2020届高三生物第二轮复习课件：第16讲 基因工程和细胞工程.pptx

第16讲 基因工程和细胞工程,知识联网,参考答案 DNA连接酶 基因表达载体的构建 将目的基因导 入受体细胞 药物 基因 自然界中没有 全能性 体细 胞杂交 细胞增殖 动物细胞核 化学法 抗原,记一记 1.基因工程操作程序中的“三、三、三、二、一” (1)常考必记的三种工具:限制性核酸内切酶、DNA连接酶、载体。 (2)目的基因“三种获取方法” 从基因文库中获取(基因组文库、cDNA文库); 利用PCR技术扩增:其实质是在体外对目的基因进行大量复制。用 PCR仪控制温度:变性(9095 )复性(5560 )延伸(7075 ); 通过DNA合成仪用化学方法人工合成(用于核苷酸序列已知,且核苷 酸数目较少的基因)、利用mRNA反转录法合成。 (3)将目的基因导入受体细胞的“三种类型” 导入植物细胞农杆菌转化法(花粉管通道法、基因枪法);,导入动物细胞显微注射法(导入受精卵); 导入微生物细胞转化法。 (4)目的基因检测与鉴定的“两个水平” (5)基因工程操作的“一个核心”基因表达载体的构建。,2.第二代基因工程蛋白质工程 (1)概念 (2)基本流程,预期蛋白质的功能设计预期的蛋白质的结构推测应有的氨基酸序 列找到相对应的脱氧核苷酸序列,(3)蛋白质工程中为什么通过对基因操作来实现对天然蛋白质的改造? 提示 蛋白质具有十分复杂的空间结构,基因的结构相对简单,容易改造; 改造后的基因可以遗传给下一代,被改造的蛋白质无法遗传。,3.必记的植物细胞工程关键点 (1)有关植物组织培养 植物组织培养的2个关键: 植物激素的使用:细胞分裂素比例较高,促进芽分化,抑制根形成;生长 素比例较高,促进根分化,抑制芽形成。 光照的使用:脱分化阶段不需要给予光照,再分化阶段需要给予光照, 以利于叶绿素的形成。,(2)植物体细胞杂交的关键 酶解法用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。 促融剂聚乙二醇。 杂种细胞的形成标志新细胞壁的形成。 培养杂种植株的技术植物组织培养。,4.动物细胞工程高频考点 (1)动物细胞培养的特殊条件 营养条件:加入动物血清、血浆等;通入氧气以满足代谢的需要;通入二氧化碳以维持培养液的pH。 胰蛋白酶的两次使用:首先用胰蛋白酶处理动物的器官或组织,以制备单细胞悬液;培养过程中发生接触抑制时,同样要用胰蛋白酶使细胞分散开。 避免杂菌污染的措施:培养液及培养用具灭菌处理,加入一定量的抗生素,定期更换培养液。,(2)动物体细胞核移植技术的关键点 受体细胞:去核的卵母细胞。 用去核的卵母细胞作为受体细胞的原因:营养丰富;体积大,易操作;含 有刺激细胞核恢复分裂能力的物质。 (3)制备单克隆抗体常考点 3种细胞特点不同 a.B淋巴细胞:能分泌抗体,不能大量增殖。 b.骨髓瘤细胞:能大量增殖,不能分泌抗体。 c.杂交瘤细胞:既能分泌抗体,又能大量增殖。 2次筛选目的不同 a.第1次:获得能分泌抗体的杂交细胞。 b.第2次:获得能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞。,辨一辨 ( )1.基因表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA反转录获 得。(2015重庆理综,6A) ( ) 2.基因表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原(起) 点。(2015重庆理综,6B) ( ) 3.借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来。 (2015重庆理综,6C) ( ) 4.启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用。(2015重 庆理综,6D) ( ) 5.PEG是促细胞融合剂,可直接诱导植物细胞融合。(2016江苏单科, 9A) ( ) 6.用原生质体制备人工种子,要防止细胞破裂。