经皮瘤内注射艾迪注射液治疗兔移植性VX2肝肿瘤.pdf

·1 9 2 · 中国介入影像t j 治疗学垫! 旦年第7 卷第z 塑堡垒堕! ! ! ! ! ! ! ! 塑! g i 竖! 蜒! ，2 0 1 0 叠堕生N o2 T r e a t m e n to ft h ei m p l a n t e dV X 2l i v e rt u m o ri nr a b b i t sw i t h p e r c u t a n e o u si n t r a t u m o rA i D ii n je c t i o n C H E NH1 。H U A N GY o n g - h u o “。K A N GX i a o - b i n g 2 ( 1 D e p a r t m e n to f R a d i o l o g y ，t h e F t r s tA f f i l i a t e dH o s p i t a l ，C h o n g q i n g M e d i c a lU n i v e r s i t y C h o n g q i n g4 0 0 0 1 6 ， C h i n a ；2 D e p a r t m e n to fR a d i o l o g y 。t h eF i 秘fP e o p l e ' sH o s p i t a lo fJ i a n g b e i ，C h o n g q i n g4 0 0 0 2 0 ，C h i n a ) C A b s t r a c t O b j e c t i v e T oe x p l o r et h ep r i n c i p l e 。e f f e c ta n dm e t h o do fp e r c u t a n e o u sA i D ii n j e c t i o nf o rt r e a t m e n to fi m p l a n t e dV X 2l i v e rt u m o rw i t hu l t r a s o u n dg u i d a n c e M e t h o d s T w e n t y - e i g h tN e w Z e a l a n dw h i t er a b b i t sw i t hi m p l a n t e dV X 2l i v e rt u m o r sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o3g r o u p s ：A i D ii n j e c t i o ng r o u p ( 挖一1 2 ) ，p e r c u t a n e o u se t h a n o li n j e c t i o n ( P E I ) g r o u p ( ”一8 ) ，a n dp h y s i o l o g i c a ls a l i n eg r o u p ( 行一8 ) T w ow e e k sa f t e rt r a n s p l a n t a t i o n ，t h ed r u g sw e r ei n j e c t e di n t ot u m o r so fa l l t h er a b b i t so n c ee v e r y3d a y s A f t e r4t i m e si n j e e t i o n 。t h er a b b i t sw e r ek i l l e d T h et u m o r sw e r em e a s u r e dw i t h6 4 一s l i c e C T w h i l et h er a t eo ft u m o rn e c r o s i s 。t h ev o l u m eo ft u m o ra n dt h eg r o w t hr a t eo ft h et u m o rw e r ec a l c u l a t e d I ，i v e ra n dk i d n e yf u n c t i o nt e s t s ( A S T ，A I 。