一起由肠炎沙门菌引起的食物中毒的实验室检测.pdf

91 8 中国卫 生检验杂志2 008 年5 月第1 8 卷第5 期 C h i n ， J o urnalofH ealt h L 日 到 .ra to tyT eC h n o l o gy， M 盯2 008 ; v oll 8 N o s 【 暴发流行事例检测】 一 起 由 肠 炎 沙 门 菌 弓 !起 的 食 物 中 毒 的 实 验 室 检 测 全玉平，贾永强，贾桂华 ( 河南省许昌市疾病预防控制中心， 河南许昌 461 X 到 ) 摘要】 目的: 对一起引起食物中毒的可疑病原菌进行相关的实验室检测。 方法: 在流行病学调查基础上， 按照G B/ T478 9 一 2 00 3 ， 开 展 实 验室 细菌 分 离和 病 原学 鉴 定。 结 果: 对10份来源 于 酒店的 样品， 17份 病人 大 便， 2 份呕 吐 物 进行 细菌分离， 生化试验与血清学诊断; 对24 名患者急性期与恢复期双份血清进行肥达氏反应。结果检出21 株肠炎沙门 菌， 双份血清滴度均有4 倍以上升高。结论: 根据流行病学调查， 临床资料分析， 致病菌分离结果， 证实这是一起由肠炎 沙门菌引起的食物中毒暴发事件。 关键词 食物中毒; 病原菌; 检咧 中图分类号 R 1 5 5 . 3 1 文献标识码I B 文章编号 ll x 科一 8 6 8 5 ( 2 008 ) 0 5 一 091 5 一 似 沙门菌在自 然界分布广泛， 易污染食品， 由沙门菌引起的 食物中毒在各类细菌性食物中毒中占首位。人们如果摄人大 量( 1 护c 何9 ) 含有沙门菌的食品后， 会出现以胃 肠炎症状 为主 的 临 床中 毒 症状 。 2 00 7 年9 月， 某酒店发生了 一起疑 似食物中毒事件， 经流行病调查， 临床资料分析和实验室检 验， 确认是一起由肠炎沙门菌污染牛肉引起的食物中毒事件， 现将结果报告如下: 1 流行病学调查 2 007 年9 月18 日中午， 某酒店举办面条宴， 每桌9 人， 共 2 6 桌， 参加就餐有2 34人， 进餐后 4h出现首例中毒患者， 到 次日16时共发病 1 08 人， 发病率为46. 1 %， 潜伏期最短4h ， 最长28 h ， 发病大多集中在用餐后4 一 12h 。 2 临床症状 病人的主要临床症状为急性胃 肠道中毒症状， 腹痛108 人 ( 1 00%) ， 腹泻98人( 91. 7 %) ， 黄( 绿) 色水样便， 有恶臭， 少数 有脓血 37 人( 34. 2 %) ， 发热 79 人( 73. 1 %) ， 最高体温达 3 9 . 8 ， 恶心呕吐57 人( 52. 8 %) ， 经抗生素治疗和对症治疗 3 d 后全部康复。 3 实验室检验 3 . 1 标本采集 9 月18 日 下午6时疾控中心接到疫情后， 赶到酒店采集 剩菜6 份( 干炸鱼、 卤牛肉、 孜然羊肉、 烧鸡块、 清椒肉丝、 竹签 牛肉各一份) ， 刀具2 份， 砧板2 份， 共ro份， 赴医院采集腹泻 病人粪便 17份， 呕吐物2 份， 抽取发热病人急性期与恢复期双 份血清24份。 3 . 2 方法与材料 检验方法根据 G B/T 4 7 8 9一 2 003 食品卫生微生物学检 验 操作。沙门菌诊断血清由卫生部成都生物制品研究所生 产; 增菌、 分离用培养基、 新型微生物微量生化鉴定盒由广东 环凯微生物科技有限公司生产; 药敏纸片由北京天坛药物生 物技术开发公司生产， 以上试剂均在有效期内 使用。 3 . 