细胞因子基因多态性与乙型肝炎病毒宫内感染易感性的研究.pdf

2 3 6中华流行病学杂志2 0 0 5 年 4 月第 2 6 卷第4 期C h i n J E p i d e r n io l , A p r il 2 0 0 5 , V o l . 2 6 , N o . 4 · 重 视 HBV 宫 内 传 播 · 细胞因子基因多态性与乙型肝炎病毒 宫内感染易感性的研究 朱启镶顾绍庆俞惠王建设顾新焕董左权费林娥 摘要】 目的对前期研究发现宫内乙型肝炎病毒( H B V ) 感染免疫失败儿童表达异常的细胞因 子T N F - a , I F N - y , I L - 4 和I L - 1 0 ， 研究其相关基因位点单核昔酸多态性与H B V宫内感染易感性的关 系。方法在确定时限内选择乙型肝炎疫苗随访门诊中符合纳人标准的高危儿童， 系宫内感染 H B V 经免疫接种失败者为 工 组， 免疫接种有效者为n 组和非携带H B V母亲所生健康儿童作对照。应用实 时荧光定量 P C R技术检测 T N F - a 基因一2 3 8位点、 I F N - y 基因+8 7 4 位点、 I L - 4基因一5 9 0 位点和 I L - 1 0 基因一1 0 8 2 位点的单核昔酸多态性。结果T N F - a 基因一 2 3 8 位点A等位基因频率 工 组显著 高于II 组( 才= 6 . 7 9 7 , P 0 . 0 5 ; I F N - ， 基因+ 8 7 4 位 点A 基因 频 率工 组与n 组比 较 才= 7 . 2 3 8 , P 0 . 0 5 ; I L - 4 基因一 5 9 0 位 点C / T 等 位 基因 频 率I 组 与B 组比 较 才= 0 . 6 3 2 , P 0 . 0 5 ， 工 组与 对 照 组比 较 才= 0 . 5 8 4 , P 0 . 0 5 , n 组与 对 照 组比 较 丫= 0 . 0 0 4 , P 0 . 0 5 ; I L - 1 0 基因一 1 0 8 2 位 点G 等 位 基 因 频 率II 组与工 组比 较 才= 1 0 . 3 5 9 , P 0 . 0 5 ) 0 结 论 T N F - 。 基因一 2 3 8 位点A 等位基因 和I F N - y 基因+ 8 7 4 位点A等 位 基因与H B V宫内感染易感性有关。I L - 4 基因一 5 9 0 位点C / T单核昔酸多态性与H B V宫内感染易感 性无关， 还提示 I L - 1 0 基因一 1 0 8 2 位点G等位基因对于胎儿H B V宫内感染具有保护作用。 【 关键词】 乙型肝炎病毒; 宫内感染; 细胞因子; 基因多态性 R e l a t i o n s h i p b e t w e e n c y t o k i n e g e n e p o l y m o r p h i s m a n d s u s c e p t i b i l i t y t o h e p a t i t i s B v i r u s i n t r a u t e r i n e i n f e c t i o n Z HU Q 一 r o n g ， G U S h a o - g i n g ， Y U H u i ， W A N G J i a n - s h e ， G U X i n - h u a n ， D O N G Z u o - q u a n ， F E I L i n - e . D e p a r t m e n t o f I n f e c t i o u s D i s e a s e ， C h i l d r e n s H o s p i t a l ， F u d a n U n i v e r s i t y ; S h a n g h a i Me d i c a l C o l l e g e ， F u d a n U n i v e r s i t y ， S h a n g h a i 2 0 0 0 3 2 , C h i n a ( A b s t r a c t O b j e c t iv e T o e x p lo r e t h e p o s s ib le r e la t io n s h i p b e t w e e n c y t o k in e s ( T N F - a , I F N - y , I L - 4 a n d I L - 1 0 ) , w h i c h w e r e e x p r e s s e d a b n o r m a l q u a n t i t y i n t h e p e r i p h e r a l b l o o d t o i n t r a u t e r i n e H B V i n f e c t i o u s c h i l d r