T ，A L Pa n dB U N ) a sw e l la sw h i t eb l o o de e l lc o u n t sw e r ea s s e s s e db e f o r ea n da f t e rt r e a t m e n t ，a n dC Te x a m i n a t i o nw a sp e r f o r m e da tt h es a m et i m e T h em o r p h o l o g i c a la n dt h eu h r a m i c r o s t r u c t u r a lc h a n g e sw e r e a l s oi n v e s t i g a t e du n d e rl i g h tm i c r o s c o p eo re l e c t r o nm i c r o s c o p e R e s u l t sT u m o r si na l lg r o u p sk e p tg r o w i n ga f t e rt h ep r o c e d u r e A m o n ga l l3g r o u p s 。t u m o rg r o w i n gr a t ef o rA i D ii n j e c t i o ng r o u pw a st h el o w e s ta n dt h en e c r o t i cr a t ew a st h eh i g h e s t ( P 0 0 5 ) A p o p t o t i ci n d e xi nA i D ii n j e c t i o ng r o u pw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a ti nP E Ig r o u pa n dp h y s i o l o g i c a ls a l i n eg r o u p ( P 0 0 5 ) C o n c l u s i o nA i D ii n j e c t i o nc a ni n d u c ea p o p t o s i so fl i v e rV X 2t u m o rc e l l s P e r c u t a n e o u sA i D ii n j e c t i o nt h e r a p yc a no b v i o u s l yi n h i b i ta n dd e s t r o yI i v e rV X 2t u m o rc e l l s - K e yw o r d s R a b b i t s ；L i v e r ；V X 2 ；M o d e l s ，a n i m a l ；A i D ii n j e c t i o n 经皮瘤内注射艾迪注射液 a 厶疗 ，口7J兔移植性V X 2 肝肿瘤 陈翼1 ，黄永火H ，康小兵2 ( 1 蕈庆医科大学附属第一医院放射科，重庆4 0 0 0 1 6 ； 2 重庆市江北区第一人民医院放射科。重庆4 0 0 0 2 0 ) 摘要目的探讨超声引导下复方中药艾迪注射液瘤内注射治疗兔移植性V X 2 肝肿瘤的作用效果及机制。方法 建立新西兰大白兔移植性J l 于V X 2 肿瘤模型2 8 只，随机分为3 组，即艾迪注射液组( 1 2 只) 、无水乙醇组( P E I 组，8 只) 、生 理盐水组( 8 只) 。全部动物在接种2 周后每隔3 天向肿瘤内注入治疗药物，注射4 次后处死动物。于术前术后兔耳缘静 脉抽血行血生化检查，同时行6 4 排螺旋C T 扫描测量并计算肿瘤体积、肿瘤增长率及肿瘤坏死率。以及进行组织细胞学与 细胞超微结构的观察。结果各实验组病灶均进行性增大，但艾迪注射液组肿瘤增长率及坏死率最小，与生理盐水组比 较差异均有统计学意义( P 0 0 5 ) 。结论艾迪注射液呵诱导肿瘤细胞凋亡，对肿瘤细胞具有细胞毒性作用。 作者简介 陈翼( 1 9 7 4 一) ，男，蕈庆人，硕士氏师。