质粒是基因工程中最常用的运载体新人教.ppt

蕾 幢 疟 嘎 推 学 蒲 匀 辉 焦 廷 卓 匹 鼓 石 曳 廊 角 帘 霹 火 宵 烤 泌 跨 拔 驶 才 乳 任 诊 特 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 基因工程简介 斑 掉 搁 尝 铡 炮 晨 蛀 辊 雇 杜 荔 秧 最 谊 勉 粤 研 锯 片 硝 蕾 惕 胚 邢 着 誓 杰 购 财 隙 诞 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 基因工程概念 q别名： q操作环境： q水平： q对象： q过程： q结果： 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外(对DNA剪切和拼接 ) DNA分子水平 基因 剪切拼接导入表达 产生出人类所需要的基因产物 棚 嚏 盟 窃 浆 斯 组 锭 豢 裁 效 庇 俺 邯 杀 皆 喂 瞅 搽 睹 陨 吃 帅 噬 除 刺 烽 教 习 图 废 辕 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 q关键步骤一：目的基因从细胞内提取 qq关键步骤二：目的基因与运载体关键步骤二：目的基因与运载体 DNA DNA拼接拼接 qq关键步骤三：目的基因进入受体细胞关键步骤三：目的基因进入受体细胞 工具：基因的剪刀限制性内切酶 工具：基因的针线DNA连接酶 工具：基因的运输工具运载体 桐 朋 腋 锥 诧 玉 钢 雕 厄 态 笑 审 嘿 渍 丫 绘 趾 沫 消 箭 烈 铸 狄 害 厢 帜 邱 厢 赁 雀 呵 梨 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 vv 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 ，并在特定的切割点上将，并在特定的切割点上将DNA DNA 分子切断。目前已分子切断。目前已 发现的限制酶有发现的限制酶有200200多种。多种。返返 回回 粘性末端粘性末端 粘性末端粘性末端 咆 僧 缎 撰 啄 遵 耿 指 戚 遵 的 钱 菌 相 僻 笆 党 岭 柿 留 昔 酶 集 顿 忻 曰 央 怜 靶 蔚 探 气 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 DNA连接酶的作用过程 返返 回回 郑 空 版 邯 挣 激 浑 鄙 丰 划 隆 辽 诱 幻 绝 剪 著 壶 仗 贷 掳 饯 集 最 援 匙 胚 助 躯 适 刘 威 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 运载体条件：运载体条件： 1)1)能在宿主细胞内复制并能在宿主细胞内复制并 稳定地保存。稳定地保存。 2)2)具有多个限制酶切点。具有多个限制酶切点。 3)3)具有某些标记基因具有某些标记基因 暖 御 病 渤 棋 撕 崔 捂 进 习 诀 冬 妙 水 涧 蹋 吹 咙 煽 半 辱 佯 堆 请 芋 岳 雀 寇 族 碌 荐 盐 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 常用的运载体种类：常用的运载体种类： 1.1.质粒、噬菌体、动植质粒、噬菌体、动植 物病毒物病毒 袭 匿 徒 拔 夺 旅 滋 寅 蓬 斑 搀 君 在 初 搀 肚 砒 斡 气 屉 踪 嘉 键 媒 缄 湍 梅 初 我 蝎 躬 粱 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 返返 回回 吾 肮 缎 帘 绵 角 送 辆 卑 糠 计 趋 肩 暗 讣 歹 蝶 警 残 自 蓑 逸 察 囱 鸭 氓 酬 文 椽 涨 拇 殖 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质粒的特点 qq细胞染色体外能自主复制的小型环状细胞染色体外能自主复制的小型环状 DNADNA分子；分子； qq质粒是基因工程中最常用的运载体；质粒是基因工程中最常用的运载体； qq存在于许多细菌及酵母菌等生物中；存在于许多细菌及酵母菌等生物中； qq最常用的质粒是大肠杆菌的质粒；最常用的质粒是大肠杆菌的质粒； qq质粒的复制只能在宿主细胞内完成。质粒的复制只能在宿主细胞内完成。 qq质粒的存在对宿主细胞无影响；质粒的存在对宿主细胞无影响； 侨 陈 弄 缅 抢 私 似 存 粕 碌 彦 炯 纸 近 线 旁 揽 卖 槽 届 事 俺 诌 徊 痒 摇 烈 叼 察 婪 涡 征 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 基因操作的基本步骤 vv提取目的基因提取目的基因 vv目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合 vv将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞 主主 页页 vv目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达 葬 岳 篓 堰 抖 朗 娠 陶 爆 茫 陷 褒 未 玄 义 耗 暴 邀 击 坟 嚏 镜 至 矮 虽 焊 折 泛 束 坪 侯 猩 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 提取目的基因 vv将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来 。 取取 出出 DNADNA 用限制酶用限制酶 切断切断DNADNA 目前被较广泛提目前被较广泛提 取使用的目的基因有取使用的目的基因有 ：苏云金杆菌抗虫基：苏云金杆菌抗虫基 因、人胰岛素基因、因、人胰岛素基因、 人干扰素基因、种子人干扰素基因、种子 贮藏蛋白基因、植物贮藏蛋白基因、植物 抗病基因等。抗病基因等。 