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侧脑室注射组胺对大鼠哮喘样反应可能有调节作用 张水娟， 谢强敏， 邓杨梅， 朱一亮， 陈季强 （浙江大学医学院国家食品药品监督管理局浙江呼吸药物研究实验室， 浙江 杭州 310031） 收稿日期： 2006 -02 -20， 修回日期： 2006 -04 -15 基金项目： 国家自然科学基金资助项目 （No 30371314） 作者简介： 张水娟 （1980 - ） ， 女， 硕士生， 研究方向： 呼吸药理学， Tel： 0571-87217380， E-mail： zhangsj826 zju. edu. cn； 谢强敏 （1955 - ） ， 男， 教授， 研究方向： 抗炎免疫药理学和 呼吸药理学， 通讯作者， Tel： 0571-87217380， Fax： 0571- 87217380， E-mail： xieqm zju. edu. cn 中国图书分类号： R-332； R 329. 24； R 349. 32； R 392. 31； R 452； R 562. 25； R 562. 250. 53 文献标识码： A 文章编号： 1001 -1978 （2006） 06 -0723 -05 摘要： 目的 观察组胺侧脑室注射对抗原攻击致敏大鼠引起 的支气管收缩反应及气道炎症的影响。方法 致敏大鼠侧 脑室注射组胺后测定抗原激发前后的气道阻力和肺动态顺 应性。计数支气管肺泡灌洗液 （BALF） 中白细胞总数和分类 计数。病理切片观察肺组织炎症细胞浸润情况。结果 组 胺 （0. 1 µg·只 -1） 侧脑室注射明显抑制抗原攻击致敏大鼠 所致的气道阻力升高和肺动态顺应性的降低， 也明显降低 BALF 内的白细胞总数、 嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的数量 （P 0. 01， P 0. 01） ， 减少气道粘膜下和血管周围的嗜酸性 粒细胞浸润。结论 组胺侧脑室注射能抑制大鼠支气管收 缩反应及气道炎症， 提示中枢组胺水平升高可能对大鼠哮喘 样反应有调节作用。 关键词： 哮喘； 组胺； 大鼠； 神经调节 哮喘是一种以气道高反应性及可逆性气道阻塞 为特点的慢性炎症性疾病， 有多种细胞因子和炎症 介质参与。组胺是哮喘中的重要炎症介质， 在哮喘 发生发展过程的多个环节中都起作用。 组胺是由肥大细胞受抗原抗体复合物攻击而释 放， 即细胞受特异性抗原激发后， 存在于细胞内的组 胺酸经组胺酸脱羧酶的作用， 释放出 1 个 CO2分子 所演变而成。一般认为， 它和其他神经递质一样， 首 先和靶细胞上特异性受体结合， 从而改变细胞的兴 奋性而发挥广泛的生理作用。如组胺能引起平滑肌 收缩、 增加毛细血管通透性， 诱发气管、 支气管平滑 肌收缩， 是哮喘速发相和迟发相反应中的重要介 质 1。此外， 研究发现， 在变应性鼻炎患者， 其鼻粘 膜分泌物中组胺含量以及组胺活性明显提高。 除了外周作用外， 在脑内， 组胺是一种非常重要 的神经递质， 中枢组胺能神经元主要集中在下丘脑 结节乳头体核， 其纤维投射几乎可到达所有脑区， 参 与调控呼吸、 消化、 循环等多系统器官的功能活 动 2。组胺与诸多脑疾病相关， 如注意缺陷/ 多动 症、 癫痫、 阿尔采末病等 3， 4， 5。有研究报道哮喘豚 鼠脑内组胺含量上升 6。第四脑室注射组胺可加 快正常家兔的呼吸活动。侧脑室注射组胺受体激动 剂 R-甲基组胺可减少哮喘豚鼠呼吸道内神经源 性炎症介质 P 物质， 提示中枢组胺受体可能参与对 哮喘气道神经源性炎症的调控 7。本实验给致敏 大鼠侧脑室注射组胺， 通过测定肺功能即气道阻力 和肺动态顺应性以及气道炎症等， 观察组胺对大鼠 哮喘样反应的神经调节作用， 可能有助于进一步了 解中枢组胺水平升高时在哮喘发病过程中的作用。 1 材料与方法 1. 1 动物 Sprague-Dawley （SD） 大鼠， 级， ， 体 重 180 200 g， 由浙江大学动物实验中心提供， 动物 合格证号： 220010014。 1. 2 药品与试剂 组胺 （中国科学院上海生物化 学研究所） ； 卵白蛋白 （Ovalbumin， OA， V 级， 美国 Sigma 产品， 批号： 61K7039） ； 肝素 （华美生物工程公 司， 批号： 0203） ； 乌来糖 （氨基甲酸乙酯， 中国医药 集团上海化学试剂公司） ； 其他试剂均为国产分析 纯产品。 1. 