严重急性呼吸综合征患者肺脏中CD34、血管内皮生长因子、胞间黏附分子1的表达及病理学观察.pdf

基金项目： 国家自然科学基金资助项目 （30340030） 作者单位： 100034 北京大学第一医院呼吸科 林琴 （现在北京医院北楼呼吸科） 、 王广发、 邹水兰、 张成 ， 电镜室 （汤秀英） ， 医学部基础医 学院组织胚胎教研室 （李枫、 唐岩、 顾江） 通讯作者： 王广发 表 1 SARS 组肺标本病例特点及病理改变 编号性别年龄 （岁） 病程 （d）病理改变 1男5145肺泡壁增厚， 可见多量巨噬细胞及纤维母细胞增生 2男5033肺水肿， 肺间质及肺泡内可见少量巨噬细胞浸润 3男3135肺淤血水肿， 有少量巨噬细胞浸润， 可见部分透明膜形成 4女4932肺间质水肿， 弥漫透明膜形成、 纤维母细胞增生， 肺泡内可见脱落的巨噬细胞 5男2421化脓性肺炎， 肺泡结构破坏， 肺出血 6男2062化脓性肺炎， 肺泡结构破坏， 肺出血 7男5892间质性肺炎及脱屑性肺炎， 部分透明膜形成 注： 病程天数为出现症状至死亡时间 表 2 对照组肺标本病例特点及病理改变 编号性别年龄 （岁） 病程 （d）临床诊断病理改变 1男381败血症， 过敏性休克肺淤血水肿， 肺间隔内可见少量中性粒细胞、 淋 巴细胞、 单核细胞浸润 2男-十二指肠球部溃疡伴穿孔， 化脓性腹膜炎 伴包裹性脓肿形成， 小叶性肺炎 肺淤血水肿， 肺间隔少量炎细胞浸润， 肺泡内可 见脱落的中性粒细胞及单核细胞 3男40-左腕部化脓性炎症， 机械性窒息肺间质淤血水肿， 灶性肺泡出血水肿 4男918支气管肺炎， 肺结核化脓性支气管肺炎， 肺淤血水肿 5男30- 间质性肺炎， 躯体离断性损伤， 失血性休克 肺间质少量单核细胞、 淋巴细胞浸润， 灶性肺间 质增厚、 断裂 6男361支气管肺炎化脓性支气管肺炎， 肺淤血水肿 注： 病程概念同表 1；“ - ” ： 不详 ·论著摘要· 严重急性呼吸综合征患者肺脏中 CD34、 血管内皮生长因子、 胞间黏附分子 1 的表达及病理学观察 林琴 王广发 汤秀英 邹水兰 张成 李枫 唐岩 顾江 自严重急性呼吸综合征 （SARS） 出现至今， 虽然对其病 毒结构、 感染后的临床诊疗方法及对脏器功能的影响已经有 了越来越深入的研究， 但对其发病机制仍知之甚少。在 SARS 肺损伤过程中内皮细胞的变化特点及其作用尚不清 楚。我们通过对 SARS 死亡病例肺脏标本及其他原因所致 肺损伤死亡病例的肺脏 CD34、 血管内皮生长因子 （VEGF） 、 胞间黏附分子 1 （ICAM-1） 的表达水平进行研究， 了解内皮细 胞及其他组织细胞功能改变， 从而为进一步了解 SARS 的发 病机制奠定基础。 材料与方法 SARS 组标本来自 2003 年5 月至7 月间7 例病原学诊断明确的 SARS 病毒感染死亡病例 1， 对照组标 本来自 6 例同期因其他病因致病伴有呼吸衰竭的死亡病例、 经病原学检查除外 SARS 病毒感染。所有标本均经过 SARS 病毒原位杂交、 聚合酶链反应 （PCR） 及电镜检查确定或排除 SARS 诊断。两组病例特点及病理诊断， 见表 1， 2。 兔抗人 VEGF 多克隆抗体 （1: 200） 、 鼠抗人 ICAM-1 单 克隆抗体 （1: 200） ， 均为美国 Santa Cruz 公司产品、 鼠抗人 CD34单克隆抗体 （1: 100） ， 以上抗体及 PV-9000 试剂盒、 二氨 基联苯胺 （DAB） 试剂均购自北京中山生物技术有限公司。 石蜡包埋组织切片脱蜡至水， 3%H2O2浸泡切片 30 min 消除内源性过氧化物酶， 标本于枸橼酸盐溶液中微波修复 20 min， 自然冷却至室温后按照 PV-9000 试剂盒说明操作， DAB 显色， 复染脱水， 树胶封片。免疫组织化学染色病理切 片经 MOTIC ADVANCED 4. 0 图像分析软件分析， 获得平均 吸光度 （A） 值。 统计学处理： 应用 SAS 8. 0 统计软件对资料行 t 检验。 ·955·中华结核和呼吸杂志 2005 年 8 月第 28 卷第 8 期 Chin J Tuberc Respir Dis，August 2005，Vol. 28，No. 8 表 3 SARS 组与对照组 CD34、 VEGF、 ICMA-1 表达差异 （A 值， -x ± s） 组别肺标本例数 CD34 VEGFICAM-1 去除 SARS 合并感染标本后 CD34VEGFICAM-1 SARS 组70.284 ±0.1030.125 ±0.0420.228 ±0. 0580. 343 ±0. 032 0. 146 ±0. 026 0. 256 ±0. 045 对照组60.130 ±0.0070.114 ±0.0250.182 ±0. 0170. 130 ±0. 007 0. 114 ±0. 025 0. 182 ±0. 