e n , g e n e s i n g l e n u c l e o t i d e p o l y m o r p h i s m( S N P ) a n d s u s c e p t i b i l i t y t o H B V i n t r a u t e r i n e i n f e c t i o n . Me t h o d s A c r o s s s e c t io n a l s t u d y o n m o l e c u l a r e p i d e m i o l o g y w a s c a r r i e d o u t . T h e s u b j e c t s w e r e s e l e c t e d f r o m o u t p a t i e n t s o f t h e h e p a t i t i s B v a c c i n e s p e c i a l c l i n i c s o f o u r h o s p i t a l . A c c o r d i n g t o i n t r a n t c r i t e r i a , c h il d r e n u n d e r h i g h r is k o f H B V in t r a u t e r i n e i n f e c t io n w e r e d i v id e d in t o im m u n o- f a i lu r e g r o u p ( g r o u p I ) a n d i m m u n o- e f f e c t i v e g r o u p( g r o u p U)w h i l e c h i l d r e n w i t h o u t h i g h r i s k w e r e i n c l u d e d i n t h e c o n t r o l g r o u p . F o u r g e n e S N P s i t e s o f T N F - a 一2 3 8 、 I F N - y+8 7 4 , I L - 4一5 9 0 a n d I L - 1 0一1 0 8 2 r e g i o n w e r e d e t e r m i n e d b y r e a l - t i m e q u a n t i t a t i v e f l u o r e s c e n t P C R . R e s u l t s S i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s o f T N F - a一 2 3 8 A a l le l e f r e q u e n c y w e r e f o u n d b e t w e e n g r o u p I a n d g r o u p II( 丫= 6 . 7 9 7 ， P 0 . 0 5 ) . S ig n if i c a n t d if f e r e n c e s o f I F N - Y+ 8 7 4 A a l l e l e f r e q u e n c y w e r e f o u n d b e t w e e n g r o u p I a n d g r o u p II ( 丫= 7 . 2 3 8 ， P 0 . 0 5 ) . S ig n i f i c a n t d if f e r e n c e s o f I L - 4一 5 9 0 C / T a l l e l e f r e q u e n c y w e r e n o t f o u n d b e t w e e n g r o u p I a n d g r o u p II ( 才= 0 . 6 3 2 , P 0 . 0 5 ) ， g r o u p I a n d c o n t r o l g r o u p ( 丫= 0 . 5 8 4 , P 0 . 0 5 ) , o r b e t w e e n g r o u p II a n d c o n t r o l g r o u p ( 才= 0 . 0 0 4 , P 0 . 0 5 ) r e s p e c t i v e l y . S ig n if ic a n t d i f f e r e n c e s 基金项目: 国家自 然科学基金资助项目( 3 0 2 7 1 3 6 5 ) 作者单位: 2 0 0 0 3 2上海， 复旦大学附属儿科医院传染科 中华流行病学杂志2 0 0 5 年4 月第2 6 卷第4 期C h i n J E p id e m io l , A p r il 2 0 0 5 , V o l . 