3 仪器 PARI MASTER 雾化吸入器 （德国百瑞 有限公司） ； 低温冷冻离心机 （德国 Eppendorf 公 司） ； SR-6N 型大鼠脑立体定位仪 （日本 NARISHIGE 产品） ； BX51 显微镜 （日本 Olympus 公司） ； Medlab 生物信号数据采集仪 （南京美易公司） ； 微量加样器 （MICROLITER， 美国 HAMILTON 产品） 。 1. 4 分组及大鼠哮喘速发相模型的制备 大鼠分 为 3 组， 即正常对照组， 哮喘模型组和组胺给药组。 根据本实验室建立的大鼠致敏方法 8， 对大鼠皮下 注射1 ml 卵白蛋白悬液 （1 mg 卵白蛋白， 0. 1 g 氢氧 化铝溶于生理盐水） 致敏。正常对照组仅注射氢氧 化铝， 0. 1 g·只 -1。致敏后 d 14， 对大鼠再次注射 卵白蛋白悬液 0. 5 ml 以便加强致敏， 并且用 10 g· L -1卵白蛋白生理盐水喷雾攻击， 流速 0. 32 ml· min -1， 持续 30 min； 致敏后 d 21， 根据分组， 对大鼠 脑室内给药 1 次后抗原雾化吸入攻击测定肺功能， 其中组胺给药组脑室内注射组胺 0. 1 µg （预实验设 ·327·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2006 Jun； 22 （6） ： 723 7 置了 0. 01、 0. 1 µg 和 1 µg 3 个组， 得出 0. 1 µg 组效 果最佳， 因此本实验选用 0. 1 µg 这个剂量） ， 正常组 和模型组脑室内给予等体积生理盐水。 1. 5 大鼠侧脑室置管及给药 将大鼠麻醉后， 固定 于脑立体定位仪上， 剪去头部鼠毛， 正中纵向切开头 部皮肤约 1 cm， 暴露颅骨。用脱脂棉缠绕于眼科镊 子上钝性剥离附着在颅骨表面的组织， 并擦干颅骨 止血。根据 George Paxious 和 Charles Watson 的大 鼠脑图谱， 以 bregma 和两耳间为定标， 向后 1. 0 mm， 向右旁开 1. 5 mm 的位点用牙科钻头打一孔。 将 1 个 1. 5 cm 长的不锈钢套管通过脑立体定位仪 垂直植入孔内 3. 8 mm。为了有利于固定， 同时在此 孔周围另打两个小孔拧上螺丝， 然后用牙科水泥一 起固定。给药时， 将微量注射器与套管相连， 于动物 清醒状态即可缓缓恒速给药， 给药后留针 5 min。 1. 6 大鼠肺功能测定 9 大鼠用 2. 8 mol·L -1乌 来糖 4 ml·kg -1腹腔注射麻醉， 行气管插管后， 置于 密闭的身体体积描记箱内。用 Medlab 生物信号数 据采集仪， 记录麻醉大鼠雾化吸入抗原 （20 g·L -1 卵白蛋白生理盐水溶液， 5 min） 前后气道流速、 跨肺 压、 潮气量。肺动态顺应性 Cdyn 以平均潮气量与平 均跨肺压之比值计算， 单位为 ml·kPa -1。气道阻 力 RL以平均跨肺压与呼吸气道流速之比值计算， 单位为 kPa·h -1·L-1。 1. 7 致敏大鼠气道炎症模型的制备 大鼠致敏方 法同前。致敏后 d 15 脑室内预给药， 给药方法同 前， 不攻击； d 16、 17、 18 按上述分组， 连续给药 3 d， 给药后用 10 g·L -1卵白蛋白生理盐水溶液喷雾攻 击， 流速 0. 32 ml·min -1， 持续 30 min； d 19 行支气 管肺泡灌洗。 1. 8 支气管肺泡灌洗液 （BALF） 中白细胞计数及 分类计数 致敏大鼠股动脉放血处死后， 结扎左肺， 用含 2 U·ml -1肝素的 D-Hanks 液进行右肺支气管 肺泡灌洗， 以 1 : 1 的比例加入白细胞计数液， 用细 胞计数板计数白细胞总数， 其余肺泡灌洗液以2 000 r·min -1离心 10 min， 弃去上清液， 取 20 µl 沉淀涂 片， 瑞氏-吉姆萨染色后进行白细胞分类计数。取下 左肺后用体积分数为 0. 1 的中性福尔马林固定行病 理切片。 1. 9 统计学分析 结果以-x ± s 表示， 采用 Sigma Stat 软件包统计， 以 one-way ANOVA 和 t 检验作差 异的显著性检验。 2 结果 2. 1 侧脑室注射组胺对抗原攻击的致敏大鼠肺功 能的影响 致敏大鼠雾化吸入卵白蛋白后， 与正常 组大鼠相比， 模型组气道阻力增加， 肺顺应性降低 （P 0. 01） 。侧脑室注射组胺 （0. 1 µg·只 -1） 明显 抑制抗原攻击致敏大鼠所致的气道阻力的升高和肺 动态顺应性的降低， 与模型组相比差异有显著性 （P 0. 