3 分离 培养 对于来源于酒店的10份样品按 G B / T47 89 进行操作， 将 患者大便分别接种到麦康凯( M A C ) 和55平板进行分离， 对2 份呕吐物进行前增菌后同食品样品操作。可疑菌在 H E琼脂 平板上: 菌落呈蓝绿色， 中心几乎全黑色; 在 M A C琼脂上， 菌 落呈圆形、 突起、 湿润、 光滑、 无色， 透明; 在 B S 琼脂上: 呈灰褐 色， 带有金属光泽; 在55琼脂上: 光滑、 湿润， 中心黑色。经革 兰氏染色和镜检， 菌落呈G 一 短小无芽胞杆菌。 3 . 4 生化反应 挑取可疑菌落接种双糖铁上， 36 士 1 24 h培养， 底层变 黑有气体， 斜面变红， 分解葡萄糖， 产酸产气， 其它生化反应见 表 1 。 表 1 菌株生化实验结果 葡萄糖 乳搪 麦芽糖甘露醇蔗搪靛基质甲基红v P 试验 构摊酸盐 氮化钾 赖氨酸苯丙氨酸 脱梭酶脱氨酶 尿素 硝酸盐 还原试验 触酶 一0一一+一+一十一一+ . . . . . 种 . . . 种 种 . 口 种 种 . . 种 种 . 种 户 . 种 种 . . . 3 . 5 血清学鉴定 与沙门菌诊断血清A一 F “ 0 ” 多价血清做玻片凝集试验， 阳性; 同时用生理盐水对照不凝集。与09 因子血清凝集， 与 作者简介 全玉平( 1 %8 一 ) ， 女， 学士， 副主任技师， 主要从事 卫生微生物检验工作。 H g ， H m因子血清凝集; 其抗原模式为09: 9 : m 。查沙门菌抗原 表为肠炎沙门菌。 3 . 6 药敏试验 用K 一 B 纸片法对分离菌株做药敏试验， 结果对庆大霉 素、 丁胺卡那霉素、 环丙沙星、 氟呱酸、 氯霉素、 头抱唾厉、 痢特 灵敏感; 对磺胺、 青霉素耐药。 万方数据 中国 卫生检验杂志2 的8 年5 月第1 8 卷第5 期 C h i n ， J O U r n alofH ealth压 bo r a l月 J 叮，r e c hno lo gy， M ayZ 的5 ; V oll 8 N 。 5 9 1 9 3 . 7 患者血清杭体效价测定 24名患者急性期与恢复期血清凝集效价对比， 血清滴度 有4 倍以上变化。 4 检验结果 样品份数检出肠炎沙门菌份数检出率( %) 可疑食品 涂抹样品 呕吐物 粪便 3 3 . 3 3 1 oo ! oo 者、 年长老人、 免疫低下者。污染源主要是人和家畜的粪便， 沙门菌常存在于动物中， 在许多环境中也有存在。该酒店9 月1 8日 午餐供应的牛肉是前一天早上采购的， 当天放在筐 中， 未冷藏放置4 h 才进行加工卤制， 卤后未放人冰箱， 第二天 中午未经加热直接拼盘， 当时天气炎热， 适宜沙门菌生长， 估 计沙门菌污染牛肉后未经加热直接食用造成本次食物中毒。 因此， 生熟肉类及其他动物性食品应该分开并尽快地贮存于 冰箱内， 防止细菌大量生长繁殖， 餐前一定要充分加热， 彻底 杀死病原微生物; 同时加强食品卫生监督管理和 食品卫生 法 宣传， 提高从业人员的卫生意识， 严格执行H A C C P 规程是 控制食源性疾病的关键措施。 20217 参考文献 5 讨论 本次食物中毒经流行病学调查、 临床资料分析及实验室 检验证实是一起由肠炎沙门菌污染牛肉引起的食物中毒。在 各类细菌性食物中毒中， 多数国家以沙门菌引起的食物中毒 占首位， 在我国沙门菌食物中毒位居第一， 引起中毒的食品主 要为家畜肉及其制品、 蛋类、 奶类及其制品， 由大量摄人( 1 护) 沙门菌污染的食物所致， 最易感群体是年幼儿童、 虚弱 仁 lG B/T 4 7 89一 2 00 3 . 