异基因造血干细胞移植后合并慢性移植物抗宿主病患者T细胞免疫状态的研究.pdf

· 临床研究 · 异基因造血干细胞移植后合并 慢性移植物抗宿主病患者!细胞免疫状态的研究 符粤文“， 吴德沛“ !， 冯宇锋“， 常伟荣“， 朱子玲“， 朱平# （“ $苏州大学附属第一医院 血液科， 江苏苏州# “ % ; * # ; ;! F M 8 ; G F B G JI J K D ? J# “ % 8 8; 8 * ? G F A 8 J P 8 = F :9 : 8 F * D 8 = : G 9 A : （5 A A ? 0 - I 2 !） $ C # + “ * D % ! D 8 9 8 ; F 9 D 0 8 ; : A R A ? ? H ; ? =“ )9 : 8 H，# )G J R : = F A CB 8 8 G ? ! 2 / 3 ,Q : G J G 8 H * A J H 8 H F M 8 ? ; = : A H ? ? ; G $ ! D 81 2 /9 ; ? H J * 0 : A C K 8 HR CB 8 8 G * : F B : A F H * D : ; : * H * : A * J 0 A : ! 2 /3 ,G J R : = F A C $ $ # % - ; + % = ? R 8H 8 B，? H 8 H F = ? ? * A ? : A ? ; ? A F B ? * A ? : A $ 5 = ? B# )3 ,G J R : = F A F 8 G， A C!“ %8 O 9 ; 8 G G 8 H : H“ ! %? ? * A ? : A 8 O 9 ; 8 G G 8 H $ ! D 8= ? ? * A ? : A ? ; ? A F B ? * A ? : A * A ? 8 G 8 O F G H F 8 ; 8 ? 8? * A ? 8 G: 9 9 8 : ; 8 H * 0 ( ; - % 1 * 0 S “ $ % C 8 : ; G : 8; 8 * ? G F G G H F 8 ; 8 ? * A ? : A ? ; ? A F B ? * A ? : A * A ? 8 G : G G ? * F 0 : G 9 A : ；* + , - .；! 2 / 3 ,；2 . / ( 基金项目： 卫生部科研基金资助项目 （Q T P # 以上。正常 对照为5名供者。 0 1 2 方法所有标本均采自外周血， 用( , = ? # “试 剂提取, !。应用六随机引物和逆转录酶经逆转 录合成/ + !第一条链。 : ,引物设计参见文献 0 。基本原则是根据 ( ,- *2 4个家族基因设计相应的2 4个- *特异 上游引物， 在- 区设计一共用的下游引物， 在- 引物内侧再设计一标记A B C荧光素的- $ A B C引 物， 用于) D E D F / B E。设计( ,$链区的一段基因 的引物同时扩增作为内参标。首次: ,扩增的产 物经琼脂糖凝胶电泳分析结果后， 对阳性表达的 - *家族， 再经过- 内侧的A B C荧光素标记的- $ A B C引物进行不对称: ,， 得到一组荧光素标记的 : ,产物。基因扫描分析(细胞克隆性质及计算 - *家族的利用率： 标记荧光的: ,产物与标准品 ) D E D F / B E $ 4 3 3, G H混合变性后， 于: G : 4凝胶中通 过基因分析仪 （. 0 3 3， ! - =） 进行基因扫描，) D E D $ 8 B I I D J K . 1 3应用软件分析产物的长度和荧光强 度。- *家族的利用率可用该家族曲线下的峰面积 占所有家族峰面积的总和的百分比来表示。 0 1 . 统计方法采用 $ 9 6 4 : ? 9 AB 2 0? ? A 6 B 2 A 2 B 6 7 B 9 C 6 B 9 65，5 E / 0 / B 6 *，! “ # $“ U 2 E B 0 9 7 B 2 1 / E 6 Q 2*，= U =， A 9!，J :， ! “ # $“ F 9 7 9 2 3 B 9 1 2 3 G B 9 9 7 6 B 9 3 5 G 7 2 A A 7 A 3 2 E 6 E E 7 9 6 B 2 1K 9 B 8Q 0 6 B C 2 0 E / E G 8 E B 1 9 E 2 6 E 2 9 3B 6 0 Q 2 B B 9 E E / 26 A A K E 0 E / E 2 / 2 3 B1 2 B 2 7 B 9 3 9 3 ? 2 0 9 ? 8 2 0 6 A A 1 *“; 0 9 B 9 E 8* / 0 3 6 A S 6 2 M 6 B A Q D， - V V )，# - $：& # # ( & # $ “ $+ 苏州大学学报 （医学版）- V V %； - % （)）