01） 。见 Fig 1。 Fig 1 Inhibitory effects of histamine by intracerebroventricularly administration on antigen-induced increase of airway resistance （RL）and decrease of dynamic lung compliance （Cdyn）in the sensitized rats（n =9） *P 0. 01 vs model group；#P 0. 01 vs normal group 2. 2 侧脑室注射组胺对抗原攻击的致敏大鼠气道 炎症的影响 抗原攻击后， 模型组大鼠支气管肺泡 灌洗液内的白细胞总数与正常组相比升高 （P 0. 01） ， 嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的数量也增多 （P 0. 01） ； 病理切片观察， 其气道粘膜下和血管周 围有大量的炎症细胞浸润， 以嗜酸性粒细胞为主。 侧脑室注射组胺 （0. 1 µg·只 -1） 能明显抑制致敏大 鼠抗原攻击后支气管肺泡灌洗液内白细胞总数、 嗜 酸性粒细胞和中性粒细胞数量的上升 （P 均 0. 01） ， 减少气道粘膜下和血管周围的嗜酸性粒细 胞浸润。见 Tab 1， Fig 2、 3。 3 讨论 迄今为止， 发现组胺有 4 种受体， 即 H1受体 （H1R） 、 H2受体 （H2R） 、 H3受体 （H3R） 和 H4受体 （H4R） 。 H1R兴奋可引起平滑肌收缩、 气道粘液分 ·427·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2006 Jun； 22 （6） Fig 2 Effects of histamine by intracerebroventricularly administration on inflammation cells around blood vessel in lung pathological section of antigen-challenged sensitized rats（HE ×400） . A： Normal； B： Model； C： Histamine Fig 3 Effects of histamine by intracerebroventricularly administration on inflammatiom cells below airway mucosa in lung pathological section of antigen-challenged sensitized rats（HE ×400） A： Normal； B： Model； C： Histamine Tab 1 Inhibitory effects of histamine by intracerebroventricularly administration on antigen-induced accumulation of airway inflammatory cells in bronchoalveolar lavage fluids （ ×109cells·L -1， - x ± s） Groupn Total of lung inflammatory cells Eosinophils + Neutrophils Lymphocytes Normal100.42 ±0.140.05 ±0.010.37 ±0.01 Model81.30 ±0.30#0.58 ±0.09#0.72 ±0.09# Histamine80.69 ±0.08*0.22 ±0.05*0.47 ±0.05* *P 0. 05，*P 0. 01 vs model group；#P 0. 01 vs normal group 泌增加和粘膜下水肿， 组胺诱发哮喘主要是通过 H1R 而起作用。组胺和 Ts 细胞通过 H2R 相互作 用， 提高 cAMP 水平， 进而分泌组胺抑制因子 （hista- mine suppressor factors， HSFs） ， 分泌的组胺抑制因子 能抑制诸多的细胞介导性免疫 （cell-mediated-immu- nity， CMI） ， 抑制免疫球蛋白合成， 同时也抑制细胞 因子产生， 抑制 T 细胞增殖 10。