食品 卫生检验方法 微生物学检验【 5 . 【 2 刘运德. 微生物学检验【 M . 北京: 人民 卫生出版社， 2 0 C 3 : 6. 3 张秀丽， 廖兴广， 沈刚建， 等. 微生物性食物中毒的检验及防治 【 M . 中原农民出版社， 2 001 : 8 4 王琳娜. 一起由肠炎沙门菌引发食物中毒的实验室检测【 J . 中 国卫生检验杂志， 2 0 0 7 ， 1 7 ( 7 ) : 1 2 99. ( 收稿日 期: 2 (X)8 一 0 1 一 1 4 ) ( 上接第8 40 页) X 一样品中10一 H A D的浓度， m 岁L C 一样品处理液中10一 H A D的浓度小留耐 1 0 一样品稀释 倍数 2 . 3 样品测定 应用该方法测定了王浆鹿茸口 服液六批次 12个样品， 测 定结果在18 5 一 2 38m 岁L之间。 样品中共存物不干扰测定， 见图 10 2 结果与讨论 2 . 1 方法的精密度、 线性范围和最低检出浓度 用甲醇稀释标准工作液， 配制浓度为0 ， 5 . 0 ， 1 0 . 0 ， 25. 0 和 5 0 . 0 卜 留 耐 的 标准系列。在上述色谱条件下， 分别取5 . 0 闪 各标准溶液进样， 每种浓度平行测定6次。计算峰面积平均 值。以标准溶液的浓度对测定结果平均值计算回归方程 Y 二 18 7 9 3 x + 5 7 21， 相关系数r 二 0 . 9995。 表明在该浓度范围内， 线 性关系良好。 以10倍噪声信号所对应的浓度为最低检出浓度， 经计算 该方法的最低检出 浓度0 . 11林 酬耐。 计算4 种浓度6 次测定结果的相对标准偏差娜 。 ) 分别 为94. 1 %， 9 6 . 4 %， 9 5 . 8 %和9 8 . 2 %。 2 . 2 准确度实 验 用样品加标回 收率来考察方法的准确度。 取混匀后样品 1 . 00 园， 分别加人低、 高二种浓度标准溶液， 每种浓度平行测 定6 个。 依法测定， 计算回收率。 图1 样品分离色谱图 】 0 一 H A D的保留时间: 5 . 侧 ) 7m in 3 小结 本文建立了王浆鹿茸口服液中10一 H A D含量的高效液 相色谱测定方法。方法的回收率在95. 8 %一 98. 1 %之间; 方 法的精密度( 尺 S D ) 在94. 1 % 一 98. 2 %之间。样品处理方法简 便， 避免了大量有机溶剂的使用， 结果准确可靠。 参考文献 表 1 回收率实验结果 本底值( 卜 合 厂 耐) 加标量( 此) 检出量( 此) 回收率( %) 1 9 31 20 1 9 32 5 0 2 9 53 03 4 2 7 4 4 5 9 5 . 8 9 8 . 1 1 耿纯. 蜂王浆的降血脂作用 【 J. 中国养蜂， 2 (X X)， 5 2 ( 1 ) : 36 【 2 巫冠中， 刘国卿， 等. 王浆酸人工合成品的免疫调节作用 【 J. 中 国药理学与毒理学杂志， 1 996 ， 1 0 ( 1 ) : 53 一 55. 3 马琅， 杜丹. 保健食品中10一 经基一 。一 癸烯酸的高效液相色谱 测定法【 J 预防医学情报杂志， 2 005 ， 3 : 3 68. 【 4 郑伟， 冯颇， 俞建平， 等. H P LC 法测定虫草精王浆胶囊中10一 经 基一 2 一 癸烯酸的含量【 J. 中药新药与临床药理， 2 001 ， 6 : 4 33. ( 收稿日 期: 2 叨8 一 0 1 一 1 0 ) 万方数据