缺氧复氧对血管内皮细胞分泌TPA、PAI1的影响及辛伐他汀的干预作用.pdf

缺氧复氧对血管内皮细胞分泌t P A、 P A I - 1的影响 及辛伐他汀的干预作用 罗文平， 刘志华*， 李红霞， 程绪杰， 宋建平， 蒋庭波， 杨向军 （苏州大学附属第一医院 心内科， 江苏苏州2 1 5 0 0 6） 摘要： 目的探讨缺氧复氧对血管内皮细胞分泌t P A、 P A I - 1的影响及辛伐他汀的干预作用， 并探讨其可能的 机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株E C V 3 0 4， 使用自制的缺氧小室对E C V 3 0 4进行缺氧复氧处理。第一 组： 仅进行缺氧复氧处理。第二组： 不同浓度的辛伐他汀 （0 . 1、1 . 0、5 . 0、 1 0 . 0m o l L） 以及1 0 . 0m o lL辛伐他 汀+ 0 . 2m m o lL甲羟戊酸预处理E C V 3 0 4后再行缺氧2h、 复氧2h处理， 其对照组未加药物。用E L I S A法分别 检测培养液中t P A、 P A I - 1的含量。结果 复氧2h、 4h培养液中t P A浓度明显增加， 缺氧2h和复氧2h、4h P A I - 1 浓度明显增加； 5 . 0、1 0 . 0m o l L辛伐他汀预处理组P A I - l浓度较对照组明显降低； 同时用辛伐他汀和甲羟戌酸预 处理内皮细胞则以上作用消失。结论缺氧复氧刺激使E C V 3 0 4分泌t P A、 P A I - 1增加； 辛伐他汀可减少缺氧复氧 应激下血管内皮细胞分泌P A I - 1， 对t P A无影响， 减少P A I - 1 t P A比值， 该作用可被甲羟戊酸逆转。 关键词： 辛伐他汀；缺氧复氧；血管内皮细胞；t P A；P A I - 1 中图分类号： R 5 4 1 . 4 文献标识码： A 文章编号： 1 6 7 3 - 0 3 9 9 （2 0 0 6） 0 2 - 0 2 5 5 - 0 4 T h eE f f e c t s o f S i L v a s t a t i no nS e c r e t i o no f t P Aa n dP A I - 1 i nC u l t u r e dE n d o t h e l i a lC e l l sD u r i n gH y p o x i a - r e o x y g e n a t i o n L U OW e n - p i n g，L I UZ h i - h u a，L IH o n g - x i a，e t a l （D e p a r t m e n t o fC a r d i o l o g y， T h eF i r s tH o s p i t a lA f f i l i a t e d t oS u z h o uU n i v e r s i t y， J i a n g s uS u z h o u2 1 5 0 0 6，C h i n a） A b s t r a c t：O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t et h e i n f l u e n c eo fh y p o x i aa n dr e o x y g e n a t i o no ns e c r e t i o no f t i s s u e - t y p ep l a s m i n o g e na c t i v a t o r （t P A）a n dp l a s m i n o g e na c t i v a t o r i n h i b i t o r（P A I - 1） i nc u l t u r e dh u - m a ne n d o t h e l i a l c e l l s，a n d t o a s s e s s t h e e f f e c t s o f s i m i v a s t a t i no n t h e m. M e t h o d s E C V 3 0 4c e l l sw e r e c u l t u r e dw i t ho rw i t h o u t s i m v a s t a t i na tv a r i o u sc o n c e n t r a t i o n s（0 . 1、1 . 0、5 . 0、1 0 . 0m o l L）a n d 1 0 . 0m o l L i m v a s t a t i np l u s0 . 