在过敏反应中， 组 胺或 H2R 激动剂兴奋细胞表面的 H2R， 又可抑制嗜 碱性细胞和肥大细胞释放组胺和其它化学介质， 增 加 PGE2的合成和释放 11。从而使气道平滑肌舒 张， 抑制炎症反应， 具有与 H1R 相对抗的作用。组 胺既可兴奋气道平滑肌上的 H1R， 也可兴奋 H2R 的 这种双重作用， 与其使用剂量有关。常规剂量的组 胺对 H1R 的作用占优势， 表现为气道平滑肌的收 缩。但在组胺浓度较低时， 可引起 H2R 的兴奋， 表 现为气道平滑肌的松弛。其中， 低浓度组胺对气道 平滑肌的松弛作用称为组胺的自身调节或负反馈调 节作用。本实验发现， 侧脑室注射 0. 1 µg 组胺明显 抑制抗原攻击致敏大鼠所致的气道阻力升高和肺动 态顺应性的降低， 也明显降低支气管肺泡灌洗液内 的白细胞总数和嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的数 量， 减少气道粘膜下和血管周围嗜酸性粒细胞浸润， 可能和上述的自身调节和负反馈调节有关。 组胺 H3R 广泛分布于中枢和外周神经末梢突 触前膜。Arrang 等 12发现外源性组胺浓度依赖性 地分别使高 K + 除极或电场刺激诱发的组胺释放量 减少。组胺经 H3R 介导， 抑制大鼠脑片和突触体标 本内组胺的合成。Schlicker 等 13发现， 组胺浓度依 赖性抑制电场刺激诱发脑内 5-HT 的释放， 组胺还 可以浓度依赖性抑制大鼠和小鼠脑片标本释放去甲 肾上腺素 14， 该效应可以被 H 3R 阻断剂所拮抗， 但 不受 H1和 H2R 阻断剂的影响。猜想外源性组胺经 H3R 介导， 抑制了脑内组胺的释放、 合成与代谢， 并 抑制交感神经末梢释放去甲肾上腺素， 从而对外周 发生了免疫调节作用。在本实验中， 脑室内注射外 源性的组胺， 抑制了抗原攻击致敏大鼠引起的气道 阻力增加和肺顺应性降低以及炎症细胞对气道的浸 润， 这与上述的研究结果一致， 提示除了外周 H1R 和 H2R 的相互调节作用外， 中枢神经系统的组胺可 能通过 H3R 而对哮喘的病理生理变化发挥调节作 用。 ·527·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2006 Jun； 22 （6） 外周血白细胞、 脾脏、 胸腺、 小肠、 大肠、 骨髓中 均发现有 H4R， 属于 G 蛋白偶联受体家族成员， 为 膜蛋白受体， 与 H3R 基因结构相似， 同源性也较 高 15。其具体作用目前还不清楚， 但 H 4R 优先表 达于与免疫活性相关细胞和组织， 可以推测其在免 疫性疾病如过敏性疾病、 哮喘等过程中有重要作用， 但由于其在中枢神经系统内不表达或弱表达， 所以 脑室内给予组胺与 H4R 兴奋的关系尚需更多的研 究。 细胞因子和其他的炎症介质之间也构成复杂的 网络参与对哮喘的调节， 而组胺通过 H2R、 H3R 和 H4R， 在调节细胞因子网络方面发挥重要作用， 如 H4R 和 H2R 可刺激 CD8 + T 细胞产生 IL-16 16， H 2R 和 H3R 可以刺激 IL-10 的产生 17。由此可见， 组胺 在神经 - 免疫 - 内分泌调节系统有着十分复杂的调 节作用。 过去的研究报道哮喘豚鼠脑内组胺含量上升， 侧脑室注射组胺受体激动剂 R-甲基组胺可减少 哮喘豚鼠呼吸道内神经源性炎症介质 P 物质， 提示 哮喘状态下， 中枢神经系统内组胺参与了作用， 但是 它的升高对哮喘的具体作用并不清楚。本实验发现 微量组胺侧脑室注射能抑制大鼠支气管收缩反应及 气道炎症， 提示中枢组胺水平升高可能对大鼠哮喘 样反应有负反馈调节作用， 可解释为临床哮喘患者 发作后的自行缓解的原因之一， 此外， 对寻找新型平 喘药物的靶点也有重要意义。 参考文献： 1 匡 荣，安宁飞，刘玉兰. 组胺研究进展 J . 中国药理学通 报， 2000， 16 （5） ： 501 -3. 2 Brown R E，Stevens D R，Haas H L. The physiology of brain his- tamineJ . Prog Neurobiol， 2001， 63 （6） ： 637 -72. 3 Passani M B，Bacciottini L，Mannaioni P F， et al. Central hista- minergic system and cognitionJ . Neurosci Biobehav Rev， 2000， 24 （1） ： 107 -13. 