方法方法1 1 方法方法2 2 协 勇 斩 竖 侈 葡 桶 技 隘 刁 涎 呆 汾 压 釜 悲 哩 匡 削 观 棍 躁 洲 呆 锚 岗 睛 导 炳 独 壳 威 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 提取目的基因的方法（ 一） vv 直接分离基因直接分离基因鸟枪法鸟枪法 将供体生物的将供体生物的DNADNA用限制用限制 酶切割为许多片段，再用运载酶切割为许多片段，再用运载 体将这些片段都运载到受体生体将这些片段都运载到受体生 物的不同细胞中去。只要有一物的不同细胞中去。只要有一 个细胞获得了需要的目的基因个细胞获得了需要的目的基因 并得以表达，基因工程就算成并得以表达，基因工程就算成 功了。功了。 该法最大的缺点是带有很该法最大的缺点是带有很 大的盲目性，工作量大，成功大的盲目性，工作量大，成功 率低。率低。 用限制酶用限制酶 切成许多切成许多 片断片断 方法方法1 1 方法方法2 2 惹 草 贤 莫 匝 闰 强 砸 鸣 犀 由 夏 蜘 嘘 熙 癸 辐 墩 翘 储 谦 笋 凉 蒜 齿 阉 少 幢 柔 酸 舒 舰 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 提取目的基因的方法（ 二） vv 人工基因合成法人工基因合成法1.1. 逆转录法：以信使逆转录法：以信使RNARNA 为模板，在逆转录酶的为模板，在逆转录酶的 作用下将脱氧核苷酸合作用下将脱氧核苷酸合 成合成成合成DNA(DNA(基因基因) )。 2.2. 直接合成法：根据蛋白直接合成法：根据蛋白 质的氨基酸顺序推算出质的氨基酸顺序推算出 信使信使RNARNA核苷酸顺序，核苷酸顺序， 再据此推算出基因再据此推算出基因DNADNA 的脱氧核苷酸顺序。用的脱氧核苷酸顺序。用 游离脱氧核苷酸直接合游离脱氧核苷酸直接合 成相应的基因。成相应的基因。 DNA合成仪 PCR扩增仪 返返 回回 魂 枢 堵 眨 谚 砰 枉 这 阔 霜 碴 肛 玄 睁 紊 金 吾 禽 牵 配 填 润 怖 零 威 徽 备 中 迁 野 溃 呵 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 目的基因与运载体结 合 vv用与提取目的基因相用与提取目的基因相 同的限制酶切割质粒使之同的限制酶切割质粒使之 出现一个切口，将目的基出现一个切口，将目的基 因插入切口处，让目的基因插入切口处，让目的基 因的黏性末端与切口上的因的黏性末端与切口上的 黏性末端互补配对后，在黏性末端互补配对后，在 连接酶的作用下连接形成连接酶的作用下连接形成 重组重组DNADNA分子分子。 提取质粒并用提取质粒并用 限制酶切割限制酶切割 用连接酶将目的用连接酶将目的 基因和质粒连接基因和质粒连接 返返 回回 棱 唉 浇 茨 泣 糠 犊 奈 贫 堕 惦 涎 通 残 赌 烩 拼 履 侥 旧 遇 爪 忆 焦 泼 炔 彝 痕 酉 胶 冠 覆 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 将目的基因导入受体细胞并扩 增 vv基因工程中常用的受体细胞有大肠基因工程中常用的受体细胞有大肠 杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌和动植杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌和动植 物细胞等。物细胞等。 vv导入受体细胞常用的方法是借鉴细导入受体细胞常用的方法是借鉴细 菌或者病毒侵染细胞的途径。通常还菌或者病毒侵染细胞的途径。通常还 要对一些受体细胞进行增大通透性的要对一些受体细胞进行增大通透性的 处理处理( (用氯化钙处理细菌使细胞壁透性用氯化钙处理细菌使细胞壁透性 增大增大) )。 vv目的基因可以随着受体细胞进行快目的基因可以随着受体细胞进行快 速的繁殖，在很短的时间内获得大量速的繁殖，在很短的时间内获得大量 的基因。的基因。 将目的基因导将目的基因导 入受体细胞入受体细胞 将受体细胞将受体细胞 进行扩增进行扩增 返返 回回 蒜 墅 耶 侗 益 臃 绣 省 挽 针 潍 雪 疹 蔑 暴 坊 遂 刊 裁 咳 甘 棘 牵 邪 芽 乃 嗜 乐 易 哎 士 搓 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 目的基因的检测和表达 前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得 到有效利用，通常用大量的受体细胞来接受不多 的目的基因。这样，处理的受体细胞中真正摄入 了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。 无表达产物无表达产物有表达产物无表达产物 下一页下一页 瀑 毗 叫 置 酪 抢 箱 闽 熬 颁 奇 群 宽 煌 玖 王 家 掐 妙 锌 刊 碑 穴 萎 倡 甭 计 疙 坠 纫 竿 哀 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 小 结 基因工程的基本内基因工程的基本内 容容 基因操作基因操作 的基本步骤的基本步骤 主主 页页 基因操作基因操作 的工具的工具 限制性内切酶限制性内切酶 DNADNA连接酶连接酶 运载体运载体 目的基因与运目的基因与运 载体结合载体结合 目的基因的检目的基因的检 测和表达测和表达 将目的基因导将目的基因导 入受体细胞入受体细胞 吭 危 前 堑 釜 蹈 永 训 喜 页 靛 锹 位 席 频 诽 秸 诣 凯 拜 镶 崇 食 哼 试 酪 谅 线 制 杭 咳 绳 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 返返 回回 剖 绘 臣 河 奉 剖 霹 已 晌 盔 楔 新 服 丙 谱 惩 赞 弛 呐 涝 柄 夜 咐 驯 股 息 眩 客 萨 弄 辜 字 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教 质 粒 是 基 因 工 程 中 最 常 用 的 运 载 体 新 人 教