地塞米松预处理对新生鼠缺氧缺血脑损伤的保护作用.pdf

中国儿童保健杂志2 0 0 8 年0 4 月第 1 6 卷第2 期cjc H CA p r . 2 0 0 8 ， V O l l 6 ， N o . 2 1 8 5 文章编号: 1 0 0 8-6 5 7 9 ( 2 0 0 8 ) 0 2 一1 8 5 刃3 地塞米松预处理对新生鼠 缺氧缺血脑损伤的保护作用 【 基础科研论著】 王宝宏， 马莲美， 孙允宵， 王捷勇 ( 滨 州医 学 院附 属医 院 儿科， 山 东滨 州 2 5 6 00 0) 中图分类号: R 7 2 2 . 1文献标识码: A 摘要: 【 目的】 观察地塞米松( dexam et h a sone， D X M) 预处理对缺氧缺血新生鼠脑组织兴奋性氨基酸( e xci t at ory a m i no ac记， E A A ) 和Gfo s 蛋白表达的影响， 探讨不同剂量 D X M对新生鼠缺氧缺血性脑损伤( h yP。 劝 a- i sc hem iab ra in dam age ， H I B D ) 的保护作用。 【 方法】 60只新生鼠随机分为4 组， 假手术组， H IBD组， 小剂量D X M预处理组及大剂量 D X M预处理组， 每组 15 只。所有动物均于造模后 Z h 断头处死， 应用高效毛细管电泳和免疫组化方法， 分别检侧假手术 组、 H I B D组、 小剂量D X M预处理组(0， s m g / 比) 及大剂量 D X M预处理组( 10 m g /k9)的脑组织兴奋性氨基酸( 谷氨酸、 天门冬氨酸、 甘氨酸) 含量及c-fo ， 蛋白表达水平。 【 结果】 H I B D组的各种 E A A含量及c-fo s 蛋白表达均较假手术组 明显升高( 尸 0 . 0 5 ) ; 大剂 量 D X M预处理组 E A A含量较 HI B D组明显减少( 尸 0 . 0 5 ) ; E A Ac o n t e n t s o f l a r g e d o s e D X Mp r o p h y l a 劝 s g r o u p g reat l y d e c r e a s e d ， c o m p a r e d w i t hH I B Dg rou p( P 0 . o 5 ) ， 大剂量 D X M预处理组显 著减少( 尸 0 . o 5 ) ; 大剂量 D X M预处理组较 H IBD组及小剂量D X M预处理组 Gf os蛋白表达均有明显 减少( 尸 。 . O 5 ， “ 尸 0 . 0 5 ， . P 0 . 0 1 ; 与小剂tD X M预处理组比较， . P 00 1 。 3 讨论 3 ， 1 缺氧缺血时E A A及C 一 fo s 基因转录、 表达参与了脑细 胞损伤、 坏死过程研究表明， 脑缺氧缺血时， 氧和能量供应 不足， 神经细胞膜加速去极化， E A A ( 主为G L U 、 A SP、 G L Y ) 大量释放， 以及由于能量缺乏， E A A被灭活功能下降， 再摄 取受阻， 造成细胞外 E A A大量堆积， 过度激活 E A A受体 ( N M D A型、 A M P A型) ， C 扩 + 大量内流， 引起细胞内一系列 钙依赖的过度生化反应， 导致神经细胞迟发性变性、 坏 死 3 一 4 1 。此变性、 坏死主要为细胞凋亡， 细胞凋亡的发生与立 早基因c-fo s 表达增加有关sJ。c-fo s 表达促进凋亡的机制 尚未阐明， 可能与Gfos 基因表达产物即Gfos 蛋白构成转 录因子一 1(A P 一 ”有关s， A P-1 是凋亡信号传递的结构基 础， 其 D N A结合区域有 T P A反应元件( T R E )， 通过各自 的碱性氨基酸区域与D N A结合， 调节 D N A的复制和转录， 诱导其它多种 T R E的基因表达， 并作为基因调节蛋白调节 靶基因或晚发基因的转录， 进而诱导细胞凋亡.本组研究结 果显示， H IE 组脑组织 E A A含量及 Gfo s 蛋白表达水平均 较假手术组明显增高， 提示缺氧缺血时 E A A及 Gfo ， 基因 转录、 表达参与了脑细胞损伤、 坏死过程。 3 . 