磷酸化的SurvivinThr34蛋白在胃癌中的表达.pdf

海南医 学 2 以 犯年第19卷第4 期 文章编号: 1 的3 ee6 3 5 0 2 (X)8 ) 以-1 5 8 一 刃 2 实验研究 磷酸化的Surv ivin Thr3 4 蛋白在胃癌中的表达 王 壮 ， 郑长青2 ( 1 、 广东医学院附 属医院， 广东 湛江 5 2 4 001 ; 2 、 中国医 科大学附 属二院) 摘要目的 研究磷酸化的， vi n 侧 巨 34在胃癌中的表达及分布。 方法 用免疫组化方法检侧手术切除和 内窥镜活检的胃良恶性组织中磷酸化的， vi n 叭 比 34表达情况。 结果磷酸化的。 明i v in 们 肚 34蛋白在胃癌标本 中的阳 性表达率为76.7 9 %， 与患者的性别、 年龄、 组织分化程度、 病理分期无关， 与其在胃良 性病变标本中的阳 性 表达( 35.29% ) 相比 较， 六15 .3 2 ， 差异有显著性( P 0 .01) 。结论 叨 廿 34可能是影响。 uzvivin 功能的位点。 关镇词生存素; 胃癌; 苏氨酸34 中图分类号: R 一 3 3 文献标识码: A 几r 侧 甲 目 口肠 咖 5 1 1 ， 1 喇 匕 们 比 34 E x P r . .玩 G 到 蛇 创 让C 盯 d . 0 . . W ANGZhuan g l， z H E N GC 肠 功 g es Q i 心 (l.A 伍1 过曰 h os P i 回 ofGuangdo ng 此di 侧 公coll e 罗 524 叨1; 2 肠e nd aJ 断 1 认 t 曰 h 加 p i 以 ofC 肠 口 曰1 司 画， i ty) A 肠 。 ， Cto bJ 耽 肠 姐 we s t u d ythe p haP b 卿lat曰 。 行 。 们 巨 34 dis州 b ut 曰 in目 姐 tn oc 二，M e 比 “. W euse nlununohi s t OC he 而回 tec俪甲etod e t e 改the e 却n ， 姻 i on 试p h OS p h ory垃ed o u 到 i v i n 升r 34 in名 as 肠 cti 卜 su .s pe c l 毗ns6 刀 ms u 心cal 比 sectionandend P icbi o ps y . R es ul ts仆e别 龙 iti vee xP i on rate ofp ho叩 ho- 尽 h 盆 记 仙访 vi n 叭 比 34 w as76.7 9 %instOInac h二 m 姻氏衍tC hb ad no r e h 心 on 初 thse x，叫 笋 ， 山 玉此 n 6 a t 曰 坛 卜 tologi山 脚d ean dPathol哈以 s tages ， 即 d加 m 洲初 e 冲 ion 毗 af阮ni gn lesion(35.2 蝇) ， 六15.32尸 0:0l Cond心ons The肠x 34 砚 旧 ybe an id 已 目 】 ysi tetoi nnuence th e vingfu ncti 呱 K 叮 ， 价山 s u 月 i vi ng; g ” 州c州 i n o 口 叫叭即址 ne34 胃癌是我国人群中常见的恶性肿 瘤， 其发病的分子病理学基础还不清楚。 胃癌不仅是增殖和分化异常的疾病， 也 是凋亡异常的疾病。 胃 癌病变过程中， 细 胞凋亡减少、 增殖增加， 可能与细胞调控 失调有关111 。 目 前研究集中在一种新的凋 亡蛋白s u 州vi n(生存素) ， 它是凋亡抑制 蛋白家族中的一员， 在大多数人类的恶 性肿瘤中表达， 使细胞逃避凋亡和有丝 分裂过程异常。 