017 t 值3.950.561. 8814. 742. 063. 71 P 值0.0070.5890. 1110. 0010. 0700. 006 结果 SARS 组较对照组肺泡壁轮廓清晰完整， 内皮细 胞着色重且连续性好， SARS 合并感染标本结果介于两者间。 SARS 组 CD34、 VEGF、 ICAM-1 蛋白表达量较对照组有增加趋 势， 去除合并感染的 SARS 标本后增加趋势更明显， 其中 CD34、 ICAM-1 的差异具有统计学意义 （P 均 0. 05） ， 见表 3。 讨论 内皮细胞损伤在各种原因导致的肺损伤中都占 有重要地位， 但对于 SARS 肺损伤过程中内皮细胞是否发生 类似的变化目前鲜有报告。CD34是内皮细胞表面的固有型 膜蛋白， 在增殖的血管内皮细胞上高度表达， 用其单克隆抗 体与该蛋白结合来标识毛细血管、 小血管内皮细胞的稳定性 及敏感性强且与微血管密度呈正相关 2。我们的研究结果 显示， 不论从显微镜下观察还是通过图像处理后进行半定量 分析， CD34在单纯 SARS 感染肺组织的表达水平较之 SARS 合并细菌感染以及对照组肺组织的表达水平均增强， 提示 SARS 病毒在感染过程中对内皮细胞的损伤程度较内毒素、 缺氧、 普通细菌感染对内皮细胞的损伤程度为轻。 当受到炎症因子、 缺氧等因素刺激时， 肺泡型上皮、 细 支气管上皮、 巨噬细胞、 血管平滑肌细胞及肺间质细胞等多 种细胞合成分泌 VEGF 增加并以巨噬细胞分泌为主， 对血管 内皮细胞有多重影响， 包括：（1） 直接刺激血管内皮细胞分 化增殖和迁移， 加快基底膜降解， 促进血管的构建和生成； （2） 增加微血管特别是毛细血管后静脉和小静脉的渗透性； （3） 改变细胞外基质， 诱导血管生成。本研究经免疫组织化 学染色光镜观察及半定量分析发现 SARS 患者肺脏表达 VEGF 较非 SARS 组有增高的趋势， 提示其参与了 SARS 感 染后肺脏毛细血管内皮细胞增生和肺水肿形成过程， 可能说 明促进内皮细胞增生和修复的机制在 SARS 病程中更为显 著。虽然我们的研究结果显示两组 VEGF 表达不具有统计 学意义， 但如果增加样本量可能会有统计学意义。 ICAM-1 属于诱导型型膜蛋白， 在炎症因子等因素刺 激后表达量明显升高并介导一系列病理生理过程。例如参 与调节炎症反应、 细胞和组织的分化发育及免疫应答、 淋巴 细胞的归巢和再循环、 肿瘤细胞的扩散转移等。ICAM-1 分 布广泛， 单核细胞、 巨噬细胞、 中性粒细胞、 活化的淋巴细胞、 上皮细胞、 内皮细胞、 成纤维细胞等均有 ICAM-1 表达， 特别 是活化的血管内皮细胞有高表达。我们的研究结果显示， ICAM-1 在单纯 SARS 标本中的表达水平明显高于对照组标 本表达水平并具有统计学意义， 这可能是造成两者病理学上 显著差异的原因之一。 我们的研究证明 CD34、 ICAM-1、 VEGF 在 SARS 和对照 组标本中表达水平不同， 这可能是造成 SARS 肺损伤不同于 其他原因肺损伤的部分机制， 但这些改变对 SARS 肺损伤程 度和转归的影响尚待进一步研究。由于此研究中所采用的 标本数量有限、 实验距取材时间较长， 且均为死亡病例病理 标本， 所以尚难以反映 SARS 肺损伤的全貌、 难以代表疾病 早期及病情较轻患者病理生理过程。今后动物模型方面的 研究对阐明其发病过程可能具有重要的意义。 参考文献 1宫恩聪， 高子芬， 郑杰. 致死的严重呼吸综合征的病理变化及发 病机制探讨. 中华传染病杂志， 2003， 21： 390-395. 2熊正文， 孙印臣， 王炳胜， 等. CD34与 CD31显示 78 例非小细胞肺 癌微血管密度的对比研究及意义. 中国组织化学与细胞化学杂 志， 2003， 12： 1. （收稿日期： 2004-07-14） （本文编辑： 王娟） 基金项目： 江苏省自然科学基金资助项目 （BK2004096） 作者单位： 210002 南京军区南京总医院呼吸科 （吕镗烽、 宋勇、 施 毅） ， 心内科 （杭涛） ， 普外科 （于宝军） ， 病理科 （印洪林） 失血性休克小鼠肺组织 TOLL 样受体 2、 4 基因的表达 吕镗烽 宋勇 施毅 杭涛 于宝军 印洪林 TOLL 样受体 （TLRs） 是新近发现的天然免疫中的细胞跨膜受体及病原模式识别受体 （PRRs） ， 与失血性休克的发 生、 发展及转归有一定的关系 1。我们采用逆转录-聚合酶 链反应 （RT-PCR） 观察 TLR2、 TLR4基因在肺组织中的表达， 探讨两者与急性肺损伤 （ALI） 的联系。 材料与方法 （1） 分组： C57BL/6 小鼠 45 只简单随机分 ·065·中华结核和呼吸杂志 2005 年 8 月第 28 卷第 8 期 Chin J Tuberc Respir Dis，August 2005，Vol. 28，No. 8