(2016江苏单科,9B),( ) 7.细胞核移植主要在同种动物、同种组织的细胞之间进行。(2015 江苏单科,3B) ( ) 8.乳腺细胞比乳腺癌细胞更容易进行离体培养。(2015江苏单科, 3A) ( ) 9.骨髓瘤细胞经免疫处理,可直接获得单克隆抗体。(2016江苏单科, 9C) ( ) 10.核移植克隆的动物,其线粒体DNA来自供卵母体。(2016江苏单 科,9D) 答案 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.,总纲目录,高频命题点1 基因工程 新题速递 1.(2017吉林长春二模,38)下图表示科学家培育耐寒生物的过程,请回答: cDNA文库 抗冻蛋 白基因 更多抗冻 蛋白基因 受体细胞 耐寒生物 (1)从cDNA文库中获取的目的基因 (有/无)启动子。实现过 程常用 技术,该技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸 序列,以便合成 。 (2)表示 ,其中标记基因的作用是 。,(3)转基因技术是否成功,需要对受体细胞进行分子水平的检测,首先是 用DNA分子杂交技术检测受体细胞染色体上的DNA上是否插入目的 基因,这种方法需要遵循 原则。 (4)若要培育抗冻能力强的转基因羊,可将鱼的抗冻蛋白基因导入羊的 中,培育该转基因羊的最后一道“工序”是胚胎工程的 技术。,答案 (1)无 PCR 引物 (2)基因表达载体 鉴别受体细胞中是否含有目的基因 (3)碱基互补配对 (4)受精卵 胚胎移植 解析 (1)用某种生物发育的某个时期的mRNA逆转录产生的多种互补 DNA片段,与载体连接后储存在一个受体菌群中,这个受体菌群就叫这 种生物的cDNA文库,启动子不能逆转录,由逆转录获得的cDNA中没有 启动子。获得更多的目的基因的方法是PCR技术,该技术的前提是要有 一段已知目的基因的核苷酸序列,以便合成引物。(2)表示基因表达 载体,其中标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因。(3) DNA分子杂交技术遵循碱基互补配对原则。(4)培养转基因动物时,受,体细胞一般为受精卵,培育该转基因羊的最后一道“工序”是胚胎移植。,2.(2017河北唐山期末,38)科学家通过利用PCR定点突变技术改造Ru- bisco酶基因,提高了光合作用过程中Rubisco酶对CO2的亲和力,从而显 著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题: (1)PCR过程所依据的原理是 ,利用PCR技术扩增 目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根据这一 序列合成 ;扩增过程需要加入 酶。 (2)启动子是一段有特殊结构的DNA片段,其作用是 。目的基因能在不同生物体内正常表达原 来的蛋白质,说明整个生物界 。PCR定点突变技 术属于 的范畴。,(3)可利用定点突变的DNA构建基因表达载体。常用 将基因表达载体导入植物细胞,还需用到植物细胞工程中的 技术,来最终获得转基因植物。,答案 (1)DNA双链复制 引物 耐高温的DNA聚合(或TaqDNA聚合) (2)RNA聚合酶识别和结合部位,可驱动基因转录出mRNA 共用一套 密码子 蛋白质工程 (3)农杆菌转化法 植物组织培养 解析 (1)PCR依据的原理是DNA双链复制,在用PCR技术扩增目的基 因前要依据一段已知目的基因的脱氧核苷酸序列合成引物;扩增过程需 要加入耐高温的DNA聚合(或TaqDNA聚合)酶。(2)启动子是RNA聚合 酶识别和结合部位,可驱动基因转录出mRNA;因生物界共用一套遗传 密码,所以目的基因可以在不同细胞内表达合成相同蛋白质。(3)常用 农杆菌转化法将基因表达载体导入植物细胞,借助于植物组织培养技 术,获得转基因植物。,整合突破 1.限制酶及其切点分析 (1)一个至多个限制酶切点:作为载体必须具有一个至多个限制酶切点, 以便与外源基因连接。 (2)每种酶一个切点:每种酶的切点最好只有一个。因为某种限制酶只 能识别单一切点,若载体上有一个以上的该酶切点,则切割重组后可能 丢失某些片段,若丢失的片段含复制原点区,则进入受体细胞后便不能 自主复制。一个载体若只有某种限制酶的一个切点,则酶切后既能把环 打开接纳外源DNA片段,又不会丢失自己的片段。,2.PCR技术 (1)原理:DNA复制,即: 双链 单链 DNA DNA (2)PCR反应过程,(3)结果:上述三步反应完成后,一个DNA分子就变成了两个DNA分 子,随着重复次数的增多,DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反应过 程都是在PCR扩增仪中完成的。 3.走出基因工程认识的6大易错点 (1)使用限制酶的注意点 一般用同种限制酶切割载体和目的基因。 不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。 (2)DNA连接酶DNA聚合酶:DNA连接酶连接两个DNA片段,而DNA 聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。,(3)限制酶DNA酶解旋酶:限制酶切割某种特定的脱氧核苷酸序列, 并使两条链在特定的位置断开;DNA酶可将DNA水解为其组成单位;解 旋酶将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。 (4)启动子起始密码子,终止子终止密码子 启动子:一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端。它是RNA聚 合酶识别、结合的部位。 终止子:一段有特殊结构的DNA短片段,位于基因的尾端。 作用是使 转录过程停止。,起始密码子和终止密码子位于mRNA上,分别控制翻译过程的启动和 终止。 (5)农杆菌转化法原理:农杆菌易感染植物细胞,并将其Ti质粒上的T- DNA转移并整合到受体细胞染色体DNA上。 (6)界定基因治疗与基因诊断 基因治疗:将正常基因导入有基因缺陷的细胞中,使该基因的表达产 物发挥功能,以达到治疗的目的其原理为“基因重组”及“基因表 达”。,基因诊断:制作特定DNA探针与病人样品DNA混合,分析杂交带情况 其原理为“DNA分子杂交”。,经典再练 1.(2017课标全国,38,15分)真核生物基因中通常有内含子,而原核生物 基因中没有,原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA 序列的机制。已知在人体中基因A(有内含子)可以表达出某种特定蛋 白(简称蛋白A)。回答下列问题: (1)某同学从人的基因组文库中获得了基因A,以大肠杆菌作为受体细胞 却未得到蛋白A,其原因是 。 (2)若用家蚕作为表达基因A的受体,在噬菌体和昆虫病毒两种载体中, 不选用 作为载体,其原因是 。,(3)若要高效地获得蛋白A,可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相 比,大肠杆菌具有 (答出两点即可)等优点。 (4)若要检测基因A是否翻译出蛋白A,可用的检测物质是 (填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗体”)。 (5)艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了 重要贡献,也可以说是基因工程的先导,如果说他们的工作为基因工程 理论的建立提供了启示,那么,这一启示是 。,答案 (1)基因A有内含子,在大肠杆菌中,其初始转录产物中与内含子 对应的RNA序列不能被切除,无法表达出蛋白A (2)噬菌体 噬菌体的宿主是细菌,而不是家蚕 (3)繁殖快、容易培养 (4)蛋白A的抗体 (5)DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体 解析 本题主要考查基因工程的相关知识。