2 6 , N o . 4 o f I L - 1 0 一 1 0 8 2 G a ll e l e f r e q u e n c y w e r e f o u n d b e t w e e n g r o u p I I a n d g r o u p I( 才= 1 0 . 3 5 9 , P 0 . 0 5 ) . C o n c l u s i o n T h is s t u d y s u g g e s t e d t h e p o s s ib i l i t y t h a t T N F - a 一 2 3 8 A a l l e l e a n d I F N - y+8 7 4 A a l l e l e w e r e a s s o c i a t e d w i t h H B V i n t r a u t e r i n e i n f e c t io n . T h e r e w a s n o e v i d e n t r e l a t i o n s h i p b e t w e e n I L - 4一 5 9 0 C / T a l l e l e S N P a n d s u s c e p t i b i l i t y t o H B V i n t r a u t e r i n e i n f e c t i o n , b u t t h e I L - 1 0 一1 0 8 2 G a l l e l e s e e m e d t o b e a s s o c i a t e d w i t h p r e n e n t i v e e f f i c a c y t o H B V i n t r a u t e r i n e i n f e c t i o n K e y w o r d s H e p a t it is B v ir u s ; I n t r a u t e r i n e i n f e c t io n ; C y t o k i n e ; G e n e p o l y m o r p h i s m 母婴宫内和围产期传播乙型肝炎病毒( H B V) 是高流行的主要原因之一， 有 5 0 %左右的H B V携 带者是母婴传播引起的。H B V宫内或幼龄期感染 患者可维持长期免疫耐受， 表现为高水平的病毒血 症( H B V - D N A高载量) 和 H B e A g的高滴度， A L T / A S T可持续正常或轻度异常; 肝组织学正常或轻度 改变; 对抗病毒治疗不敏感。因此阻断 H B V母婴 宫内和围产期传播是我国防治乙型肝炎( 乙肝) 战略 的重要组成部分。H B V宫内感染免疫耐受的研究 表明， 主要存在 T细胞水平、 体液免疫水平低下。 其原因与T h l和 T h 2细胞因子的分泌量多数呈低 下及缺乏有效调节有关 1 ,2 1 。近年人们逐渐认识到 许多非遗传性疾病也存在遗传背景， 这种认识有助 于解释不同个体和群体对某些疾病的易感性、 进程、 疗效和转归上的差异。遗传背景差异的主要表现为 染色体的变异和基因多态性， 而非遗传性疾病常与 基因多态性有关3 ,4 。我们针对乙肝筛选最有可能 相关的基因进行研究， 对母亲为 H B V携带者的高 危儿童选择其表达异常的细胞因子， 研究其基因单 核昔酸多态性与H B V宫内感染的相关关系。 对象与方法 I . 研究对象: 选自2 0 0 2 年2 月至2 0 0 3 年7 月 间横断面调查复旦大学附属儿科医院乙肝疫苗随访 门诊 H B V标志物包括 H B s A g , H B e A g和 H B V D N A单项或多项阳性的母亲， 其中部分产前3 个月 多次注射过乙肝免疫球蛋白( H B I G ) ， 所生婴儿( 属 H B V可能感染的高危婴儿) 出生后分别在 0 , 1 , 6 个 月接种乙肝疫苗或乙肝疫苗联合 H B I G进行免疫， 并定期随访肝功能及 H B V标志物。上述婴儿中凡 出生时外周血即 测到H B s A g 阳性， 并持续1 个月以 上为H B V宫内 感染组( 工 组) E z 诀其余为宫内未感 染组( II组) 。I 组 4 6 例( 男 2 6例， 女 2 0例) ; II组 出生及以后随访中未出现上述 H B V标志， 1 岁时 抗一 H B s 达到保护效果效价以上的正常免疫反应儿 童， 共有 1 2 4 例( 男 6 9例， 女 5 5 例) ; 对照组共 1 2 7 名( 男7 3 名， 女5 4 名) 系随机选取健康儿童接种疫 苗要求随访及因外伤及患呼吸道感染来该院就诊儿 童， 其母亲均非 H B V携带者。 2 . 实验方法: ( 1 ) 样本采集和基因组D N A抽提: 抽取静脉血 1 . 5 m l , 2 . 5 % E D T A抗凝。