2m m o lLm e v a l o n a t e f o r2 4h o u r s，b e f o r e t h e yw e r es t i m u l a t e db y h y p o x i a a n d r e o x y g e n a t i o n f o r t w oh o u r s r e s p e c t i v e l y . t P Aa n dP A I - 1 i n t h e s u p e r n a t a n t sw e r e d e t e r - m i n e db ye n z y m e l i n k e d - i m m u n o s o r b e n t a s s a y （E L I S A） . R e s u l t s T h e s e c r e t i o n o f t P Aa n dP A I - 1 i n E C V 3 0 4w e r e i n c r e a s e db y s t i m u l a t i o no f h y p o x i a - r e o x y g e n a t i o n . P r e t r e a t m e n tw i t h s i m v a s t a t i nh a d a s i g n i f i c a n t d e c r e a s e s t a t i s t i c a l l y i nc o n c e n t r a t i o no fP A I - 1a n d t h e r a t i o o f t P AP A I - 1b u t t h e c o n c e n - t r a t i o no f t P Ah a dn o s t a t i s t i c a l s i g n i f i c a n t c h a n g e s i n t h e s u p e r n a t a n t o f c u l t i v a t e d c e l l s i na l l g r o u p s， t h e e f f e c t o f s i m v a s t a t i nw e r e a b l e t ob e r e v e r s e db ym e v a l o n a t e . C o n c l u s i o n s S i m v a s t a t i nd e c r e a s e s t h e i n f l u e n c e o f h y p o x i a - r e o x y g e n a t i o no n t h e s e c r e t i o no f t P Aa n dP A I - 1 i n c u l t u r e dh u m a n e n d o t h e - l i a l c e l l s，a n d t h i s e f f e c t i s r e v e r s e db ym e v a l o n a t e . K e yw o r d s：e n d o t h e l i a l c e l l；h y p o x i a - r e o x y g e n a t i o n；s i m v a s t a t i n；t P A；P A I - 1 临床研究 1 提示， 急性冠脉综合征患者血浆中 组织型纤溶酶原激活物 （T i s s u e - t y p eP l a s m i n o g e n A c t i v a t o r ， t P A） 、 纤溶酶原激活物抑制物- 1 （P l a s - m i n o g e nA c t i v a t o r I n h i b i t o r，P A I - 1） 活性升高， 这可 收稿日期： 2 0 0 5 - 0 8 - 0 9 作者简介： 罗文平 （1 9 6 6 -） ， 男， 陕西人， 副主任医师， 在读医学博士， 主要研究方向为心脏电生理。 *导师， 通信作者。 552 苏州大学学报 （医学版）2 0 0 6； 2 6 （2） 能是血管内皮细胞受损的结果， 也是血管内易形成 血栓的原因之一。如果冠脉未完全闭塞或闭塞后再 通， 患者的冠脉内皮细胞实际上经历了一个缺氧复 氧的过程。在细胞层面， 有文献 2报道缺氧可以引 起血管内皮细胞t P A、 P A I -1分泌增加， 但是单纯 缺氧与缺氧复氧对内皮细胞的作用是不同的。临床 随机双盲对照实验 3证实了他汀类药物降低心脑 血管事件的作用， 某些临床获益发生在出现降脂疗 效之前， 即他汀类的调脂外作用。本实验研究缺氧 复氧过程中培养的血管内皮细胞分泌t P A、 P A I - 1 的变化及辛伐他汀对其的影响， 并探讨其可能的作 用机制。 1 材料、 方法与结果 1 . 1 材料血管内皮细胞选用人脐静脉内皮细胞 株E C V 3 0 4（来自江苏省血液研究所） ， 培养基用含 1 0 %小牛血清的R P M I 1 6 4 0 （G I B C O B R L公司） 。