现 作于霞庆市江北区第一人民医院放射科。研究方向：介入治疗。 E m a i l ：C Y 9 4 1 5 8 1 6 3 c o r n 通讯作者 黄永火，重庆医科大学附属第一医院放射科，4 0 0 0 1 6 。E m a i l ：H Y H U O 1 2 6 ，c o r n 收稿日期 2 0 0 9 0 6 2 2 修回日期 2 0 0 9 0 8 0 3 万方数据 宇园介入影像与治疗学2 0 1 0 年第7 卷第2 期C h i nJI n t e r vI m a g i n gT h e r ，2 0 1 0 ，V o l7 ，N o2 关键词 兔；肝脏；V X 2 ；模型，动物；艾迪注射液 中图分类号R - 3 3 2 文献标识码A 文章编号 肝癌是常见的恶性肿瘤，因具有恶性度高、起病隐 匿等特点，临床发现时多已属中晚期，能手术切除者仅 占1 0 左右。随着影像学、介入医学的迅速发展，针 对相当多的不能手术或手术效果差以及不能接受肝移 植术的肝癌患者，各种肿瘤灭活疗法取得了很好的疗 效L I - 3 j 。中药具有不良反应小、能增强机体免疫力以及 促进肿瘤细胞凋亡等优点H j 。艾迪注射液足近年来国 内自主研发的一种复方中药制剂，现临床上主要通过 静脉给药，用于肝癌等恶性肿瘤的辅助治疗。本实验 主要通过艾迪注射液经皮直接瘤体内注射治疗兔移植 性V X 2 肝肿瘤，评价该给药途径的治疗效果、机制、对 机体的不良反应。 1 材料与方法 1 1 实验动物健康新西兰大白兔4 6 只，体重2 5 3 0k g ，雌雄不限。由重庆医科大学动物实验中心提供。 1 2 仪器 G EL i g h t S p e e dV C T ( 6 4 排螺旋C T ) ； A I 。O K A 一5 0 0 型高频超声仪；H i t a c h iH 6 0 0 电子显微 镜；B e c k m a nC X 7 ，C X 4 C E 全自动生化分析仪；O l y m p u sB H - Z 型光学显微镜。 1 3 兔移植性V X 2 肝肿瘤模型制备V X 2 鳞痛细胞 株由日本引进( 京都F u n a b a s h i 公司提供) 。V X 2 冰 冻细胞悬液按一般细胞培养技术进行复苏后离心 5m i n ，除去上清液，加入磷酸缓冲液( p h o s p h a t eb u f f e r e ds a l i n e P B S ) 并混匀，将悬液调成1 0 ×1 0 3 个活 细胞m l ，取0 5m l 接种于兔腹部皮下，2 周后町扪及 一实性包块，即制成衙肿瘤兔。肌注速眠新进行麻醉， 局部消毒，取腹部皮下肿块，挑选无出血坏死肿瘤组 织，用手术刀切成1m m 3 大小置于生理盐水中备用。 另取大白兔，用速眠新注射液以0 2m l k g 肌肉注射 麻醉，兔仰卧保定于木板上，上腹部褪毛，手术区消毒， 上腹部i F 中逐层切开，暴露肝脏，将肝脏轻拉出体外， 用眼科镊在肝左叶或右叶包膜处做一小的切口，纱布 压迫止血，将肿瘤组织块沿破口植入肝内，深度约 0 5c m 。移植完毕后回纳肝脏，逐层缝合，入笼饲养。 普通喂养1 0 天后行超声和C T 检查，2 周后肿瘤直径 大约0 8 1 5c m 。 1 4 实验分组V X 2 瘤兔模型2 8 只，随机分为3 组： 艾迪注射液组1 2 只，无水乙醇( p e r c u t a n e o u se t h a n o l i n j e c t i o n ，P E I ) 组8 只，生理盐水组8 只。各组分别在 B 超引导下于瘤内注射药物，每3 天注射一次， 0 5m l 次，共注射4 次，治疗前后分别行6 4 排螺旋 C T 扫描，评价肿瘤的增长率及坏死情况，并采集耳缘 静脉血查肝肾功能，在末次注射后3 天将瘤兔处死。 1 5 细胞凋亡的检测T U N E L 试剂盒及操作说明 书由德国R o c h e 公司提供。正常细胞核呈蓝色，而凋 亡阳性细胞旱棕黄色或棕褐色。在光学显微镜下选择 5 个高倍镜视野( X 4 0 0 ) 采用C M 一2 0 0 B 生物医学图像 分析系统随机计数5 0 0 个细胞，其中阳性细胞数所占 的比例作为凋亡指数( a p o p t o s i si n d e x ，A I ) 反映细胞 的凋亡程度。 