2 大别圣 D X M预处理对 HI E脑报伤有保护作用目 前， 有关学者充分认识到 E A A神经毒性在 H IE 发生与发展 中起关键作用， 亦是促进 Gfo s 基因转录、 表达增加， 导致神 经细胞凋亡的主要原因， 因此， 选择一种在 H IE 发生发展中 能有效抑制E A A的合成、 释放及降低 Gf os蛋白表达的药 物变得至关重要。国内赵丽云等LvJ通过动物实验证实， 早期 大剂量应用糖皮质激素干预可减轻脑损伤; 临床经验亦表 明， 早期大剂量应用D X M 1 . 5 2 . 0 呢/ ( k g · d ) ， 2 4 h 内 治疗 H I E 较小剂量D X M 0 . 0 5 0 . i m g / ( k g · d ) ， 2 4 h 内 取得显著疗效， 在减轻 H I E脑损伤方面可能发挥着重要作 用。其具体保护机制不明， 涉及多种因素。本研究利用动物 万方数据 中国儿童保健杂志2 0 0 8 年0 4 月第1 6 卷第2 期 cJC H cA p r . 2 0 0 5 ， vol l 6 ， N o . 2 1 8 7 模型， 依据人与大鼠转换因子的关系， 确定D X M实验剂量， 预防性给予小剂量 D X M( 0 . sm g / 掩) 和大剂量 D X M( 10 m g / k g ) ， 观察其对新生鼠H IE脑组织 E A A含量及C-fo s 蛋 白表达的影响.结果显示， 大剂量 D X M组 E A A含量较小 剂量 D X M 组低; 大剂量 D X M 组 C-fo s 蛋白表达较小剂量 D X M组明显降低; 小剂量 D X M组 E A A含量及 Gfos 蛋白 表达与 H IE 组比较无明显变化.本研 究证实了大剂量 D X M预处理对 H IE脑损伤保护作用的有效性， 其保护机制 在于大剂量D X M能够稳定和保护膜性结构包括细胞膜、 溶 醉体膜、 突触前膜及肥大细胞颗粒; 抑制核因子一 K B ( N 卜 K B)的活性， 使多种炎性介质 ( T N F-2 、 I L-1等) 的产生减 少阁; 减少自由基生成， 阻止自由基反应， 减轻生物膜损 伤9。因此可减少 E A A的释放， 维持酶的降解及突触后膜 对 E A A的重摄取功能， 相对减少了E A A的浓度， 削弱了对 E A A受体特别是 N MD A受体的刺激， 抑制了caZ + 大量内 流， 降低 Gfo s 基因转录、 表达， 从而阻碍了神经细胞凋亡的 发生.据此推测大剂量 D X M预处理的保护作用之一可能 是通过抑制脑组织 E A A的释放， 随后降低 c-fos 基因的转 录、 表达而起脑保护作用。 本研究通过大剂量 D X M预处理可抑制新生大鼠H IE 脑组织 E A A的释放及降低 c-fo s 蛋白的表达， 从蛋白质分 子水平上证实了大剂量 D X M是神经细胞切实有效的保护 剂， 在 H I E脑损伤方面具有很好的应用价值， 对临床上高危 妊娠儿在临产前应用大剂量 D X M 预处理可能对减轻新生 儿 H IE 脑损伤有一定的保护作用， 但此措施的可行性及用 于胎儿的有关剂量问题尚需进一步研究。 参考文欲 3 1 李石志， 肖农， 周江. 堡缺氧缺血性脑病的药物治疗进展 J I 国际儿科学杂志， 2 0 0 7 . 3 4 ( 1 ) : 6 7 一 6 9 . R ic e J E ， V a n n u c c i R C ， B r i e r l e y J B . T h e in fl u enc e o f i m ma - t u t y o nh y p o 石 c- i s c h e 而c b ra i nd a m a g ei nt h e ra t J . A nn Ne u r o l ， 1 9 8 1 ， 9 ( 2 ) : 1 3 1 一 1 4 1 . Carna rata PJ ，H e rosR C ，Lat c h a w R E ，e t a l .“ B r a i na t - t a c k ， : t h er a t i o n a l efo r t rea t i n gs t r o k ea sam edi cal e m e r - g e n c y J . N e u ro s u r g e 口， 1 9 9 4 ， 3 4 ( 1 ) : 1 4 4 一 1 5 8 . N i s h i z a wa Y . G l u t a m a t er e l e a s ea n dn e u r o nal d a m agei ni s - c h e m i a J L if e sci ， 2 0 0 1 ， 6 9 ( 4 ) : 3 6 9 一 3 8 1 . 