取 生长良好的内皮细胞， 消化、 离心、 用1 0 %的1 6 4 0 培养液配成3 * 1 0 5 m l浓度的细胞悬液， 接种于2 4 孔培养板中培养， 待细胞长成单层后， 换成含2 %小 牛血清的R P M I 1 6 4 0培养液0 . 5m l培养2 4h， 使细 胞生长同步于G 0期用于实验。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 缺氧模型参照文献 4 、5 的方法， 使用 自制的有机玻璃缺氧小盒， 根据预实验的结果， 该缺 氧小盒可以达到缺氧的目的。缺氧复氧培养：培养 有细胞的2 4孔培养板置于自制的密闭缺氧小盒中， 缺氧小盒内通以流速为3Lm i n的缺氧气体 （9 5 % N2+ 5 %C O2） ，3m i n之后通气流速改为1 L m i n， 关 闭出气口， 继续通气， 补充漏气量， 缺氧培养2h后 再行常氧培养 （3 7 ， 5 %C O2+ 2 1 %O2+ 7 4 %N2） 。 1 . 2 . 2 实验分组 （1） 第一组： 缺氧复氧不同时间 培养液中t P A、 P A I - 1的变化， 其对照组未加任何干 预。 （2） 第二组： 分别用0 . 1、 1 . 0、5 . 0、1 0 . 0 m o l L的辛伐他汀以及1 0 . 0m o lL辛伐他汀+ 0 . 2m o l L甲羟戊酸预处理2 4h后再行缺氧2h 复氧2h处理， 其对照组未加药物， 空白对照组未加 任何干预。 1 . 2 . 3 培养液上清t P A、 P A I - 1的检测 收集培养 液上清， E L I S A法测定培养上清液中t P A、P A I - 1抗 原含量 （ g L） ， t P A、P A I - 1抗原检测试剂盒购自上 海太阳生物技术公司 （按说明书操作） 。P A I - 1 t P A 值为培养液中抗原量的比。 1 . 2 . 4 统计方法采用S P S S 1 1 . 0统计软件进行 分析， 所有数据用均数+标准差表示， 对照组与各干 预组比较用t检验， 多组间比较用方差分析， P0 . 0 5） 。 缺氧2hP A I - 1明显升高 （P 0 . 0 5） 。 1 . 3 . 2 不同浓度的辛伐他汀预处理之后再行缺氧 2h复氧2h处理后培养液中t P A、P A I - 1的含量的 变化见表2。除空白对照组外辛伐他汀预处理各 组间t - P A与对照组比较无明显差异 （P 0 . 0 5） ； 5 . 0m o l L和1 0 . 0m o lL组与对照组相比P A I - 1 的含量明显减少 （P0 . 0 5） ， P A I - 1 t - P A值与对照 组比较明显降低 （P 0 . 0 1） 。 2 讨论 急性冠脉综合征的病理基础是由于斑块的不稳 定， 易于破裂， 局部血栓形成， 因此局部的纤溶失衡 表1缺氧复氧不同时间培养液中t P A、 P A I - 1的含量 （g m l， x+s） 组别 nt P AP A I - 1P A I - 1t P A 空白对照组 48 . 6 3 + 1 . 2 45 0 . 5 6 + 4 . 5 66 . 2 3 + 0 . 8 7 缺氧2h 41 1 . 4 3 + 2 . 7 96 9 . 4 8 + 6 . 3 7 * 6 . 5 9 + 1 . 3 2 复氧2h 41 6 . 3 5 + 3 . 3 6 * 7 2 . 3 9 + 5 . 3 7 * 4 . 7 3 + 0 . 8 6 复氧4h 41 5 . 7 3 + 2 . 6 5 * 7 4 . 2 5 + 6 . 7 4 * 5 . 3 4 + 0 . 7 9 复氧8h 49 . 6 4 + 1 . 9 35 4 . 5 8 + 4 . 2 95 . 3 7 + 1 . 0 4 复氧1 6h 41 0 . 3 2 + 1 . 6 84 7 . 3 6 + 4 . 5 75 . 1 4 + 1 . 1 2 与对照组相比， *P 0 . 0 5，*P 0 . 0 1。 652S U Z H O UU N I V E R S I T YJ O U R N A LO FM E D I C A LS C I E N C E2 0 0 6；2 6 （2） 表2不同浓度的辛伐他汀作用2 4h后行缺氧2h复氧2h培养液中t P A、 P A I - 1的含量 （g m l， x+s） 组别 nt - P AP A I - 1P A I - 1t - P A（* 1 0 - 2） 空白对照组 48 . 6 3 + 1 . 2 45 0 . 5 6 + 4 . 5 66 . 2 3 + 0 . 8 7 对照组 41 4 . 3 5 + 3 . 7 17 0 . 3 9 + 4 . 2 75 . 8 2 + 1 . 0 3 0 . 1m o l L 41 5 . 4 7 + 3 . 5 37 1 . 6 4 + 6 . 0 35 . 4 1 + 0 . 9 5 1 . 