地塞米松对哮喘豚鼠PS的影响.pdf

山东医药 2 0 0 6 年第 4 6 卷第 1 3 期 地塞米松对哮喘豚鼠P S的影响 康春燕， 刘长庭， 茅培英 ( 解放军总医院， 北京 1 0 0 8 5 3 ) 【 摘要】 将 2 4 只雄性豚鼠随机分为哮喘组、 地塞米松干预组， 两组均用高效液相色谱法测定其支气管肺泡 灌洗液( B A L F ) 中的磷脂酞胆碱( P C ) , 磷脂酞乙醇胺( P E ) 水平; 用L o w r y 法测定B A L F中的总蛋白含量; 电镜观 察两组肺表面活性物质( P S ) 超微结构变化。 结果显示， 与哮喘组比较， 地塞米松干预组B A L F中P C和P E增加， 总蛋白 降低( P 0 . 0 1 ) 。 哮喘组P S 层丧失正常的连续结构， 肺泡I 型上皮细胞内 板层体空泡化; 地塞米松千预组 P S层基本连续， 肺泡 I 型上皮细胞内板层体少量空泡化。 提示地塞米松对P S的影响可能为其有效治疗哮喘的作 用机制之一。 【 关健词】 地塞米松; 哮喘; 肺表面活性物质; 超微结构; 支气管肺泡灌洗液 中圈分类号】 R 5 6 2 文献标识码】 B【 文章编号】 1 0 0 2 - 2 6 6 X( 2 0 0 6 ) 1 3 - 0 0 2 7 - 0 2 1 9 9 0 年， E n h o r n i n g 提出支气管哮喘( 哮喘) 发 作可能与肺表面活性物质( P S ) 相对不足有关， 此后 多项实验研究证实补充外源性 P S有助于缓解哮喘 症状， 糖皮质激素治疗哮喘的作用可能部分由于其 对P S的影响， 但目前尚未得到进一步验证。 2 0 0 3 年， 我们建立了豚鼠哮喘模型， 并用地塞米松干预， 比较 地塞米松干预前后哮喘豚鼠的P S变化， 探讨地塞米 松对其P S 影响的作用机制。 1 材料与方法 1 . 1 实验分组健康英国种雄性短毛豚鼠2 4 只， 鼠龄2 5 -3 5 d ， 体重 1 5 0 -3 0 0 g , 购于军事医学科学 院实验动物中心。 随机分成哮喘组、 干预组各1 2 只。 1 . 2 实验方法哮喘组首日腹腔注射 1 0 %卵蛋白 ( 美国S i g m a 公司) 溶液0 . 5 m l 致敏， 3 周后开始隔日 1 次超声雾化吸人 0 . 1 Y O 卵蛋白溶液至出现打喷嚏、 口唇青紫、 明显腹肌收缩、 呼吸困难、 步态不稳、 抽 搐、 休克等症状。干预组致敏和激发方法同哮喘组， 从第 2 次雾化吸入激发开始， 每次激发前 4 0 m i n 腹 腔注射地塞米松1 . 5 m g / k g 。 待动物末次激发哮喘症 状好转后， 制备支气管肺灌洗液( B A L F ) 及光镜、 电 镜标本。参照王凤君等川建立的高效液相色谱法测 定B A L F中的磷脂组分， 即磷脂酞胆碱( P C ) , 磷脂酞 乙醇胺( P E ) ; L o w r y 法测定 B A L F中的蛋白水平， 即总蛋白( T P ) 。 光镜标本固定后， 常规脱水包埋， H E 染色， 采用日 本O L Y MP A S公司光镜观察。电镜标 本经过固定、 脱水、 包埋、 染色后， 应用J E M- 1 2 3 0 透 射电子显微镜观察两组P S 超微结构变化。 1 . 3 统计学处理应用S P S S 统计软件进行分析， 基金项目 中央保健委员会保健专项资金科研项目( 2 0 0 2 解B 0 2 1 ) 数据以万 士 : 表示， P 0 . 0 1 有显著统计学意义。 2 结果 2 . 1 光镜结果哮喘组支气管痉挛收缩， 平滑肌增 厚， 支气管腔内有分泌物及脱落上皮细胞， 管腔狭 窄， 杯状细胞增多， 炎性细胞渗出增多( 尤以嗜酸粒 细胞明显) 。