1 6 肝肾功能检测分别于治疗前及末次治疗结束 后第3 天取兔耳缘静脉血行肝功( A S T 、A L T 、A L P ) 、 肾功( B U N ) 及白细胞计数检查。 1 7 观察指标 肿瘤体积V a b 2 z 肿瘤增长率一( a 2 ×b 2 一a 1 ×b 1 ) ( a 1 ×b 1 ) ×1 0 0 肿瘤坏死率= 肿瘤坏死面积肿瘤面积×1 0 0 A I = ( 阳性细胞数5 0 0 ) ×1 0 0 其中：a 为病灶最大径，b 为病灶最小径；a ，为治疗 前病灶长径，b ，为治疗前病灶短径；a ：为治疗后病灶 长径，b 。为治疗后病灶短径。 1 8 统计学处理采用S A S8 0 1 统计分析软件，计 量资料以i ±s 表示。采用t 检验分析组问差异，P O 0 5 ) 。 2 3 光镜观察艾迪注射液组肿瘤组织大片坏死，可 见细胞残骸及炎性细胞，特别是坏死组织周边见大量 淋巴细胞浸润；无水乙醇组肿瘤 内见大片凝固性坏死，并可见小 片状出血，坏死边缘见残存的肿 瘤细胞以及少量纤维组织及肉芽 组织。生理盐水组肿瘤细胞异型 性增加，血窦周边肿瘤组织生长 活跃。 2 4 电镜观察艾迪注射液组 肿瘤细胞表现为变性、坏死及凋 亡改变，以大片溶解坏死为主。 无水乙醇组肿瘤细胞大片凝同性 坏死，质膜核膜破裂，细胞器模 糊，毛细且日管紧密连接破坏。凝 固坏死灶周围见纤维组织、小胆 管及肉芽组织增生。生理盐水组 肿瘤细胞核大、异型、核仁增大、 线粒体幼稚、胞质内见大量脱氧 核糖体。 2 5T U N E L 染色显示 无水 乙醇组及生理盐水组凋亡指数较 低，光镜下仅见少许凋亡细胞( 图 2 3 ) ；艾迪注射液组光镜下见许 多散在分布、呈棕黄色的凋亡细 胞。艾迪注射液组凋亡指数 ( 3 8 0 7 ±4 3 8 ) 较无水乙醇组 ( 1 3 3 6 ±2 7 5 ) 和生理盐水组 ( 9 8 2 ±1 5 6 ) 明显增高( P 0 0 5 ) 。 3 讨论 艾迪注射液是国内自主研制 的一种治疗恶性肿瘤的中药合 剂，其主要成分包括斑蝥、人参、 黄芪和刺五加等。传统中医理论 认为艾迪注射液具有清热解毒、 消瘀散结的功效。现代医学研究证实，斑蝥具有较好 的抗肿瘤作用，人参中的人参皂苷、人参多糖等能增强 机体免疫力，对肿瘤细胞还有直接抑制作用，黄芪多糖 在体内可显著增强荷瘤小鼠脾细胞总数，可通过增强 机体的免疫活性而提高抗肿瘤功能。近年来的大量实 验研究证明，人参皂苷、斑蝥、刺五加都有诱导肝癌细 胞凋亡的作用。本实验对兔移植性V X 2 肝肿瘤采用 超声引导下经皮直接注射不同药物进行治疗，发现艾 迪注射液组肿瘤坏死明显、体积增长小，与无水乙醇组 万方数据 中网介入影像与治疗学2 0 1 0 l ：第7 卷第2 期 C h i nJI n t ! 竖! 里! 墅! g ：! ：生! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ：型! ! · 1 9 5 · 圈2T U N E I ，法检测艾迪注射液组V X 2 肝肿熘细胞的凋亡( A 、B 均为H E 染色。X 4 0 0 ) 图3T U N E L 法检测无水乙醇组V X 2 肝肿 瘤细胞的凋亡( A H E 。×4 0 0 ；1 3 H E ，×2 0 0 ) 肿瘤的增长率和坏死率比较无明显差异，治疗前后兔 血A S T 、A L T 、A L P 、B U N 及白细胞计数均无明显变 化，表明艾迪注射液瘤内注射对肿瘤细胞具有明显的 直接杀伤作用和抑制作用。组织及病理学检查显示艾 迪注射液治疗后瘤体破溃、液化、坏死，镜下见大量的 肿瘤细胞坏死，细胞核、细胞器溶解消失，并可见细胞 残骸、纤维组织增生以及脂肪变性的残存肿瘤细胞；电 镜观察提示用药后大部分肝癌细胞发生坏死、部分肝 癌细胞发生凋亡，坏死灶周边见较多的淋巴细胞浸润， 表明艾迪注射液可能有诱导或激发机体细胞免疫的作 用。 恶性肿瘤的发生不仅与肿瘤细胞的增殖有关，且 与其细胞的凋亡减少有密切关系【5 j ，因而恶性肿瘤常 存在凋亡不足。