0m o l L 41 6 . 5 4 + 2 . 3 96 8 . 3 5 + 5 . 7 64 . 8 4 + 0 . 6 7 5 . 0m o l L 41 5 . 6 4 + 2 . 8 35 4 . 3 8 + 4 . 8 9 * 3 . 6 3 + 0 . 7 1 * 1 0 . 0m o l L 41 5 . 1 3 + 2 . 2 65 3 . 2 7 + 3 . 6 4 * 3 . 4 7 + 0 . 8 6 * 1 0 . 0m o l L +甲羟戊酸 41 4 . 4 6 + 2 . 4 86 9 . 5 4 + 6 . 4 75 . 7 6 + 1 . 2 7 与对照组相比， *P 0 . 0 5，*P 0 . 0 1。 在急性冠脉综合征的发病中起了重要的促进作用。 t P A是纤维蛋白溶解系统的重要组成部分， 由血管 内皮细胞分泌， 能够转化纤溶酶原成为具有催化作 用的纤溶酶， P A I - 1也主要由血管内皮细胞分泌， 它 的主要功能是阻止t P A激活纤溶酶原， 局部的纤溶 系统平衡取决于局部t P A和P A I - 1的浓度， t P A和 P A I - 1能够在体内以1 : 1的比例形成稳定的复合 物， 从而维持纤溶系统平衡 6 。E C V 3 0 4细胞是人 脐静脉内皮细胞株， 由于脐静脉的功能是输送动脉 血， 它的特点类似动脉血管内皮细胞， 是研究动脉粥 样硬化的常用工具。辛伐他汀具有多效性， 包括保 护内皮、 抑制炎症、 稳定斑块、 抑制平滑肌细胞增殖、 抗凝等作用。在临床的随机双盲对照实验中提示辛 伐他汀能明显降低冠心病患者血液的高凝状态， 维 持纤溶平衡 7 。有研究 8认为他汀类药物能够使 内皮细胞分泌P A I - 1减少， 这种作用可被甲基戊酸 阻断。缺氧复氧过程对培养的内皮细胞而言类似于 在体状况下的缺血再罐注过程， 了解这种情况下内 皮细胞的功能变化有助于理解在体血管内皮细胞缺 血再罐注过程中的功能变化。文献 2 报道缺氧4h 可见P A I - 1 t P A比值下降， 随着缺氧时间的延长， 这一比值又逐渐增大。本实验结果表明， 缺氧2h 导致t P A、 P A I - 1分泌均增加，P A I - 1 t P A比值与对 照组比较无明显差异， 可能由于缺氧时间较短的缘 故。复氧2 4ht P A、 P A I - 1的分泌明显增加， 复氧 8 1 6h逐渐恢复， 表明缺氧复氧过程使内皮细胞 的抗凝血功能发生了变化， 这可能与临床常见的反 复心绞痛易至心梗的情况相关， 原因可能与缺氧诱 导基因转录 9， 1 0和复氧时自由基大量释放有关。 加入不同浓度的辛伐他汀预处理2 4h之后再行缺 氧复氧处理， 发现辛伐他汀预处理的内皮细胞能够 明显抑制P A I - 1升高， 且呈浓度依赖性， 但各浓度组 对t P A分泌均无影响， 因而明显降低了P A I - 1 t P A 比值。辛伐他汀预处理的内皮细胞能够明显抑制 P A I - 1升高这种作用在同时使用甲羟戊酸预处理时 消失。这表明辛伐他汀对内皮细胞分泌P A I - 1的作 用与甲羟戊酸合成受抑制有关， 其中的机制可能在 于他汀类药物在抑制HMG C o A还原酶的同时减少 了胆固醇合成的中间产物甲羟戊酸， 从而抑制了 R h o蛋白的异戊二烯化 1 1， 1 2。体外培养的脐静脉 内皮细胞与在体血管内皮细胞不完全相同， 且在体 血管内皮细胞要受到血流应力、 血液成分、 神经内分 泌等因素的影响， 他汀类药物是否能影响在体的、 受 到以上诸多因素影响的内皮细胞的P A I - 1的分泌需 要进一步的探讨。 参考文献： 1H o f f m e i s t e rHM， J u rM，W e n d e lH P，e ta l. A l t e r a t i o no f c o a g n a t i o na n d f i b r i n o l y t i c a n dk a l l i k r e i n - k i n i n s y s t e m s i n a c u t e a n dp o s t a c u t e p h a s e i np a t i e n t sw i t hu n s t a b l e a n g i - n ap e c t o r i s J. C i r c u l a t i o n， 1 9 9 5，9 1：2 5 2 0 - 2 5 2 7 . 2 范忠才， 曾智， 方元， 等.胰岛素和葡萄糖对缺氧血 管内皮细胞分泌的影响 J.中国病理生理杂志， 2 0 0 4， 2 0 （4） ， 6 0 9 - 6 1 2 . 