S u rV i v in在胚胎发育和人 的恶性肿瘤转化的细胞系中表达， 而在 终末分化的成熟组织中基本不表达。蛋 白磷酸化参与细胞凋亡途径的调节， 影 响亚细胞定位、细胞保护、细胞周期进 程， 近来研究发现s u ZV i vin 的 第34位苏 氨酸( 叨 廿 34) 在C 刀 M期被细胞周期依赖 性激酶复合物( P34c d cZ一y clinBI)磷酸 化。 5 山 对 vi n 变异体闭阮 抖一 沮a ， 34位的 苏氨酸被丙氨酸取代) 的表达， 可引起人 黑色素体细胞系的凋亡， 并可增加对化 疗药物的敏感性门 。 本研究初步探讨磷酸 化的. 明 i vi n T hr 3 4 在胃癌组织中的分布 情况， 以期为胃 癌细胞的凋亡提供新的 干预靶点。 1 实验材料和方法 L l 材料:中国医科大学附属二院 2 (X)1 一 2 (X)3 年手术切除和内窥镜留取的 石蜡块标本:胃 腺癌病理标本56例， 患 者均未接受放疗和化疗治疗， 苏木素一 依 红染色切片有两位以上病理专家明确诊 断， 按分化程度及P 】 ，N M ( 1 998 年国际抗 癌联盟公布的分期标准)进行临床病理 分组。胃部良 性病变标本34例( 慢性萎 缩性胃 炎无肠上皮化生12例，胃 溃疡8 例， 炎性息肉3 例， 慢性浅 表性胃 炎11 例) 。 标本采用1 0 % 甲 醛固 定， 石蜡包埋， 常规连续4 帅 切片。 1 .2 试剂:磷酸化的s IJ 到 j vi n 们 肚 34 由羊抗人多克隆抗体， 购于S untaC ruz 公司。 过氧化物酶标记的链霉卵白 素染 色 试剂盒: 封闭正常免血清工作液6 d， 生物素标记兔抗山羊I gG6 d， 过氧化物 酶标记链霉卵白素工作液6 时， D A B 显 色液， 购于中山公司。 1 3 免疫组织化学染色: 将石蜡切 片脱蜡， 3 % H 刃 2 溶液孵育20分钟， 消除 内 源性过氧化物酶。 微波修复， 正常 兔血 清进行封闭， 将封闭血清甩掉， 滴加1 潮 作者简介: 王 壮(l 977 一 刃 8 ) ， 女， 辽宁省辽中 人， 医师， 硕士。 · 1 5 8 · 万方数据 海南医学 2 仪 龙年第19卷第4 期 的一抗， 在37 温箱中 孵育2 小时。 滴加 二抗， 在37 温箱中孵育20分钟。 滴加 S P 复合物， 在3 7 温箱中孵育巧分钟。 D 妞 显色2 一 5 分钟， 苏木素复染30秒， 脱水、 透明、 封片。在粼 刀倍放大的显微 镜下计数至少5 个随机视野， 取平均值， 阳性细胞数小于1 0 叹 为阴性， 余下为阳 性。阳性细胞数占1 0 一 29% 为+ ， 30一 5 9% +， 印%以上为+ + + ， 采用盲法计数气 1 .4 统计学采用分检验， 判断样本 的差异有无统计学意义。 2 结果 2. 1 磷酸化的 5 ， vinThr 抖 (P- vi n 们 肚 3 4) 在5 6 例胃癌标本中的阳 性表达率为76.7 9 气 ， ， 在34例胃良 性病 变标本中的阳性表达率为353 %， xZ= 巧 .3 2 ， p 0.0 1 ， 有统计学意义。 免疫组化 显示它主要分布在癌细胞的胞浆中。同 一胃癌组织中p 一 s tirViv in 们 肚 3 4 阳 性染色 的细胞分布均一， 显色强度也基本一致。 癌旁的邻近组织中也有p 一 。 vi n 几r34 的阳性表达。 2. 