在肿瘤增殖细胞群中，进入凋亡的细 胞增多，则肿瘤牛长速度将会减慢L 6 罐j 。因此，有效的 抗肿瘤治疗应是诱导细胞凋亡，而不仅仅是单纯利用 药物的细胞毒性作用来杀死细胞或抑制肿瘤细胞增 殖9 。T U N E I 。法是检测细胞凋亡的标准方法¨“1 2 ， 可准确地反映凋亡发生的程度。本实验T U N E I ，检 测结果显示，艾迪注射液组的凋亡指数明显高于无水 乙醇组和生理盐水组，能有效地促进V X 2 肝肿瘤细胞 凋亡。无水乙醇组虽然肿瘤生长受抑制，却并不表现 为以凋亡为主的改变，这与林晓东等u 3 j 的实验研究结 果一致，而艾迪注射液抑制肿瘤生长的主要机制是诱 导细胞凋亡。 综上，艾迪注射液不仅具有较好的抗肿瘤作用，且 无明显不良反应。 参考文献 E 1 3 魏道芹，周茂义，赵兴圣，等C T 导引下直接瘤内注射乙酸治疗原 发性肝癌的临床应用研究医学影像学杂志，2 0 0 7 ，1 7 ( 6 ) ：5 7 7 5 8 1 2 A r i m u r aE ，K o t o hK ，N a k a m u t aM ，e ta 1 L o c a lr e c u r r e n c ei sa n i m p o r t a n tp r o g n o s t i cf a c t o ro fh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a W o r I dJ G a s t r o e n t e r o l 。2 0 0 5 ，1 1 ( 3 6 ) ：5 6 0 1 5 6 0 6 3 段训柏，陈德摹，何明肇等原发性肝细胞癌综合介入治疗的I 临 床疗效中国介入影像与治疗学，2 0 0 9 ，6 ( 3 ) ：2 4 0 2 4 4 4 陈坚中药诱导肝癌细胞凋亡的实验研究进展中西医结合学报， 2 0 0 4 。2 ( 4 ) ：3 0 I 一3 0 3 5 刘易欣赵春歌。赵秀兰，等细胞凋亡基因、肿瘤侵袭相关蛋F l 酶 及血管内皮生长因子在胃癌分型中的表达和意义世界华人消化 杂志，2 0 0 6 ，1 4 ( 1 6 ) ：1 5 7 1 1 5 7 7 6 M e n e n d e sJ A ，V e l l o ul ，C o l o m e rR ，e ta 1 E f f e c to fg a m m a l i n o l e n i ca c i do nt h et r a n s c r i p t i o n a la c t i v i t yo ft h eH e r - 2 n e u ( e r b B - 2 ) o n c o g e n e JN a t lC a n c e rI n s t ，2 0 0 5 9 7 ( 2 1 ) ：1 6 1 1 - 1 6 1 5 7 何芳，曾文铤，沈浩贤人参皂苷R 9 3 联合t 氧化二砷对人肝癌细 胞增殖性的影响疑难病杂志，2 0 0 7 ，1 2 ( 6 ) ：7 2 4 7 2 6 8 朱争艳，杜智，方淑吕，等硇砂提取液局部注射治疗小鼠肝癌的 实验研究中西医结合肝病杂志，2 0 0 7 ，1 7 ( 6 ) ：3 5 4 3 5 5 9 林礼务，何以牧，高I ：达，等复方中药经皮瘤内注射诱导肝细胞 癌凋亡中国医学影像技术，2 0 0 2 ，1 8 ( 1 ) ：6 - 8 1 0 范作晓，沈法富，谢庆恩，等植物细胞凋亡的检测方法生物技 术通讯，2 0 0 7 ，1 8 ( 1 ) ：1 6 3 ·1 6 5 1 1 H i c k e rG T h em o r p h o l o g yo fa p o p t o s i s C e l lT i s s u eR e s ，2 0 0 0 ， 3 0 1 ( 1 ) ：5 - 1 7 1 2 李秀真，曹蕊，曹卉，等T U N E L 法检测乳酸杆菌对小鼠宫颈鳞 癌的凋亡诱导作用中国微生态学杂志，2 0 0 6 1 8 ( 3 ) ：1 8 9 1 9 0 1 3 3 林晓东，林礼务，薛恩生，等复方中药9 9 一克星瘤内注射治疗裸 鼠肝癌的实验研究中华医学超声杂志，2 0 0 5 ，2 ( 3 ) ：1 3 1 - 1 3 5 万方数据