4 Leurs R，Blandina P，Tedford C， et al. Therapeutic potential of histamine H3receptor agonists and antagonistsJ . Trends Phar- macol Sci， 1998， 19 （5） ： 177 -83. 5 Panula P，Rinne J，Kuokkanen K， et al. Neuronal histamine defi- cit in Alzheimers diseaseJ . Neuroscience， 1998， 82 （4） ： 993 - 7. 6 董 榕，张 敏，时 斌， 等. 哮喘豚鼠脑内组胺含量的变化 及中枢组胺 H3受体的调节作用 J . 现代医学， 2003， 31 （3） ： 154 -6. 7 董 榕，张 敏. 侧脑室注射 R-甲基组胺对哮喘豚鼠呼吸 道 P 物质样免疫反应物的影响 J . 中国组织化学与细胞化 学杂志， 2003， 12 （2） ： 166 -70. 8 Deng Y M，Xie Q M，Chen J Q， et al. Coincidental increase of leukotriene B4between cerebral cortex and lung tissue of sensitized ratsJ . Acta Pharmacol Sin， 2003， 24 （10） ： 1039 -44. 9 杨秋火， 卞如濂. 呼吸机械功能实验法 M / / 徐叔云，卞如 濂，陈 修 主编. 药理实验方法学. 第 3 版，北京： 人民卫生 出版社， 2003： 1380 -92. 10Weltman J K. Histamine as a regulator of allergic and asthmatic inflammationJ . Allergy Asthma Proc， 2003， 24 （4） ： 227 -9. 11Jackson P J， Manning P J， OByrne P M. A new role for histamine H2-receptors in asthmatic airwaysJ . Am Rev Respir Dis， 1988， 138 （4） ： 784 -8. 12Arrang J M， Garbarg M， Schwartz J C， et al. Autoinhibition of his- tamine synthesis mediated by presynaptic H3-receptorsJ . Neu- roscience， 1987， 23 （1） ： 149 -57. 13Schlicker E，Betz R，Gothert M， et al. Histamine H3receptor-me- diated inhibition of serotonin release in the rat brain cortexJ . Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol， 1988， 337 （5） ： 588 -90. 14Schlicker E，Fink K，Hinterthaner M， et al. Inhibition of noradre- naline release in the rat brain cortex via presynaptic H3receptors J . Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol， 1989， 340 （6） ： 633 -8. 15王红珊，王乃平，周宏灏. 新型组胺受体： 组胺 H4受体 J . 中国药理学通报， 2004， 20 （7） ： 731 -4. 16Gantner F，Sakai K，Tusche M W， et al. Histamine h （4）and h （2） receptors control histamine-induced interleukin-16 release from human CD8 （ + ）T cells J . J Pharmacol Exp Ther， 2002， 303 （1） ： 300 -7. 