基因组 D N A抽提采用 基因组 D N A小量抽提试剂盒( 上海生工生物工程 公司) ， 对实验方法作适当的修改。所提 D N A样本 一 2 0 保存。 ( 2 ) 细胞因子基因多态性检测: 应用实时定量聚 合酶链反应( r e a l - t i m e q u a n t i t a t i v e f l u o r e s c e n t P C R ) , 结合M G B T a g M a n 荧光探针技术进行测定， 实验结 果通过随机附带的软件作出等位基因分布后分析判 断。实时定量P C R采用A B I P r i s M T m 7 9 0 0 高通量 荧光定量 P C R仪( 美国A p p l i e d B i o s y s t e m s 公司) 。 P C R 反应体系为1 0 Al ， 包括1 x T a g M a n b u f f e r A , 3 . 5 m m o l / L M g C l 2 ，d A T P , d C T P , d G T P 各 2 0 0 tt m o l/ L , d U T P 4 0 0 p m o l / L , p - a c t i n 正向引物和 反向引物各3 0 0 ti m o l / L , p - a c t i n 探针2 0 0 P m o l/ L , A m p l i T a q G o l d D N A 0 . 0 2 5 U / t .1 , U N G 酶 0 . 0 1 U / t .1 ， 正向、 反向引物各9 0 0 n m o l/ L , M G B T a g M a n 探针2 5 0 n m o l / L ， 模板D N A 2 0 n g o ( 3 ) P C R引物设计: 肿瘤坏死因子( T N F 工 a 基因一2 3 8 位点: 正向引物序列 5 ' - T C A G T C A G T G G C C C A G A A G A C - 3 ' ， 反向引物序列 5 ' - G A T A C C C C T C A C A C T C C C C A T - 3 ; T a g Ma n MG B 探针序列 F a m: C C C G T C C t C A T G C C , V i c : C C C G T C C c C A T G C C .干扰素( I F N) - 7基因+8 7 4 位点: 正向引物序列 5 ' - A C A T T C C A C A A T T G A T T T T A T T C T T A C A A C A - 3 ' ， 反向引物序列 5 ' - AC G AGC TTT AAA AGA TAG TTC C AA AC A- 3 ' ; T a g Ma n MG B探针序列 F a m : A A A T C A A A T C t C AC A C AC AC A C, Vi c : AA A T C A A AT C a C A C A C A C A C A C o 白细胞介素( I L ) - 4基因 一 5 9 0 位点: 正向引物序列 5 ' - A C G A C C T G T C C T T C T C A A A A C A C T A - 3 ' ， 反向引物序列 5 ' - A G A 中华流行病学杂志2 0 0 5 年4 月第2 6 卷第4 期 C h in J E p i d e m io l , A p r il 2 0 0 5 , V o l . 2 6 , N o . 4 G G C A G A A T A A C A G G C A G A C T C T - 3 ; T a g Ma n MG B探针序列F a m: A G A A C A T T G T t C C C C AG T G, Vi c : AG A AC A T T G T c C C C C A GT, TI L - 1 0基因一1 0 8 2 位点: 正向引物序列 5 ' - C T C C C C T T A C C T T C T A C A C A C A C - 3 ' ， 反向引物序 歹 吐5 - C C T T A C T T T C C A C T T A C C T A T C C C - 3 ' ; T a g M a n M G B探针序列 F a m : C C C G T C C t C A T G C C , V i c : C C C G T C C c C A T G C C 。以上引物 和探针由上海基康生物基因有限公司提供。 ( 4 ) P C R循环条件: 预变性 5 0 C 2 m i n , 9 5 r - 1 0 m i n 后， 9 5 C 3 0 s , 6 0 'C 3 0 s ， 进行 4 5 个循环， 每 次检测至少设置 3 个空白对照。