(1)从人的基因组文库中获 得的基因A中含有内含子,而大肠杆菌属于原核生物,故大肠杆菌不能切 除基因A初始转录产物中与内含子对应的RNA序列,故基因A在大肠杆 菌中无法表达出蛋白A。(2)由于病毒对宿主细胞的感染具有特异性,噬 菌体只能寄生在细菌细胞中,不能感染家蚕细胞,故应选用可感染家蚕,的昆虫病毒作为载体。(3)与真核生物相比,大肠杆菌等原核生物具有 繁殖快、容易培养、遗传物质相对较少等优点。(4)检测基因A是否翻 译出蛋白A,一般用抗原抗体杂交的方法,即用蛋白A的抗体与从细胞 中提取的蛋白质进行杂交,观察是否出现杂交带。(5)肺炎双球菌转化 实验的实质是S型菌的DNA进入R型菌体内,并可在R型菌体内完成表 达,这证明了DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体,为基因 工程奠定了基础。,2.(2017广东肇庆三模,38)“今又生”是我国为数不多的首创基因治疗 药物之一,其本质是利用腺病毒和人P53基因(抑癌基因)拼装得到的重 组病毒。人的P53蛋白可对癌变前的DNA损伤进行修复,使其恢复正常, 或诱导其进入休眠状态或细胞凋亡,阻止细胞癌变。“今又生”的载体 采用第一代人5型腺病毒,其致病力很弱,其基因不整合到宿主细胞的基 因组中,无遗传毒性;载体经基因工程改造后,只对细胞实施一次感染,不 能复制,不会污染。 请回答下列问题: (1)在“今又生”的生产中,为了获得更高的安全性能,在载体一般应具 备的条件中,科学家选择性地放弃了一般载体都应具有的 特点。检测P53基因的表达产物,可以采用 技术。,(2)如果要大量扩增P53基因,一般采用PCR技术,该技术中需使用一种特 殊的酶: 。与体内DNA复制相比较,PCR反 应要在 中才能进行,并且要严格控制 条 件。 (3)如果要获得胚胎干细胞进行研究,则胚胎干细胞可来源于囊胚的 ,或胎儿的原始性腺;在培养时,细胞充满培养皿底部后停 止分裂,这种现象称为 。如果想继续培养则需要重新用 处理,然后分瓶继续培养,这样的培养过程通常被称为传代培 养。,答案 (1)自我复制 抗原抗体杂交 (2)热稳定DNA聚合酶(Taq酶) 一定的缓冲溶液 温度 (3)内细胞团 接触抑制 胰蛋白酶 解析 (1)根据题干信息“载体经基因工程改造后,只对细胞实施一次 感染,不能复制”可知,在“今又生”的生产中,为了获得更高的安全性 能,科学家选择性地放弃了具有复制原点的载体。检测目的基因是否表 达产生蛋白质可采用抗原抗体杂交技术。(2)PCR技术是在较高温度 下进行的,因此该技术中需使用热稳定DNA聚合酶;与体内DNA复制相 比较,PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行,并且要严格控制温度 等条件。(3)胚胎干细胞来源于囊胚的内细胞团或胎儿的原始性腺;在 培养时,细胞充满培养皿底部后停止分裂,这种现象称为接触抑制。如,果想继续培养则需要重新用胰蛋白酶处理,然后分瓶继续培养,这样的 培养过程通常被称为传代培养。,高频命题点2 细胞工程 新题速递 1.(2017安徽芜湖质检,38)下图为A、B两种二倍体植物体细胞杂交过程 示意图,请据图回答:,(1)步骤的方法是 。步骤常用的化学试剂是 ,之后 (是/否)需要筛选。 (2)在利用杂种细胞培育成为杂种植物的过程中,运用的技术手段是 ,其中步骤是 。植物体细胞杂交 的目的是获得新的杂种植物,与A、B两种植物相比,该杂种植物是新物 种的原因是 。 (3)培育该杂种植物的过程中,遗传物质的传递是否遵循孟德尔遗传规 律?为什么? 。,答案 (1)酶解法 聚乙二醇 是 (2)植物组织培养技术 脱分化 该杂种植株与A、B两种植物间均存 在生殖隔离 (3)不遵循,该过程不属于有性生殖 解析 (1)图为植物体细胞杂交过程示意图,其中表示去壁获取原生 质体的过程,常用酶解法,即用纤维素酶和果胶酶处理;表示人工诱导 原生质体融合,常用的化学试剂是聚乙二醇(PEG),诱导后形成的两两融 合的原生质体有三种,所以需要进行筛选。(2)图中表示再生出新细 胞壁的过程,杂种细胞通过植物组织培养技术培育成为杂种植物,过程 表示脱分化,表示再分化过程。