3S c a n d i n a v i a nS i m v a s t a t i nS u r i v i a l S t u d yG r o u p . R a n d o - m i s e dt r i a lo fc h o l e s t e r o l l o w i n gi n4 4 4 4p a t i e n t sw i t h c o r o n a r y h e a r td i s e a s e：t h e S c a n d i n a v i a n S i m v a s t a t i n S u r i v i a l S t u d y （4 S）J. L a n c e t， 1 9 9 4，3 4 4：1 3 8 3 - 1 3 8 9 . 4 王关嵩， 钱桂生， 陈维中.低浓度一氧化碳和缺氧气体 处理培养细胞容器的研制及其应用 J .中国动脉硬化 杂志，2 0 0 1， 9 （1） ： 6 7 - 7 1 . 5Z h a n gYW，M o r i t a I，S h a oG，e t a l. S c r e e n i n g o f a n - t i - h y p o x i a - r e o x y g e n a t i o na g e n t sb ya ni nv i t r o m o d e l . P a r t 1：n a t u r a l i n h i b i t o r s f o r p r o t e i n t y r o s i n ek i n a s e a c t i - v a t e db yh y p o x i a - r e o x y g e n a t i o n i n c u l t u r e dh u m a nu m b i l - i c a l v e i ne n d o t h e l i a l c e l l s J. P l a n t a Me d，2 0 0 0， 6 6 （2） ： 1 1 4 . 6D o u g l a s EV a u g h a n . A n g i o t e n s i n， f i b r i n o l y s i s，a n d v a s c u - l a r h o m e o s t a s i s J. A mJC a r d i o l， 2 0 0 1，8 7 （s u p p l） ： 1 8 C - 2 4 C . 752 苏州大学学报 （医学版）2 0 0 6； 2 6 （2） 7J o u k h a d a rC， K l e i nN，P r i n zM，e ta l. S i m i l a r e f f e c t so f a t o r v a s t a t i n，s i m v a s t a t i na n dp r a v a s t a t i no nt h r o m b o - g e n i c a n di n f l a m m a t o r yp a r a m e t e r s i np a t i e n t sw i t hh y - p e r c h o l e s t e r o l e m i a J. T h r o m bH a e m o s t， 2 0 0 1，8 5：4 7 - 5 1 . 8 S o p h i eL o p e z，F r a n c kP e i r e t t i，B e r n a d e t t eB o n a r d o，e t a l. E f f e c to f a t o r v a s t a t i na n df l u v a s t a t i no nt h ee x p r e s - s i o no f p l a s m i n o g e na c t i v a t o r i n h i b i t o r t y p e - 1 i nc u l t u r e d h u m a n e n d o t h e l i a l c e l l s J.A t h e r o s c l e r o s i s， 2 0 0 0，1 5 2： 3 5 9 - 3 6 6 . 9 I n g r i dN i l s s o n，M a s a b u m iS h i b u y a，S t e f a n W e n n s t r o m， D i f f e r e n t i a l a c t i v i t i o n o f v a s c u l a r g e n e s b yh y p o x i a i np r i - m a r ye n d o t h e l i a l c e l l s J. E x p e r i m e n t a lC e l lR e s c a r c h， 2 0 0 4，2 9 9：4 7 6 - 4 8 5 . 