溶血磷脂酸受体在人卵巢癌细胞系3AO·SKOV3·OVCAR3中的表达及其意义.pdf

收稿日期:2005_04_27 作者简介:汪 萍(1972_),女,河北医科大学在读妇产科博士研究生, 电话:0315_2054664,E_mail:wangshjzh163.com 溶血磷脂酸受体在人卵巢癌细胞系 3? “ ABC3 “ CD?E3 中的表达及 其意义 汪 萍 1, 吴小华1, 陈文雪1, 单保恩2, 郭 清3 F河北医科大学第四医院 1 妇产科;2科研中心, 河北 石家庄 050011;3石家庄市第四医院妇产科,河北 石家庄050011G 摘要:目的 研究溶血磷脂酸(HI?)受体在人卵巢癌细胞系中基因和蛋白的表达及意义。 方法 采用半定量EJ_IDE 、免 疫细胞化学链霉菌抗生物素蛋白·过氧化物酶连接 (AI) 法和KLsMLNnOPloMMing检测HI?1、HI?2和HI?3 mEQ?以及 HI?2和HI?3蛋白在人卵巢癌细胞系3?·ABC3·CD?E3中的表达水平。 结果 (1)EJ_IDE结果显示,HI?1、HI?2 和HI?3 mEQ?在人卵巢癌细胞系中均有不同程度的表达;(2) 免疫细胞化学和KLsMLNn PloMMing结果显示,HI?2和 HI?3蛋白在人卵巢癌细胞系中均有表达。结论HI?1、HI?2和HI?3在人卵巢癌细胞系中广泛表达,HI?2和HI?3可能 参与了卵巢癌的发生发展过程。 关键词:卵巢肿瘤;溶血磷脂酸;受体 中图分类号:E_33 文献标识码:? 文章编号:1000_25RR(2005)11_1422_03 !“#$%7 (?A BCDEFA DEG?HI J7K 30表达LPA3 蛋白强弱依次为SKOV3最强;OVAAB3和3AO表 达无差异。 3 讨论 LPA(?D脂酰D2D甘油D3D磷酸:是目前结构最简 单的磷脂,作为血清的正常成分之一,主要以血清白 蛋白结合的形式存在,浓度约为2E29 “FGL。 它通过 与H蛋 白 偶 联 受 体 (H Ir65inD46JI1K r4I56r=L HPAB=)发挥多种生物学作用。 近年发现LPA及其受 体信号通路在癌的发生、进展和转移过程中发挥了重 要作用 8。卵巢上皮性癌患者的腹水和血浆中有极高 浓度的LPAC,其与卵巢癌的关系日趋受到重视。 本文通过对LPA?、LPA2和LPA3在上皮性卵巢 肿瘤细胞的研究中发现,我们研究的卵巢癌细胞中均 有LPA2和LPA3基因和蛋白表达。以往的研究提示M, N,LPA2 和LPA3在肿瘤细胞中高表达,暗示这些受体 在肿瘤病理生理学方面的潜在地位。本实验结果与以 往的研究结果基本相符, 提示LPA2和LPA3高表达 是肿瘤发生的共同特性。 由于卵巢癌组织除癌灶外, 含有大量炎细胞、血 细胞及间质细胞, 为更好地了解LPA受体在细胞水 平上的表达状况,我们对卵巢癌组织(另文报道)中受 体基因以及蛋白表达状况进行研究的同时检测了三 种人卵巢癌细胞系中LPA?、LPA2和LPA3基因以及 LPA2和LPA3蛋白的表达状况,结果表明三种细胞均 有不同程度的基因和蛋白的表达,从而在细胞水平上 进一步证实,LPA?、LPA2和LPA3在大多数卵巢癌细 胞中均有不同程度的表达,与以往的研究结果相符,表 明LPA2和LPA3在大多数癌细胞中高表达, 在不同 癌细胞中的表达情况有所差异, 而在正常上皮中LPA? 高表达,LPA2和LPA3 则低表达 O。 由于正常卵巢细 胞系难以获得,本实验未能进行其表达水平的检测。 针对LPA?、LPA2和LPA3相应抗体的缺乏限制 了三种受体在各种组织中蛋白表达状况的研究,国内 尚未见报道,国外大多集中在对肿瘤细胞系中受体基 因表达水平的研究。 我们利用LPA2和LPA3相应抗 体首次在蛋白水平证实LPA2和LPA3在卵巢癌细胞 系中均有不同程度的表达,LPA3是新近被发现的一 种LPA受体, 本研究中卵巢癌细胞系中均有LPA3 基因和蛋白表达。以上的研究结果推测LPA2和LPA3 可能参与卵巢癌的发生、发展过程。 SPiK0等?在结肠癌细胞的研究发现,LPA?在各 种结肠癌细胞的表达有所差异,但LPA2在大多数结 (下转?83? 页) 第一军医大学学报(Q Rir=5 Fi1 FK SniT: 第2C卷?828·· (上接1424 页) 肠癌细胞中均高表达。 提示LPA1与肿瘤细胞的转 移、黏附、增殖及血管生成因子分泌有关;LPA2与增 殖及血管生成因子分泌有关。 另外有报道LPA1在 LPA刺激的胰腺癌细胞的运动中起着关键的作用9, 因此其在肿瘤生物学上的作用也不容忽视。 综上所 述,LPA对卵巢癌的作用可能由特定 LPA受体调节, 而LPA对卵巢癌的作用结果可能是一些正性及负性 受体调节的结果。LPA1可能在卵巢癌细胞的生长和 转移中起负性调节作用。 Fujita等 10 采用RT_PCR证实卵巢癌组织中 LPA2和LPA3基因表达与VEGF基因表达有相关性, 提示三者可能被相似的转录机制调节。 研究表明, LPA通过不同的转录机制刺激许多与血管生成和肿 瘤细胞转移有关的基因如 : 血 管 内 皮 生 长 因 子 (VEGF)3、IL_86的表达,提示LPA可能通过相应基 因表达的调节促进肿瘤的发生和发展。 