此外 I L - 1 0 则预变 性 9 8 1C 5 m i n , 9 4 C 3 0 s , 6 0 1 C 3 0。 ， 7 2 C 3 0 s , 3 2 个循环， 终末延伸7 2 C 5 m i n , 3 . 统 计学处 理: 采用S P S S 1 1 . 0 软件进行丫检 验， I F N - y 采 用S A S 软 件 作丫检 验。 频率: 三组儿童的 I L - 4基因一5 9 0位点三种基因型 T T , C T和C C的数量及频率见表3 ， 各组组间等位 基因频率比较差异无统计学意义。 表2 三组对象 I F N - -t 基因十 8 7 4 位点基因型和 A / T等位基因数及频率 组别例数 基因型等位基因频率 八T TTA T ron石4 ，.宁山 02内 24 从一313360 孟U八j1 47苦2 闷 0. 7 7 2 0 . 6 0 3 0. 6 4 2 0 . 2 2 8 0. 3 9 7 0. 3 5 8 ，频 率比 较， I 组二 n 组扩= 7 . 2 3 8 , P = 0 . 0 0 7 1 ; 工 组: 对照 组 扩= 5 . 1 9 9 , P = 0 . 0 2 2 ; 9 组对 照 组扩= 0 . 6 0 2 , P = 0 . 4 3 8 表3 三组对象 I L - 4 基因一 5 9 0 位点基因型和 C / T等位基因数及频率 组别 I II 对照 例数 基 因型 等位基因频率 CT CCTC 3 1 4 1 6 0. 8 0 6 0. 7 6 0 0. 7 6 2 0. 1 9 4 0. 2 4 0 0. 2 3 8 00，行勺 伪勺 TT一256779 36102120 结果 1 . T N F - a 基因一 2 3 8 位点基因型和等位基因频 率: 三组儿童的T N F - a 基因一2 3 8 位点三种基因型 G G, G A和 A A的数量及频率见表 1 。妊娠末 3个 月使用过 H B I G孕妇所生婴儿 4 4例， 其 T N F - a 基 因一 2 3 8位点 侧A等位基因频率 G为0 . 9 2 0 , A为 0 . 0 8 0 ; 未用 H B I G孕妇所生婴儿 8 6例， 频率 G为 0 . 8 9 0 , A为0 . 1 1 0 ， 此两组比较差异无统计学意义 ( 义 2X= 0 . 6 1 8 ， P = 0 . 4 3 2 ) 。 表1 三组对象 T N F - a 基因一 2 3 8 位点基因型和 G / A等位基因数及频率 频率比 较， 工 组: n 组扩= 0 . 6 3 2 , P = 0 . 4 2 6 ; 工 组: 对照组 扩= 0 . 5 8 4 , P 二 0 . 4 4 5 ; II 组: 对 照 组扩二 0 . 0 0 4 , P = 0 . 9 4 7 4 . I L - 1 0 基因一1 0 8 2位点基因型和G / A等位 基因频率: 三组儿童的 I L - 1 0基因一1 0 8 2 位点基因 型G G , G A和A A的数量及频率分布见表 4 。妊娠 末3 个月使用和未使用 H B I G母亲所生婴儿 I L - 1 0 基因一 1 0 8 2 位点 G / A等位基因频率分布: I 组 1 1 例和A组 4 7例产前使用过 H B I G ， 共 5 8 例， G为 0 . 7 9 3 , A为0 . 2 0 7 ; 1 组3 2 例和II 组7 7 例共 1 0 9 例 产前未使用 H B I G , G为0 . 8 3 9 , A为0 . 1 6 1 ， 两组比 较差 异 无统 计学意义( 才= 1 . 1 1 8 , P = 0 . 2 9 0 ) 0 组别例数 基 因型等位基因频率 表4 三组对象 I L - 1 0 基因一1 0 8 2 位点基因型和 G / A等位基因数及频率 基因型等位基因频率 ，.了0气 GA一232281 GG一19%37 傀J4内 4勺2 .上 I+II 1 3 0 1 4 5 II 8 5 对照1 2 6 0. 9 0 0 0. 8 3 3 0. 9 3 5 0. 9 4 0 0. 1 0 0 0. 1 6 7 0. 0 6 5 0. 0 6 0 组别例数 GA 0 . 7 0 9 0. 8 6 3 0 . 6 3 0 0 . 2 9 1 0. 1 3 7 0. 2 7 0 GA-2213 6，.1114 0，j7.且 1.1卫 频 率比 较， 1 组: II 组扩二 6 . 7 9 7 , P 二 0 . 0 0 9 ; 工 组: 对照组 扩= 9 . 5 1 3 , P = 0 . 0 0 2 ; II 组: 对 照 组扩= 0 . 0 4 7 , P = 。 · 8 2 8 2 . I F N - y 基因十 8 7 4 位点基因型和等位基因频 率: 三组儿童的 I F N - y基因十8 7 4位点三种基因型 A A , A T和T T的数量及频率见表 2 0 1组母亲产 前注射过H B I G有 1 0 例， 十 8 7 4 位点川T等位基因 频率A为0 . 