17Sirois J，Menard G，Moses A S， et al. Importance of histamine in the cytokine network in the lung through H2and H3receptors： stimulation of IL-10 productionJ . J Immunol， 2000， 164 （6） ： 2964 -70. Potential regulatory effects of histamine by intracerebroventricularly administration on asthma-like reaction in rats ZHANG Shui-juan，XIE Qiang-min，DENG Yang-mei，ZHU Yi-liang，CHEN Ji-qiang （Zhejiang Respiratory Drugs Research Laboratory of State Food and Drugs Administration，College of Medical Science，Zhejiang University，Hangzhou 310031，China） Abstract： Aim To investigate regulation effects of histamine （0. 1 µg，icv）on bronchoconstriction and airway inflammation induced by antigen in sensitized rats. Methods Histamine were administrated intrace- rebroventricularly in sensitized rats，the airway resist- ance （RL）and dynamic lung compliance （Cdyn）before and after antigen-challenged were observed. The total white cell and differential cell count in Bronchoalveolar lavage fluid （ BALF） were performed.Inflammatory cells infiltration were determined by lung pathological ·627·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2006 Jun； 22 （6） section. Results Histamine （0. 1 µg，icv）inhibited the increase in RLand the decrease in Cdyn induced by antigen challenge，significantly reduced total white cell counts and the number of eosinophil and neutrophil （P 0. 01，P 0. 01 respectively） . Histamine also in- hibited eosinophil infiltration below airway mucosa and around blood vessel. Conclusion Histamine （icv）in- hibits bronchoconstriction and airway inflammation， suggesting that the increased histamine in central nerv- ous system may have regulatory effects on asthma-like reaction in rats. Key words： asthma；histamine；rats；neuroregulation 吗啡依赖和复吸时大鼠脑内神经甾体水平的变化 王 娜， 吴红海， 侯艳宁 （白求恩国际和平医院药学部， 河北 石家庄 050082） 中国图书分类号： R-332； R 322. 81； R 347. 911； R 349. 32； R 749. 61； R 977. 12 文献标识码： A 文章编号： 1001 -1978 （2006） 06 -0727 -04 摘要： 目的 探讨吗啡精神依赖和复吸对大鼠脑内神经甾体 水平的影响。