由于LPA受体具有特异性,使得针对LPA受体 治疗的研究具有良好的应用前景, 随着对卵巢癌中 LPA合成机制及LPA受体作用研究的进一步深入, 可望为卵巢癌新的治疗方法提供依据。 参考文献: 1Shida D, Kitayama J, Yamaguchi H, et al. Lysophosphatidic acid en_ hances the metastatic potential of human colon carcinoma DLD1 cells through LPA1J. Cancer Res, 2003, 63(7): 1706_11. 2Fish DA, Liu Y, Shawn M, et al. Lysophosphatidic acid promotes matrix metalloproteinase (MMP) activation and MMP_dependent invasion in ovarion cancer cellsJ. Cancer Res, 2001, 61(7): 3194_9. 3Hu YL, Tee MK,Goetzl EJ, et al. Lysophosphatidic acid induction of vascular endothelial growth factor expression in human ovarian_ cancer cellsJ. J Natl Cancer Inst, 2001, 93: 762_8. 4Gordon B, Wouter M, Moolenaar H. The emerging role of lysophos_ phatidic acid in cancerJ. Nature, 2003, 3: 582_91. 5Xu Y, Gaudette DC, Bpynton JD, et al. Characterization of an ovari_ on cancer activating in ascites from ovarion cancer patients J. Clin Cancer Res, 1995, 1: 1223_313. 6Fang X, Yu SX, Robert C, et al. Mechanisms for Lysophosphatidic acid_induced cytokion production in ovarian cancer cellsJ. 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Cancer Lett, 2003, 192: 161_9. 优于肝素组,其他血管并发症发生率均为0。 有研究 10 显示穿刺血管的外周血管并发症尤其是血肿和假 性动脉瘤与高龄、高血压病史、肥胖以及动脉的压迫 方式有关。 本研究70岁以上的老年患者占1/3,半数 有高血压,是一组较高危的人群。 我们认为无肝素冠 脉造影术的出血并发症低可能归因于术中未使用肝 素,而且由于术后可即刻拔管止血、止血后无需加压 包扎、术肢制动时间短,因此减少了下肢血栓的形成。 该方法的操作步骤与传统方法基本无差别,手术 时间的长短并不影响血栓栓塞并发症的发生,但需注 意以下细节:(1)定期(一般2 min内)冲洗造影导管, 保持管腔在血管内停留时充满生理盐水或造影剂而 非血液;(2) 术中钢丝每次撤出造影导管后需抽出2 ml血液弃去, 用造影剂或生理盐水充满管腔后再行 下一步操作,而钢丝应浸泡在肝素盐水中以备再次使 用;(3) 每次向导管内注射造影剂或生理盐水时须先 回抽,如回抽困难则禁止注射,调整导管位置或将导 管撤出体外以检查是否有血栓形成,一旦有血栓形成 必须反复冲洗干净后方能再次插管。实际操作中如果 做到前两点则很少有这种情况发生。 参考文献: !1“Lee KH, Han JK, Byuny, et al. Heparin_coated angiographic catheters: an in vivo comparison of three coating methods with different hep_ arin release profilesJ. Cardiovasc Intervent Radiol, 2004, 27(5): 507_11. 2许俊堂, 胡大一, 丛石隆. 心血管血栓的溶栓与抗栓疗法M. 北 京: 人民卫生出版社, 2000. 148_51. 3Anderson JH, Gianturco C, Wallace S, et al. Anticoagulation tech_ niques for angiography: an experimental studyJ. Radiology, 1974, 111: 573_6. 4Rutsch W, Banmann G. 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