2 磷酸化的5 ， 朽 n 们 肚 34 的阳性 表达与胃癌临床病理间的关系 组别例致 5 咖 vi o 竹 叮 3 4阳性例( %) 尸值P 值 性 别 男 女 年盼 印 岁 )印 岁 分化程度 离分化 中分化 低分化 确理分期 l l ， 27 ( 79 泌) 1 6 ( ? Z J) 晓司刀巴 23 ( 8 11 ) 20 ( 7 1 鸿) 晓司. 仍 于在良性胃粘膜病变中的表达， 所以 5 坦 vi 朽 n 在Thr 34丧失磷酸化可作为一种 治疗手段， 使。 山 叭 朽 n 在肿瘤细胞中 表达 不稳定， 促进肿瘤细胞的凋亡叽 磷酸化。 明i vi n Thr 34 蛋白在胃癌及 胃良 性病变中均有表达， 表达特异性差， 只可以作为胃癌诊断的参考指标， 可考 虑作为靶点，促进胃癌细胞的凋亡。 S UrVivi n 是新发现的 一种凋亡抑制蛋白， 关于它的表达、 定位、 功能还存在争议， 为研究的热点。 5 山 哟 vi n 的过度表达与肿 瘤的复发、 耐受药物治疗、 缩短生存率相 关， 因此抑制。 u rv i vin 成为肿瘤治疗的新 靶点。 仆r 34是影响。 u 到 i vi n 功能的理想 位置。 二文傲 I Ur.人 回 比 . 加 i c. C uEY， 州 肠 . 认工.吐 0 喊 过. 脚 户 . 抽. 日加 石 即 加 .山 倪 卜 即 回 勿 ” 峪 N a . 1 1钱 1 卯日 口 ， 国 6 7 1 1 冲即闷. 2 切 1 1 11 .y加】 D . 匕 .玩弓 】 . d 叭 肠 . 沁 5 盯加 加峨 拓 . 5 1 乎 囚 址 .几 曰1侧 .月 . 产 . 阮 T 恤 心 份 氏灿， 沁. Q. R 侧物山 乞 幻 ， 乃 5 :3 5 3 1 一S M. 3 郑长*， 林连捷. 马二大肠枯成庙变过程中. 皿 杭 创 比 蛋白的衰达. 世界华人润化杂志不脱， 10陈 1 仍2 - 1 0 5 3 . 4 W d N 民 OC 璐， P 卜 . 抽J，d吐 加门 ， 分 . 们 邢 户 .户叼娜. 门 侧 巨 抖 勿 山仰扮 记 目 . 肠 峨 . 加 . 叮。 山 平甲 泳 C . .晰 R 一阮创 刃 3 ，6 3 :2 鱿 卜 235 . 5 0 C 面. 珑， C . .D ， 月 姗如J . d吐 R . 冲 卜 面 . 甲甲 匕 山 司 山 ， 认 阮 口厉 p ， 卜 d 以 p 肠户叮1. 垃 . . 铺 乃 创 代 园 再 口 日 与， 1 4 ( 7 3 ) ) 1 7 ( 89) 1 2 ( 66 . 7 ) 1 、0 . 叮 么 洲 刀 ，97 : 131 仍一 13l m. 万 b “ . ， . P. 切山 N 刀 ，公 耐阮iA. d 吐 犷 沁 玩 . d 曰 西口 西 d 翻 如 d . 山 晚 n 黝叮1 血 呵 阵 山 加， 日 ， 曰 恤 印1成 山 . 沁 加 .枷 山 址鹅应 . J ， 卜 5 幼 。 3422湘幼19均比 2 加 之1 1 5 ) 9 ( 7 5 .0 ) 1 2 ( 8 ， J ) 1 1 ( 7 3 ) 晓司. 份 患者生存率缩短有关。了解。 ” 到 i vi n 的 表达及功能对指导临床诊断和治疗将 会很有意义。 S l lr 时 vi n 主要在G Z 舰 期表 达， 调节凋亡和细胞分型。 S UrVi vi n 可能 是通过调节casp a s e 依赖的细胞死亡途 径来凋亡的。 已有研究证实磷酸化控制 细胞调节因子的稳定和/ 或表达， 蛋白 磷 酸化参与细胞死亡途径的调节和影响 亚细胞定位，细胞保护和细胞周期进 程， 与之相关的是bCI一 2 在们 睑 5 6 、 n lr 7 4 和 阮r 87 磷酸化，或P53 在 阮 r 巧 和 阮r1 7 上的磷酸化可阻止蛋白酶的降解 闷 。