8 0 0 , T为0 . 2 0 0 ; 1 组未注射过H B I G取 3 0 例A / T频率A为0 . 7 6 7 , T为0 . 2 3 3 ， 两组比较差 异 无 统 计 学 意 义( X ， 一 0 . 0 6 5 , P 一 0 . 7 9 8 3 ) 0 3 . I L - 4 基因一5 9 0 位点基因型和GT等位基因 频率比 较， II 组 I 组X 2 = 1 0 . 3 5 9 , P = 0 . 0 0 1 ; I I 组: 对照组 扩= 3 5 . 4 1 8 , P 0 . 0 5 ) 。我们认为I L - 4 基因启动子区一5 9 0 位点单 核昔酸 C / T单核昔酸多态性与 H B V宫内感染易感 性无关。I L - 1 0 主要由T h 2 细胞产生， 作用复杂， 一 方面能有效刺激 B细胞的增殖和分化， 使之表达和 产生I g M, I g G和I g A ; 另一方面在细胞因子网 络平 衡中起重要作用， 抑制T细胞和单核一 巨噬细胞产生 T N F - a , I L - 1 , I L - 6 , I L - 1 2和 I F N - 7 等细胞因子， 并 可削弱细胞毒T细胞的识别能力等 “ 。I L - 1 0 基因 启动子区一1 0 8 2 位点 G / A单核昔酸多态性频率， G 在H B V宫内感染免疫成功的儿童中显著高于免疫 失 败的 儿童( 才二 1 0 . 3 5 9 , P 0 . 0 5 ) ， 说明了高表达的一 1 0 8 2 G 对宫内感染免疫清除病毒有关。能高表达 I L - 1 0 对 H B V宫内感染儿童具有明显的保护作用。 H B V感染儿童母亲产前是否注射 H B I G在 T N F - a一 2 3 8 , I F N - y + 8 7 4 , I L - 4一5 9 0和 I L - 1 0 一1 0 8 2 基因型频率分布方面均无明显差异， 说明并 不影响其遗传因素。提示T N F - a 基因一 2 3 8 位点A, I F N - y 基因十 8 7 4 位点A等位基因可能在决定个体 宫内H B V感染遗传易感性方面有重要意义， 可作 为检测其遗传易感性的标志。而I L - 4 一 5 9 0 C / T 等位 基因多态性和I L - 1 0 一 1 0 8 2 位点G等位基因并非是个 体宫内H B V感染遗传易感性的危险因素， 但I L - 1 0 一 1 0 8 2 位点 G等位基因对 H B V宫内感染有保护作 用， 这与前期研究I L - 1 0 只有在宫内感染免疫有效组 升高相符合， 并与D o m e n i c o 等的一项关于丙型肝炎 病毒的 研究相似 ， ， 口 。各细胞因子基因多态性与宫 内感染 H B V易感性之间的内在联系以及各细胞因子 不同基因型的相互作用尚待更深入的研究。 参考文献 1朱启榕， 于广军， 吕晴， 等. 宫内感染乙型肝炎病毒儿童接种乙型 肝炎疫苗免疫失败与其相关细胞因子关系研究、 中华儿科杂志， 1 9 9 9 , 3 7 : 4 0 4 - 4 0 7 . 2 王建设， 朱启铭. 宫内感染乙型肝炎病毒免疫失败儿童 工型和 工 型细胞因子研究， 中华儿科杂志， 2 0 0 2 , 4 0 : 4 8 1 - 4 8 4 . 3 Wa t e r e r G W, Q u a s n e y MW, C a n t o r R M, e t a l . S e p t i c s h o c k a n d r e s p i r a t o r y f a i l u r e i n c o m m u n i t y - a c q u i r e d p n e m o n i a h a v e d i f f e r e n t T N F p o l y m o r p h i s m a s s o c i a t i o n . A m J R e s p i r C r i t C a r e Me d , 2 0 0 1 ， 1 6 3 : 1 5 9 9 - 1 6 0 4. 4 Q u a s n e y MW, B r o n s t e i n D E , C a n t o r R M, e t a l . I n c r e a s e d f r e q u e n c y o f a l l e l e s a s s o c i a t e d w i t h e l e v a t e d t u m o r n e c r o s i s f a c t o r - a l p h a l e v e l s i n c h i l d r e n w i t h k a w a s a k i d i s e a s e . P e d i a t r R e s , 2 0 0 1 , 4 9 : 6 8 6 - 6 9 0 . 