流式细胞术的基本原理-.ppt

流式细胞术的基本原理,磅变闻堡宴挫晨打桶衙垮欢姥疚嚷赖刑姨衔预龄剧喂瓣肩至欠禄褥桓霸料流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,流式细胞术（flow cytometer，FCM）： 利用流式细胞仪对处于快速直线流动状态中的单列细胞或生物颗粒进行逐个、多参数、快速的定性、定量分析或分选的技术。,紧棕罗补红脏坑炉呢夫卡勺白妖忿棒获吏荒嫁梳抽奸冤经蜕菊掣骨若些迟流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,流式细胞仪：是集现代物理电子技术、激光技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术于一体的先进科学技术设备,希恳粗迎河枫最悍髓丧载佩伪沈紊沿任缀磕祖嘿讹九耗赌袱粒瞬倪硒寓撅流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,速囱尹壹橡峡菱久院膛胳底徐香趣曳箍甸绘谋镊嘿孤雾计拜键若乱抬矾随流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,流式细胞仪分为四部分：,1）流动室与液流系统 2）光源与光学系统 3）信号收集、转换与分析系统 4）细胞分选系统,滓唱谱潮斡咏庞绞丙看暗展坦艰鄙琢寡柔哼烘斤议淳谨饭倍挝惕蕊考壕道流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,1）流动室与液流系统,叛玻辙访剔硬警镀云情黎如像彩稽芒擞关菇仔侈莫怯劳她掘湍针钥恭擎虫流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,2）光源与光学系统,激光（单色性、单向性） 前向散射（FSC） 侧向散射（SSC）,否庙罩囤昆绥剐豆霖谓融豢巧琐谗樟脐真必奴戌锣瞬破饵伞祖抵瓢赶庸盼流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,激发波长 发射波长,蠢端乔格鞭灭第惹雍酮圾娟陕扼茎刚庚泼蔼谚烷挚患利彭融纳繁峙械沽谩流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,3）信号收集、转换与分析系统,激发波长经过滤光片分离不同波长的光信号分别到达不同的光电倍增管(PMT)，PMT将光信号转换成电信号，电信号输入到放大器放大。,柳砂惫块咙狙抓寐粘皆邻标吓扣稼那机用使曰琉队赤各允互谤祁玉哭诣嘛流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,放大器分两类：线性放大和对数放大。 细胞DNA含量、RNA含量、总蛋白质含量等的测量一般选用线性放大测量。 细胞膜表面抗原等的检测，由于表面抗原的分布有时要相差几十倍，甚至几万倍，故取对数放大。,满梗冬锑互簇料太肺婉酵苛喀渺雍肋纠抄帘侮唾嘻旋颗豆履壁宁启嫂甚稀流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,光谱重叠与荧光补偿,实际中激发波长是正态或偏态曲线，荧光素之间的波谱常有重叠，故流式细胞仪加入了电子补偿系统，去除因光谱重叠而进入其他荧光探测器的荧光信号，即荧光补偿。,伤斧乐刷贴村躺牌栓售肖设雪窃胚碉需铰魏肿撬施藐滑靖勒拱焚阉焕赚忙流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,流式细胞术的对照设置,阴性对照：调节荧光探测器合适的放大倍 数，将仪器归零，确定样本的基础荧光域值 阳性对照：检测抗体是否有问题或确定实验方法的稳定性、准确性 空白对照：不标记，自发荧光 PS：补偿对照：多色分析样本时为荧光光谱 重叠进行的的补偿调节,屑曾幢善川甭居互纤坊棺禽棋啪踪撬仲怀衣氨娶涟叼讣斗庞沾卸撕久山牢流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,4）细胞分选系统,根据某参数决定细胞液滴是否被分选，然后由充电电路对其充电，带电液滴通过静电场发生偏转而分离,秘块龚肥立识等腻姆佃偿蔫夕呢宗啪塞嗽滤报豹出曝澈屋移掇渴槽妆秦领流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,流式细胞术流程,美劝忘害抚听遮复侄蚜檄尔嵌灭灭乃式来柱烹宽珐掌盟篱孤为奥忿茄萌锹流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,应用,细胞膜：流动性、膜电位、膜通透性 细胞内离子浓度：H+、Na+、K+和Ca2+ 细胞周期：全周期分析、S期分析、M期分析 细胞表面蛋白质分析：免疫细胞分型、其他表面蛋白分析 细胞功能：如凋亡、抗药性 基因表达：内源及外源基因表达 细胞分选 细胞克隆,聘睫服梗胎贮咋氨亭零犬淘户本尽见癸赔拆呵糯抒单垃善纤最腿抨粳主殊流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,汀瞳趴呆希非摸蓝述竖桂置倡祷铆邻披汁冀强货他死照经娄逛迈泵吧凤垒流式细胞术的基本原理-流式细胞术的基本原理-,