1 0 S h u - C h i n gS h i h，K e v i nP . C l a f f e y，H y p o x i a - m e d i a t e d r e g u l a t i o no f g e n e e x p r e s s i o n i nm a m m a l i a n c e l l J. I n - t e r n a t i o n a l J o u r n a lo fE x p e r i m e n t a lP a t h o l o g y，1 9 9 8， 7 9：3 4 7 - 3 5 7 . 1 1 V a nA e l s tL，S o u z a - S c h o r e yC，L u oZ，e ta l. R h oG T - P a s e s a n d s i g n a l i n gn e t w o r s，G e n e sD e v，1 9 9 7，1 1：2 2 9 5 - 2 3 2 2 . 1 2 E s s i g M，N g u y e nG，P r i eD，e ta l.3 - H y d r o s y - 3 - m e h t h y l g l u t a r y lc o e n z y m eAr e d u c t a s ei n h i b i t o r si n - c r e a s e f i b r i n o l y t i c a c t i v i t y i n r a t a o r t i c e n d o t h e l i a l c e l l s . R o l e o f g e r a n y l g e r a n y l a t i o na n dR h op r o t e i n s J. C i r - c R e s，1 9 9 8，8 3 （7） ： = 6 8 3 - 6 9 0 . （上接第2 4 3页） 5 高云阁， 李艳， 赵应， 等.慢性粒细胞白血病急非 淋变与急淋变的临床对比分析 J.中国综合临床， 2 0 0 4，2 0：3 0 5 - 3 0 7 . 6 W a d h w aJ，S z y d l oR M，A p p e r l e yJF，e ta l. F a c t o r s a f f e c t i n g d u r a t i o no f s u r v i v a l a f t e ro n s e t o fb l a s t i c t r a n s - f o r m a t i o no f c h r o n i cm y e l o i d l e u k e m i a J. B l o o d，2 0 0 2， 9 9：2 3 0 4 - 2 3 0 9 . 7 K h a l i d iH，B r y n e sR，M e d e i r o sL，e ta l.T h ei m - m u n o p h e n o t y p e o f b l a s t t r a n s f o r m a t i o no f c h r o n i cm y e l - o g e n o u s l e u k e m i a：ah i g hf r e q u e n c yo fm i x e dl i n e a g e p h e n o t y p ei n“l y m p h o i d”b l a s t sa n dac o m p a r i s o no f m o r p h o l o g i c，i m m u n o p h e n o t y p i c，a n dm o l e c u l a rf i n d - i n g s J.M o dP a t h o l，1 9 9 8， 1 1：1 2 1 1 - 1 2 2 1 . 8F a v r eG，P a s s w e gJ，H o f f m a n nT，e ta l. I m m u n o p h e - n o t y p eo fb l a s tc r i s i si nc h r o n i cm y e l o i dl e u k e m i a J. S c h w e i zM e dW o c h e n s c h r，1 9 9 8，1 2 8：1 6 2 4 - 1 6 2 6 . 9 L o p e z - K a r p o v i t c h X，C a r d e n a s R，P i e d r a sJ .I m - m u n o p h e n o t y p i cc h a r a c t e r i s t i c so ft h eb l a s tc r i s i si n c h r o n i cm y e l o i d l e u k e m i a J. R e vI n v e s tC l i n，1 9 9 7， 4 9：3 1 - 3 6 . 