5 K w i a t k O w s k i D . G e n e t i c d i s s e c t i o n o f t h e m o l e c u l a r p a t h o g e n e s i s o f s e v e r e i n f e c t i o n . I n t e n s i v e C a r e Me d , 2 0 0 0 , 2 6 s u p p 1 : 2 8 9 - 2 9 7 . 6 A h n S H, H a n K H, P a r k J Y, e t a l . A s s o c i a t i o n b e t w e e n h e p a t i t i s B v i r u s i n f e c t i o n a n d H L A - D R t y p e i n K o r e a . H e p a t o l o g y , 2 0 0 0 , 3 1 : 1 3 7 1 - 1 3 7 3 . 7 V a n D e v e n t e r S J . C y t o k i n e a n d c y t o k i n e r e c e p t o r p o l y m o r p h i s m s i n i n f e c t i o u s d i s e a s e . I n t e n s i v e C a r e Me d , 2 0 0 1 , 2 7 : 9 8 - 1 0 2 . 8 Mu l l i k i n J C , H u n t S E , C o l e C G, e t a l . A n s i n g l e n u c l e o t i d e p o l y m o r p h i s m ( S N P ) m a p o f h u m a n c h r o m o s o m e 2 2 . N a t u r e , 2 0 0 0 , 4 0 7 : 5 1 6 - 5 2 0 . 9 Wu MS , H u a n g S P , C h a n g Y T, e t a l . T u m o r n e c r o s i s f a c t o r - a l p h a a n d i n t e r l e u k i n 1 0 p r o m o t e r p o l y m o r p h i s m s i n E p s t e i n - B a r r v i r u s - a s s o c i a t e d g a s t r i c c a r c i n o m a . J I n f e c t D i s , 2 0 0 2 , 1 8 5 : 1 0 6 - 1 0 9 . 1 0 K l e i n W, T r o m m A, G r i g a T, e t a l . I n t e r l e u k i n - 4 a n d i n t e r l e u k i n - 4 r e c e p t o r p o l y m o 印h i s i m s i n i n f l a m m a t o r y b o w e l d i s e a s e . G e n e I mmu n o l , 2 0 0 1 , 2 : 2 8 7 - 2 8 9 . 1 1 L e v i n g s MK, S a n g r e g o r i o R, G a l b i a t i F , e t a l . I F N - a a n d I L - 1 0 i n d u c e t h e d i f f e r e n t i a t i o n o f h u m a n t y p e I T r e g u l a t o r y c e l l s . J I mmu n o l , 2 0 0 1 , 1 6 6 : 5 5 3 0 - 5 5 3 9 . 1 2 D o m e n i c o L , C a l o g e r o C , R o s a D S , e t a l . I L - 1 0 a n d T N F - a p o l y m o r p h i s m s a n d r e c o v e r y f r o m H C V i n f e c t i o n . H u m a n I m m u n o l , 2 0 0 3 , 6 4 : 6 7 4 - 6 8 0 ( 收稿日 期: 2 0 0 4 - 1 2 - 0 5 ) ( 本文编辑: 张林东)