方法 采用条件性位置偏爱 （CPP） 实验， 吗啡 诱导大鼠 CPP 形成， 足底电击应激诱发 CPP 重建， 高效液相 色谱-质谱法测定大鼠额叶皮质、 海马及血浆中孕烯醇酮 （PREG） 及其硫酸酯 （PREGS） 、 别孕烯醇酮 （AP） 、 脱氢表雄 酮 （DHEA） 及其硫酸酯 （DHEAS） 的含量。结果 5 mg· kg -1吗啡训练10 d 诱导大鼠产生了稳定的 CPP， 间歇足底电 击有效诱发 CPP 的重建。与对照组比较， 吗啡 CPP 形成时， 大鼠额叶皮质内 DHEA、 PREG 水平升高 （P 0. 05） ， 海马内 DHEA 水平降低 （P 0. 05） ； 与吗啡消退组比较， 足底电击诱 发 CPP 重现时， 大鼠额叶皮质内 PREG 水平降低 （ P 0. 01） ， 而海马内 PREG 水平升高 （P 0. 05） 。结论 大鼠 额叶皮质和海马内神经甾体水平的变化可能与吗啡依赖和 复吸有关。 关键词： 吗啡依赖； 复吸； 神经甾体； 条件性位置偏爱； 脑 神经甾体是指在中枢神经系统发挥作用的甾 体， 包括孕烯醇酮 （pregnenolone，PREG） 及其硫酸 酯 （pregnenolone sulfate，PREGS） 、 别孕烯醇酮 （allo- pregnanolone，AP） 、 脱氢表雄酮 （dehydroepiandros- terone，DHEA） 及其硫酸酯 （dehydroepiandrosterone sulfate，DHEAS） 、 孕酮 （prognenolone，PROG） 等， 通 收稿日期： 2006 -02 -25； 修回日期： 2006 -04 -26 基金项目： 河北省自然科学基金资助项目 （No C2005000834） 作者简介： 王 娜 （1967 - ） ， 女， 博士生， 副主任医师， Tel： 0311- 87978503， E-mail： wangncqhd163. com； 侯艳宁 （1957 - ） ， 女， 博士， 教授， 博士生导师， 研究方向： 生化药理及临床药理， 通讯作者， Tel：0311-87978480， E- mail： houyn163. com 过作用于 -氨基丁酸 A （GABAA） 、 N-甲基-D-天门 冬酸 （NMDA） 、 -氨基-3-羧基-5-甲基异唑-4-丙酸 （AMPA） 、 Sigma （） 和 5-羟色胺 （5-HT） 等膜受体发 挥快速神经调节作用， 被称为第四代神经递质 1， 2。 吗啡依赖是一种慢性、 易复发性脑病， 在吗啡依赖的 形成和复吸过程中， 涉及到脑内多种神经递质的变 化， 神经甾体是否也参与其中引起了人们的关注。 研究表明神经甾体可抑制小鼠吗啡依赖和耐受的形 成， 减轻吗啡戒断症状 3， 4； 吗啡依赖和戒断可影响 大鼠脑内神经甾体的水平 5， 6。但有关吗啡复吸与 神经甾体水平之间的关系还未见报道。本文利用条 件性位置偏爱 （conditioned place preference，CPP） 的 吗啡精神依赖模型， 以足底电击作为应激因素恢复 大鼠已消退的 CPP 重现， 运用高效液相色谱 - 质谱 测定大鼠额叶皮质、 海马和血浆中 PREG、 PREGS、 DHEA、 DHEAS 和 AP 的含量， 研究了其在吗啡精神 依赖及应激诱发复吸时的变化。 1 材料与方法 1. 1 动物及分组 Sprague Dawley （SD） 大鼠， 河 北省实验动物中心提供 （级， 合格证号： DK0411- 0118） 。随机分为生理盐水对照组 （Control） 、 吗啡 依赖组 （Dependence） 、 吗啡消退组 （Extinct） 和足底 电击组 （Footshock） ， 每组 12 只， 大鼠摄食、 饮水自 由。 1. 2 试剂和仪器 DHEA、 PRGE、 AP、 DHEAS、 PREGS、 雌酮硫酸酯 （estrogen sulfate，ES） 购自美国 Sigma 公司。甲睾酮 （methyltestosterone，MT） 购自 中国 药 品 生 物 制 品 检 定 所。盐 酸 吗 啡（ 批 号 040306） ， 沈阳第一制药厂提供。HP-1100 高效液相 色谱 - 质谱系统， 美国 Agilent 公司。条件性位置偏 爱箱 （自制） ， 分左右两室， 其中一室侧壁全黑， 底面 ·727·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2006 Jun； 22 （6） ： 727 30