肺泡区有炎性细胞浸润。干预组支气管 痉挛缓解， 管腔相对扩张， 仍有少量炎性细胞浸润， 腔内存在少量分泌物。 2 . 2 两组B A L F中P C , P E及T P比较哮喘组P C ( 6 1 3 . 8 7 士8 . 7 7 ) t .g / m l , P E ( 6 5 . 7 5 士2 . 2 5 ) K g / m l , T P ( 2 4 4 . 7 5 士2 3 . 8 5 ) u g / m l ; 干预组分别为( 7 3 5 . 2 5 士 1 3 . 7 7 ) 、 ( 1 0 9 . 0 0 士2 . 3 9 ) 、 ( 8 0 . 5 0 士1 2 . 3 6 ) k g / m l 。 两 组 比较， 干预组 P C , P E增加， T P明显降低( P 0 . 0 1 ) 。 2 . 3 电镜结果哮喘组 P S层丧失正常的连续结 构， 出现断裂、 脱落人肺泡腔或聚集成块现象; 肺泡 II 型上皮细胞内板层体空泡化。 干预组P S 层基本连 续; 肺泡H 型上皮细胞内板层体少量空泡化。 3 讨论 近年研究认为， 哮喘气道炎症的主要病理学改 变为: O O 豁膜组织中大量炎性细胞浸润， 以嗜酸粒细 胞居多， 其次是淋巴细胞、 中性粒细胞等; 气道戮 膜炎症导致管壁增厚， 包括平滑肌肌层增生， 基底膜 变性增厚; 大量炎性渗出造成气道戮膜不同程度 的水肿， 支气管腔中渗出物明显增加; 钻液腺化 生， 气道内猫液分泌增加， 并赌留在支气管内形成粘 液栓 2 。本文复制的哮喘模型中均可观察到上述病 理改变， 说明复制模型成功。 P S是一种复合磷脂， 含8 5 0 0 9 0 0 0 磷脂。磷脂 由约7 5 %的P C , 5 %的P E , 磷脂酞甘油、 磷脂酞肌醇 2 7 山东医药 2 0 0 6 年第 4 6 卷第 1 3 期 等组成。本文结果显示， 地塞米松干预后B A L F中 P C , P E增加， 可能与地塞米松控制炎性改变， 减少肺 泡II 型上皮细胞破坏; 诱导脂皮素合成与释放， 抑制 肥大细胞膜上磷脂酶 A2 活化， 减少 P S中磷脂的分 解有一定关系。 哮喘发生时， 炎症细胞释放炎症介质， 引起支气 管壁和毛细血管通透性增高， 导致血浆蛋白、 纤维蛋 白渗出明显增多。研究表明， 渗出的血浆蛋白与P S 结合可干扰P S分子膜的快速吸附， 使其不能发挥正 常生理功能。P S活性在体外主要表现为降低液体的 表面张力， 使其随表面积的改变而变化。 甘小庄等研 究发现， 随血浆蛋白浓度增高， 最小表面张力和最大 表面张力随之增高; 血浆蛋白浓度越高， 对P S活性 抑制越大， 但这种抑制作用是可逆的， 即P S与血浆 蛋白浓度比值高时， 蛋白抑制作用小; 反之， 抑制作 用增强。P S失活可导致末梢支气管塌陷， 形成空气 阀， 最终使气道阻力增加， 出现呼吸困难。因此认为， 末梢支气管 P S迅速失活( 功能性缺乏) 是导致哮喘 气道阻力升高的重要原因; 地塞米松能减轻微血管 渗漏， 使蛋白水平明显降低。 表明地塞米松不仅影响 P S的数量， 而且影响其活性。 P S超微结构由铺展在肺泡表面的活性物质层与 合成和分泌表面活性物质的II 型上皮细胞构成 3 1 P S在肺泡 II 型上皮细胞的内质网中合成， 通过高尔 基复合体转运到板层体中贮存， 因此， 板层体形态改 变提示P S 合成改变。 板层体通过胞吐作用被分泌人 肺泡腔， 最终形成吸附在末梢细支气管和肺泡表面 的单分子膜， 从而发挥降低末梢细支气管、 肺泡气一 液表面张力， 防止呼气末末梢细支气管和肺泡萎陷 的作用。