S IJ 月 i vi n 结构中们 肚 3 4 是一个理想的 蛋白结合位置， 控制s l irVi 血 的稳定性。 磷酸化的: u r “ 朽 n 们 肚 3 4 与眺p ase一 9 结 合， 形成磷酸化的。 朽 叱一 c as p ase-9 复合物， 抑制细胞凋亡均 。 用细胞周期激 酶抑制剂抑制s l irvi vi n 们 肚 34 位的磷酸化 导致s IU vi 训 的表达的丧失， 失去磷酸化 位点的。 血 ( 们 肚 孙一 月. ) 被快速的清 除， : 世 访 训 的磷酸化部位们 巨 抖序列的摘 除增加肿瘤细胞的凋亡闻 ， 增加药物治 疗的敏感性。 本实验将5 6 例胃癌标本按年龄、 性 别、 组织分化程度、 病理分期分组。经xZ 检验磷酸化的s urvi 村 n 们 肚 34 的表达与胃 癌的上述临床病理因素无关。免疫组化 显示磷酸化的。 u rv i vi n 侧 肚 34 主要分布在 癌细胞的胞浆中， 与: 。1 血 的分布一致 国 ，所以. 边 杭 讨 n可能在细胞浆中被 P34Cd cZ 一 c y c li n B I 磷酸化。 胃 癌病变中细 胞凋亡减少旧 ， 磷酸化的。 盯 行 朽 n 们 睑 3 4 蛋 白与。 t ir 讨 vi n 蛋白在胃癌中的表达趋势门 一致， 故认为。 1 口i vi n 可能是通过Thr 34 的磷酸化来完成它的抗凋亡作用。在癌 旁邻近的组织中磷酸化的。 川i vin仆r 34 众刀从 ，可. 目 口 . A 皿 N 臼 ， . . .目 d 闷 阵 ， 如油加 血 目 . . 以上 姑果说明 (磷 裁化s u rV i vi n Thr 34 蛋白在胃癌中的阳性表达与患者的性别、 年龄、 组织分化程度及病理分期无关。 3 讨论 S u rv i 朽 n 在肿瘤中的表达与预后不 良、 肿瘤演进、 复发、 药物治疗的耐受和 蛋白也有表达， 但数量少， 强度弱， 织周围的细胞虽然形态没有改变， 癌组 但在 分子水平可能已有改变。磷酸化s ur- vi vi n 叨 肚 34 蛋白在胃癌中的表达明显高 加访 . “山 目 加 C 诚 1 卯， 侧2 酥 1 6 5 一 1 67. 8 加 C D 。 川公 颐 沉， 介叫州.加 .E 砰 版 .汹 . 侧d .山 ， 叩 如 山 ， . ， 们 . 如d幼 山 份网 聊 吵 创 户 3 一肠 .恤户 苗 一C . 1 R 川阿内 1 998 万 5: 1 8 1拍- 1 8 1 1 收稿日 期: 2 加7 一 1 2 ee 朋) 月，月弓 衬.压.二厄二 ( 上接第1 63 页) 中内带， 且常伴有胸水 或叶间积液征， 但一般无支气管充气征。 新生儿肺出血: 病情危重， 肺部出血多 为大面积， 可出现大片密实影， 肺透亮度 降低， 病灶多呈节段性或大叶性， 且往往 不对称， 一般无支气管充气征， 部分患儿 可伴有心脏轻度至中度增大。 综上所述， N R D S 是新生儿呼吸系统 的重症疾病， 发病早， 变化快， 床边X线 平片对于协助临床早期诊断N R D S 具有 重要的价值。肺野透亮度降低， 肺内 广泛 的网状， 颗粒状高密度影并伴有多发支气 管过度充气扩张为诊断本病的可靠X线 征象。随着近年来人们对本病的影像诊 断、 鉴别诊断能力的提高， 有助于临床早 期诊治， 从而大大降 低了患 儿的 病死率。 ，今文公 1 贝月萍， 胡亚哭， 江成芳清福案实用儿科学圆. 第6 版一 北京: 人民卫生出版杜.l 卯6 .材弘 闷 M. 2 徐赛英 . 实 用儿科放射诊断学 1丫 1 北京: 北京出 版社， 1 ， 卯邓各乃7. 收藕日 期: 加m 1 卜29) l 59 万方数据