吴伟， 史继新. 脑缺血再湘注损伤后神经损伤机制及治疗研 究进展 J . 中国徽循环， 2 0 0 3 ， 7( 6 ) : 3 9 1 一 3 9 4 . 周坷， 李庚山， 余绍祖. 脑缺血再灌注损伤时 c-fos 、 c-j u n的 表达和细胞凋亡 J . 卒中与神经疾病， 2 0 03， 1 0 ( 1 ) : 3 一 6. 赵丽云， 叶铁虎， 郭向阳. 大剂量地塞米松对犬心肺复苏后脑 损伤程度及血浆中兴奋性抓基酸的影响 J . 基础医学与临 床， 2 0 0 3 ， 2 3 ( 3 ) : 3 1 0 一 3 1 3 . 吴其夏， 余应年， 卢建. 新编病理生理学 M . 北京: 中国协和 医科大学出版社， 1 9 99: 2 2 5 一 2 2 6. 姚裕家， 李炜如， 李念. 地塞米松在新生猪块氧缺血性脑损伤 中的防治作用 J . 中华儿科杂志， 1 9 9 4 ， 3 2 ( 4 ) : 2 0 1 一 2 0 2 . 收摘 日期: 2 0 0 7 一 1 2 一 2 4 飞J门esl ，二叮 一.LFI一 -，J，.J，.1门 月限d月七月了 rLr.-rLrL 门J一esJ 80口 rLr胜J 文章编号: 1 0 0 8 一 6 5 7 9 ( 2 0 0 8 ) 0 2 一 0 1 8 7 一 0 1【 基层儿保园地】 巨 细 胞 病 毒 感 染 患 儿 血 清 细 胞 因 子I L I 日 、 I L 一 Z R 、 I L 一 10的 检 测 与 应 用 全建军， 许文龙， 窦琳琳( 浙江萧山医 院检验科， 浙江萧山 3 1 1 2 o D 中图分类号: R 1 72文献标识码: C 关挂词: 巨细胞病毒; 细胞因子; 检洲 巨细胞病毒( c yt o m e g a l o v i rus ， C M V ) 感染是我国要幼儿 中最常见的感染性疾病病因之一。 C M V感染后无论是免疫 正常或免疫缺陷的机体均可发生体液和细胞免疫应答， 而细 胞因子是免疫细胞发挥功能的重要调节者。作者应用化学 发光免疫分析技术( C LIA ) ， 对 31 例儿童巨细胞病毒感染患 者血清细胞因子白细胞介素 1 日 ( 1 卜1 阳、 白细胞介素一 2 受体 (I卜Z R ) 、 白细胞介素一 1 0 ( n 厂 10) 的进行了检测， 以探讨细胞 因子水平在巨细胞病毒感染患儿的临床应用价值。 1 对象和方法 1 . 1 对象C MV感染组: 31 例标本来 自2 0 0 5年 6月 2 0 0 7 年6 月期间在本院儿科就诊的C MV-l g M阳性住院患 儿( 年龄3 一27 个月) ， 其中并发支气管肺炎 12 例( 男 7 例、 女 5 例) 、 并发上呼吸道感染 10 例( 男 4 例、 女 6 例) 、 并发要 幼儿肝炎综合症 9 例( 男 6 例、 女 3 例) 。对照组: 来 自本院 儿保科健康体检儿童3 0 例( 男 1 5 例、 女 1 5 例) ， 年龄 6 3 0 个月。所有标本甲、 乙、 丙、 丁、 戊、 庚肝抗体 I g M检测阴性: 所有标本呼吸道合胞病毒、 柯萨奇病毒、 单纯疙疹病毒、 风疹 病毒等 I g M抗体检测阴性。同时 31 例患儿肺炎支原体检 测均阴性。 1 . 2方 法 1 . 2 . 1 标本采集 所有标本均于清晨空腹抽取非抗凝静脉 血3 m L ， 37水箱放置30 m in后离心分离血清 l mL ， 一 70 保存待测。受试者均未使用过干扰素、 丙种球蛋白、 血浆或 全血史。 1 . 2 . 2 测定方法 C M琴I g M抗体使用美国雅培公司A X - S Y M全自动酶免疫荧光分析仪进行测定。C Mv-I g M抗体 阳性者与次日 抽取空腹静脉血复检仍阳性者， 确定为C MV 感染患者。1 卜1 日 、 I L-Z R、 1 卜10 测定均采用 C LIA方法， 测 量仪器为美国D p C公司生产的 I MMU LIT 曰0 o 0 全自动任 选式酶放大化学发光免疫分析系统。( 下转第 1 91 页) 万方数据