团块状或 顺粒状着色物， 偶可见强阳性细胞， 与正常对照组和 H IBD 组比较差异均有显著性( 尸 0 . 01) ， 7d时 N G F免疫阳性细 胞表达水平降低， 恢复至近H IBD组表达水平， 且与H I B D组 比较差异无显著性， 但仍高于正常对照组表达水平， 并与正 常对照组比较差异存在显著性( 尸 。 . 01) 。这说明丙酸攀酮 预处理可以提高 H IBD新生大鼠脑组织 N G F的表达， 使之 在各个不同时间点均维持在较高水平， 从而发挥其神经保护 作用。实验研究表明， 缺氧缺血后雄激素对神经胶质细胞的 形态、 功能有明显调节作用， 也包括对其合成、 表达 N G F等 神经营养因子的影响， 从而起到促进受损神经组织修复再生 的作用lz 。因此， 推断雄激素对N G F 表达的调节作用， 部分 原因是由于雄激素对神经胶质细胞形态、 结构和功能的调 节.由于雄激素对胶质细胞的调节作用， 使相应脑损伤区域 胶质细胞分泌 N G F增多， 同时 N G F受体表达上调， 从而发 挥其神经营养和神经保护作用， 该途径可能是雄激素促进 HI B D新生大鼠脑功能恢复的机制之一。 综上所述， 丙酸攀酮预处理可增加脑皮质和或海马区 N G F的表达水平， 并存在一定的时间依从性， 可能通过上调 HI B L 后 N G F的表达， 从而发挥脑保护作用。 参考文献 1 E v 。 ， G a i l 即， san d r a c . Tes t o s t e ro n e p ro t e c t s c e r e b e l l a r g r a n u l e c e l l s fr o mo 城 d a t iv e s t e s 卜 i n d u c ed c e l l d e a t ht h r o u g h 万方数据 1 8 4中国儿童保健杂志 2 0 0 8 年 0 4 月第 1 6 卷第 2 期cJC H CA p r . 2 0 0 8 ， Vol l 6 ， N o . 2 2 3 a r e c e p t o r m e d i a t e dm e c h a n i s m . B r a i nR e s e a r c h J .2 0 0 1 ， 8 9 2 ( 2 ) : 2 5 5 一 2 6 2 . R a m s d e nM， S h i n T M， Rk e cJ. A n d rog e n s m odu l a t e n e u r o - n a l v u l n e r a b i l i t yt ok a i 垃 t el e s i o n J . N e u r o s c i ，2 0 0 3 ， 1 2 2 ( 3 ) : 5 7 3 一 5 7 8 . L I Z h a n 一 k u i ， F e n g j i n-幼 n g ， Z hao C h u n- ”n ， e t a l . P rot e c t ion ofa n d r o g en a g a in sth y p o 元 c- i s c h e mic b r a ind ma g ei n - n a t a l r a t ， a n dp o s s i b l em e c h a n i s ms J j .C 坛 n e s e j o o r n a l of C o n t em P o r a 即 P e d iatr i c s ， 2 0 0 6 ， 8 ( 6 ) : 4 4 1 一 4 4 6 . 党栓锁. 实用免疫实脸技术 M . 西安: 世界图书出版社， 2 0 0 4 : 1 一 1 0 . Bey e n b u r gS ， Wa t z k a M， C l u s ma n nH， e t a l .A ndr o g e nr e - c e p t o r m R N Ae x p r e s s i o ni nt h eh u manh i p p o c a m p u s J . Ne u r o s c i eL e t t e r s ， 2 0 0 0 . 2 9 4 ( 1 ) : 2 5 一 2 8 . 夏 无nCa r l o s L L ， G a r c la 一 o v 哟 e r o D ， Sar key S ， e t a l . A ndr o g e n r e c e p t o r i m m u n o re a c t i v i t yi nfo r e b raina xon sa n dd e n d r i t e s i nt h e r a t J .E n d o c r i n o l o g y ， 2 0 0 3 ， 1 4 4 ( 8 ) : 3 6 3 2 一 3 6 3 8 . G a r c i 于Seg u r aL M，A z c o i t i al ， D o n c a r l o sL L . N e u r o P r o t e c - t i o n b ye s t r a d i o l J . P rog r e s s i nN e u rob i o l o g y ， 2 0 0 1 ， 6 3 ( 1 ) : 2 9 一 6 0 . 8 9 1 0 1 1 1 2 E v a A L ， G ra n d i s o nE ， BOn foc o ， e t a l . A n d ro g e nt r e a t m e n t o f n eon a t a l ra t sd e c re a ， e ，s u s c e p t i b i l i t yo fc e r e b e l l a rg ra n u l e n e u ron s t o o 元 d a t i v e s t r e s s i nv i t ro J . E u r o P e a n j o u r nal of Ne u r o s c i e n c e ， 1 9 9 9 ， 1 1 ( 1 ) : 1 2 8 5 一 1 2 9 1 . A h l b o mE ， G a i 1 SP， San d r a C . T e s t o s t e ron e p rot ects c e r e b el - la rg r a n u l ec e 1 l sf r o m o x i d a t i v es t e s s 一 i n d u c ed c e l ld e a t h t h r o u g har e c e p t o rm edia t e dm e c h a n i s m J . B r a i 林R 。 ， ， 2 0 0 1 ， 8 9 2 ( 2 ) : 2 5 5 一 2 6 2 . G ar c iaS e g u r a L M， A z c o i t i a l