图中获得的杂种植物与A、B两种 植物间均存在生殖隔离,所以是新物种。(3)图示为植物体细胞杂交过,程,没有经过不同配子的结合,所以不属于有性生殖,因此该过程中遗传 物质的传递不遵循孟德尔遗传规律。,2.(2017天津十二校第二次联考,7)“生物导弹”可用于杀死人类某些癌 细胞。制备“生物导弹”是单克隆抗体的重要应用之一,其过程如图所 示: (1)在批量生产A蛋白抗原的过程中,要快速获得大量的A基因可 采用 技术。在该技术中,解旋的方法是 ;过程 所用的方法是 ;过程一般选择发育良好的 ,移植到受体牛的子宫中。,(2)在批量生产“生物导弹”的过程中,过程所用的“脾脏中的 细胞”为 。过程区别于植物体细胞杂 交技术所特有的诱导因素是 ,要得到所需的杂交瘤细 胞要经过 次筛选,最终筛选出的杂交瘤细胞的特点是 。,答案 (1)PCR 高温处理 显微注射法 桑椹胚或囊胚 (2)已免疫的B细胞(或浆细胞) 灭活的病毒 2 既能迅速大量繁殖,又 能产生专一(或特异)抗体 解析 据图分析可知,表示目的基因的获取,表示基因表达载体的 构建,表示将目的基因导入受体细胞,表示早期胚胎培养和胚胎移 植,表示用转基因牛大量生产A蛋白质,表示将抗原注入小鼠体内, 表示已免疫的B细胞与骨髓瘤细胞融合,表示筛选、检测并获得大 量所需要的杂交瘤细胞,最终获得单克隆抗体,表示把抗癌细胞的单 克隆抗体跟放射性同位素、化学药物或细胞毒素相结合,制成“生物导 弹”。(1)通常采用PCR技术快速获得大量的目的基因;DNA分子受热 变性后可解链为单链,所以在PCR技术中,用高温处理的方法进行解旋;,将目的基因导入动物的受精卵,常用的方法是显微注射法;胚胎移植过 程中,一般选择发育良好的桑椹胚或囊胚,移植到受体牛的子宫中。(2) 将抗原注射到小鼠体内,小鼠会产生体液免疫反应,在该小鼠的脾脏中 会出现一些能产生相应抗体的已免疫的B细胞(或浆细胞),设法将这些 细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合,再用特定的选择培养基进行筛选,和进 一步的克隆化培养和抗体检测,最终会得到既能迅速大量繁殖、又能产 生专一抗体的杂交瘤细胞,进而制备单克隆抗体。因此过程所用的 “脾脏中的细胞”为已免疫的B细胞(或浆细胞);动物细胞融合过程区 别于植物体细胞杂交技术所特有的诱导因素是灭活的病毒;要得到所需 的杂交瘤细胞要经过2次筛选。,整合突破 1.有关植物细胞工程的5个关键问题 (1)植物细胞A和植物细胞B杂交获得的杂种细胞的类型有三种:AA型、 BB型、AB型,符合要求的只有AB型,需要进行筛选。 (2)杂种细胞形成的标志:新的细胞壁的生成。 (3)杂种植株遗传物质的变化:杂种植株的变异类型属于染色体变异,杂 种植株的染色体数通常是两亲本细胞染色体数目之和,杂种植株属于异 源多倍体。 (4)植物组织培养时植物激素和光照的使用 植物激素的使用:脱分化阶段细胞分裂素与生长素的比例适中,以促 进细胞的分裂和脱分化;再分化阶段细胞分裂素与生长素比例较高,以 促进芽形成,比例较低,促进根的形成。,光照的使用:脱分化阶段不需要给予光照,再分化阶段需要给予光照, 以利于叶绿素的形成。 (5)利用植物组织培养生产细胞产物时,有时只需将外植体培养到愈伤 组织,从愈伤组织中获取产物。,2.辨析3种细胞杂种细胞、重组细胞和杂交细胞 (1)杂种细胞:植物体细胞杂交过程中,两种细胞去掉细胞壁之后形成的 原生质体融合,融合的原生质体出现细胞壁之后形成的细胞叫杂种细胞。 (2)重组细胞:体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞之后形成的细胞叫重组细胞。 (3)杂交细胞:动物细胞融合形成的细胞常称为杂交细胞。,3.动物细胞工程中的4点易错 (1)在动物细胞培养过程中,一般情况下10代以内的细胞核型不变,10代 以后有些细胞核型可能会发生改变,50代以后的细胞可能发生癌变。 (2)单克隆抗体制备过程中的两次筛选 第一次筛选:利用特定选择培养基筛选,获得杂交瘤细胞,即AB型细胞(A 为浆细胞,B为骨髓瘤细胞),该细胞既能分泌抗体又能大量增殖,筛选掉 A、B、AA、BB型细胞。 第二次筛选:利用多孔板法和抗原抗体杂交法筛选,获得产生特定抗 体的杂交瘤细胞。,(3)界定“克隆”动物与“试管”动物,(4)核移植获得的克隆动物与提供细胞核的亲本性状可能不同 克隆动物遗传物质来自两个亲本。 发育过程中可能发生基因突变或染色体变异。 外界环境条件可能引起不遗传的变异。,经典再练 1.(2017湖南长郡中学二模,38)动植物细胞工程在农业生产、医药卫生 等领域有着广泛的用途。回答下列问题。 (1)在将两种植物细胞进行杂交之前,需要用 酶进 行处理,若将处理后的细胞放入较高浓度的蔗糖溶液中,会发生 。诱导两种植物细胞融合可以采用物理或化学的方法进行,常 用的物理方法有 (写2种即可)。 (2)融合的细胞形成愈伤组织,在愈伤组织的培养过程中,当生长素和细 胞分裂素的比值 (填“高”或“低”)时,有利于丛芽的分化;通 过上述过程获得杂种植株依据的原理是 。,(3)在制备单克隆抗体的过程中,融合的结果是出现多种不同的杂交细 胞,需要在特定的培养基上进行筛选,从而得到 细胞。单克 隆抗体与传统方法获得的抗体相比,具有 的特点,因此广泛用于疾病的诊断等方面。,答案 (1)纤维素酶和果胶 渗透作用 离心、振动、电激 (2)低 细胞膜的流动性、植物细胞具有全能性 (3)杂交瘤 特异性强、灵敏度高、可大量制备 解析 (1)植物体细胞杂交过程有两个关键,一个是在将植物细胞进行 杂交之前,必须去除细胞壁,该过程需要用到纤维素酶和果胶酶;另外一 个是诱导原生质体的融合,方法包括物理法(离心、振动、电刺激)和化 学法(聚乙二醇)。将处理后的细胞放入较高浓度的蔗糖溶液中,会发生 渗透作用。(2)在愈伤组织的培养过程中,当生长素和细胞分裂素的比 值低时,有利于丛芽的分化;通过题述过程获得杂种植株依据的原理是 细胞膜具有一定流动性和植物细胞具有全能性。(3)用特定的选择培养 基筛选出杂交瘤细胞,该杂交细胞既能够大量增殖又能产生特异性抗,体。与传统方法获得的抗体相比,单克隆抗体具有特异性强、灵敏度 高、可大量制备的特点。,2.(2017湖北调研,38)利用细胞工程技术制备抗人绒毛膜促性腺激素 (HCG)单克隆抗体,其主要流程如下:,回答下列问题: (1)制备抗HCG单克隆抗体过程中,用到的动物细胞工程技术有 和 。,(2)细胞DNA合成有D和S两条途径,其中D途径能被氨基嘌呤阻断。在 HAT培养基中加入了氨基嘌呤,杂交瘤细胞能连续增殖,未融合细胞以 及同种融合细胞因不能增殖而死亡。由此可判断骨髓瘤细胞DNA合成 存在 (填“D”、“S”或“D和S”)途径。 (3)步骤需对选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养及抗体检测,该 过程一般在多孔细胞培养板上进行。先将细胞悬液稀释到710个细胞 /mL,再在每个培养孔中滴入0.1 mL 细胞稀释液,其目的是 。 (4)用抗HCG单克隆抗体作诊断试剂,能在妊娠初期即可作出诊断,主要 是因为该抗体具有 的优点。,答案 (1)动物细胞融合 动物细胞培养 (2)D (3)使每个孔内不多于一个细胞,达到单克隆培养的目的 (4)特异性强、灵敏度高 解析 (1)制备单克隆抗体过程中,用到的动物细胞工程技术有动物细 胞融合和动物细胞培养。(2)免疫后的B淋巴细胞不能分裂增殖,鼠骨髓 瘤细胞能不断分裂增殖。在HAT培养基中加入氨基嘌呤,阻断了细胞 DNA合成的D途径,但DNA合成的S途径没有被阻断,结果未融合的细胞 (包括骨髓瘤细胞和淋巴细胞)以及同种融合细胞(包括骨髓瘤细胞与骨 髓瘤细胞融合、淋巴细胞与淋巴细胞融合)因不能增殖而死亡,由此可 判断骨髓瘤细胞DNA合成存在D途径。(3)在多孔细胞培养板上对选择,培养的杂交瘤细胞进行培养时,先将细胞悬液稀释到710个细胞/mL,再 在每个培养孔中滴入0.1 mL 细胞稀释液的目的是使每个孔内不多于一 个细胞,从而实现单克隆培养。(4)单克隆抗体具有特异性强、灵敏度 高的优点。,