P S层破坏及肺泡 Y 型上皮细胞内板层体空 泡化， 可直接影响P S的质与量， 进而妨碍 P S发挥正 常作用。 本实验观察到哮喘时超微结构P S层出现断 裂、 脱落人肺泡腔或聚集成块现象， 板层小体空泡 化， 提示有P S系统损伤。 其损伤的可能机制是: 炎 性反应时， 渗出的血浆蛋白与P S 结合导致P S失活， 炎性水肿、 豁液分泌加速 P S分解和清除， 使 P S减 少， 机体反射性调节使肺泡 II 型细胞代偿合成和分 泌增加， 但短时间P S系统不能维持正常的合成和分 泌， 故出现板层小体空泡化。 哮喘时缺氧和间质水 肿致肺泡 II 型上皮细胞代谢障碍， 炎性水肿可改变 P S 层的结构， 出现结构紊乱和崩解。气道中的强 氧化剂过氧化氢形成增加， 也可使 P S合成受抑 制 4 1 。 P S 层断裂和脱落后， 难以发挥其降低表面张力 的作用; 肺泡 II 型上皮细胞破坏直接影响 P S合成， 板层小体空泡化影响P S的分泌和功能发挥。 说明哮 喘时P S系统结构异常可使P S 功能降低， 其病理过 程在 P S与哮喘发病的关系中可能起一定作用; 而地 塞米松干预后， P S的上述异常改变明显好转。因此 认为， P S在哮喘发病中具有重要作用， 地塞米松对 P S系统的影响可能是其有效控制哮喘发作的重要机 制之一， 两者的具体作用关系尚待进一步研究探讨。 【 参考文献】 1 王凤君， 赵云， 谢尔凡， 等. 高效液相色谱法测定生物样品中磷脂 含量C J 7 . 第三军医大学学报， 1 9 9 6 , 1 8 : 6 7 - 6 8 . 幻 李明华， 殷凯生， 朱栓立. 哮喘病学 M . 北京: 人民卫生出版社， 1 9 9 9 : 7 8 . 3 邓琳， 方凤， 方超萍， 等. 氨澳索对哮喘豚鼠肺表面活性物质系统 超微结构的影响 7 7 . 第二军医大学学报， 2 0 0 1 , 2 1 ( 2 ) : 1 8 0 - 1 8 1 . 4 史菲. 肺表面活性物质在哮喘中的地位【 7 7 . 临床荟萃， 2 0 0 2 , 1 7 ( 6 ) : 3 6 1 - 3 6 3 . ( 收稿日期= 2 0 0 6 - 0 2 - 2 5 ) ·临床札记 · 介绍一种气管切开术后减少痰痴形成 和肺部感染的方法 丛月英， 吕婚， 赵红兵 I ( 威海市文登中心医院， 山东文登 2 6 4 4 0 0 ) T t 床上， 病情危重患者行气管切开术后， 随时可能发生窒 息等危及生命的并发症， 另外， 气管切开后， 由于呼吸道湿化、 加温作用丧失， 呼吸道分泌物千燥结痴， 阻塞管腔， 可能增加 肺部感染。传统的方法是采用雾化吸人和定期气管内滴药保 持呼吸道湿化， 以预防感染， 稀释痰液。其缺点是每次用药量 不均衡， 量小不易达到肺内， 只能在气管内抑菌和湿化痰液; 量大则丢失肺内表面活性物质， 诱发医源性支气管哮喘。 在临 床实践中， 我们探索出一种简单易行的气管切开术后减少痰 痴形成和肺部感染的方法。现介绍如下。 方法: 将生理盐水4 0 m 1 , 糜蛋白 酶 5 m g 、 庆大霉素8 万U 等湿化液注人一次性止痛泵， 止痛泵另一端连接于一次性头 皮针软管上， 将软管固定气管套管侧壁， 插人气管套管深度为 5 7 c m， 根据痰液的粘稠程度， 以2 5 m 1 / h的速度向气管内泵人 湿化液。 体会: 实践证明， 应用一次性止痛控制泵进行气道湿化的 优点是可保证用药剂量准确、 微量、 持续， 使用方便; 湿化液缓 慢泵人不仅使人工气道保持良好的持续湿化， 而且对气道无 刺激， 可降低痰液猫稠度， 减少痰痴形成; 使分泌物引流通畅， 减少吸痰对气管猫膜的损伤， 同时减少肺部感染的机会。