1 0B a n a v a l i S，S i l v e s t r i F，H u l e t t eB，e t a l. E x p r e s s i o no f h e m a t o p o i e t i c p r o g e n i t o r c e l l a s s o c i a t e da n t i g e nC D 3 4 i n c h r o n i cm y e l o i d l e u k e m i a J. L e u kR e s，1 9 9 1， 1 5：6 0 3 - 6 0 8 . 1 1 N o r m a n nA P，E g e l a n dT，M a d s h u sIH，e ta l. C D 7 e x p r e s s i o nb yC D 3 4+c e l l s i nC M Lp a t i e n t s，o fp r o g - n o s t i c s i g n i f i c a n c e？ J. E u r JH a e m a t o l，2 0 0 3，7 1：2 6 6 - 2 7 5 . 1 2 K o s u g iN，E b i h a r aY，N a k a h a t aT，e ta l.C D 3 4 + C D 7 +l e u k e m i cp r o g e n i t o rc e l l sm a yb ei n v o l v e di n m a i n t e n a n c ea n dc l o n a le v o l u t i o no fc h r o n i cm y e l o i d l e u k e m i a J. C l i nC a n c e rR e s，2 0 0 5， 1 1：5 0 5 - 5 1 1 . 1 3 华东， 李建勇， 夏学鸣， 等. C D 7抗原阳性急性髓系 白血病免疫学分型及P糖蛋白检测 J.中华血液学 杂志，1 9 9 9， 2 0：8 8 - 9 0 . 1 4B a l lE，D a v i sR，G r i f f i nJ，e ta l. P r o g n o s t i cv a l u eo f l y m p h o c y t es u r f a c em a r k e r s i na c u t em y e l o i dl e u k e m i a J. B l o o d， 1 9 9 1，7 7：2 2 4 2 - 2 2 5 0 . 1 5 K h a l i d iH，M e d e i r o sL，C h a n gK，e ta l.T h ei m - m u n o p h e n o t y p e o f a d u l ta c u t em y e l o i dl e u k e m i a：h i g h f r e q u e n c y o f l y m p h o i da n t i g e ne x p r e s s i o na n dc o m p a r i - s o n o fi m m u n o p h e n o t y p e，F r e n c h - A m e r i c a n - B r i t i s h c l a s s i f i c a t i o n，a n dk a r y o t y p i ca b n o r m a l i t i e s J.A mJ C l i nP a t h o l，1 9 9 8，1 0 9：2 1 1 - 2 2 0 . 1 7P l e n s aE，R i b e r a JM，O r i o lA，e t a l. P r e v a l e n c ea n d p r o g n o s t i c s i g n i f i c a n c e o fm y e l o i dm a r k e r s i n a d u l t sw i t h h i g h - r i s ka c u t el y m p h o b l a s t i cl e u k e m i a J. M e dC l i n， 2 0 0 5，1 2 5：2 4 1 - 2 1 6 . 1 8 M o t o j iT. I m m u n o p h e n o t y p e so nb l a s tc e l l so f c h r o n i c m y e l o g e n o u s l e u k e m i a J.N i p p o nR i n s h o，2 0 0 1， 5 9： 2 3 4 2 - 2 3 4 7 852S U Z H O UU N I V E R S I T YJ O U R N A LO FM E D I C A LS C I E N C E2 0 0 6；2 6 （2）