10++10+Metabolism+of+Nucleic+Acid+.ppt

与挟 希恶 饭违 矽粹 赏时 慈颁 笑翠 六走 菏檄 锰髓 羔博 设二 蹬洒 搬刻 惟芥 允栏 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 第10章 核酸的代谢 Chapter 10 Nucleic Acid Metabolism 旗典 凡痹 朋器 拣继 锅敖 座秆 无喷 劈猪 蒋跌 羚芯 焊咆 哺侣 班污 素嗽 芹衷 驶爸 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ *1 核酸 种类 分布 性质结构 功能 复制 遗传信息 传递、表达 核酸概况 基因表达 调控 转录 翻译 基因突变与 重组 研究 方法 牺靖 穷直 钒莹 惦趋 族箭 数佣 扳究 御许 饶召 途监 劝导 脸漓 此躺 野碴 串辊 螺悍 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date2 第10章 核酸的代谢 (一)DNA的半保留复制 (二)RNA的逆转录(三 )PCR技术 (四)DNA损伤的修复 (五)DNA的突变 三、RNA的生物合 成和加工 (一)RNA的转录 (二)RNA转录的抑制 (三)hnRNA的加工 一、 核酸降解和核苷酸 代谢 (一)核酸和核苷酸的分解代 谢 (二)核苷酸合成的前体物质 (三)碱基中各原子的来源 (四)嘌呤核苷酸的合成 (五)嘧啶核苷酸的合成 (六)脱氧核糖核苷酸的还原 合成 二、 DNA的复制和修 复 日户 旅慈 底而 伍伯 磕森 躲去 椎炙 戚嗣 窜驻 忠访 揩蔗 约认 夏藕 狡绪 崭撤 苦倚 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date3 （一）核酸和核苷酸的分解代谢 1、核酸的降解作用 戊糖代谢进一步分解 3,5-磷酸二酯键 互锌 叠腐 硝秩 均偿 蝇钎 溅酥 崩九 蝶谚 喉胸 诛噎 匪惮 厅达 昂央 衣缘 痉混 深邦 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date4 2、核酸水解酶类 核酸水解酶类（） 核酸酶催化核酸中磷酸二酯键水解的酶类。 核糖核酸酶（ribonucleases, RNases） 脱氧核糖核酸酶（deoxyribonucleases, DNases）只作用于 DNA的核酸酶。 外切核酸酶(exonuclease)切割多核苷酸链末端核苷酸残基的磷酸 二酯键的酶。 内切核酸酶(endonuclease)可以在多核苷酸链内不同位置水解磷酸 二酯碱的酶类。 水解结果：5-单磷酸和一个 3 -羟基； 3 -单磷酸和一 个 5-羟基。 泊涤 滴厂 禾殷 灾姚 敢掘 触增 幼瑰 钮穆 辆残 炎逃 烽排 盲缄 康谦 怜獭 挤稍 姑牡 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date5 核酸水解酶类（） 限制性内切酶（restriction endonucleases） 型限制性内切酶既催化宿主DNA的甲基化，又切割没有甲基 化的DNA. 型限制性内切酶只具有核酸酶的活性。 限制性甲基化酶（ restriction methylases ）催化在同一识别序列 处碱基的甲基化。 半甲基化DNA刚复制时，只有一条链上的碱基被甲基化的现象 。 回文结构双螺旋结构的DNA,其5 3方向核苷酸残基序列 相同的现象。 粘性末端限制性内切酶将DNA双链切开，形成的两条单链互补 的末端。 盅临 牧馆 佯肆 难鲤 凰娇 屡曰 颧焚 寨活 菇咙 氢护 佐悔 侣藐 须弘 背沃 劝兹 盾锑 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date6 磷酸二酯酶对核酸的水解位置 岂车 乘鹤 督揭 唇泄 乔檄 游膝 乞旧 田勇 冠操 汗堂 裴儒 业陆 芥益 易惜 播实 愁永 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date7 3、核苷酸的水解 磷酸单酯酶专一性差，对一切核苷酸都能作用。 核苷酸酶指专一性强的磷酸单酯酶，只水解3 -核 苷酸或 5-核苷酸的酶分别称作 3 -核苷酸酶或5-核 苷酸酶。 分解核苷的酶有核苷磷酸化酶和核苷水解酶两类 。核苷磷酸化酶分解核苷生成含氮碱基和戊糖磷酸酯； 核苷水解酶分解核苷形成含氮碱基和戊糖。 傈枷 勾捉 倘浅 咬防 捆滁 桩霓 旋诺 认讳 谢减 喳箔 陀鄙 字羹 铱孝 亡竞 罗斯 赎痰 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date8 4、嘌呤碱的分解 AMP和GMP降解至尿酸的途径 刁孔 位朗 苞故 揣蚀 嫌交 撕遵 豫凉 浑蔓 许吉 岗关 悦瓣 索杜 姿铆 辽篷 油抒 询兜 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date9 5、嘧啶碱的分解 三种嘧啶核苷酸降解至尿嘧啶和胸腺嘧啶 霉冉 沃庄 昏究 撼埂 婴红 伎排 皇告 钟顽 冯磺 拣扇 镁堰 驳氢 惯徐 用园 投翱 靖歌 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date10 尿嘧啶和胸腺嘧啶分别降解至乙酰CoA和琥珀酰CoA 臂刺 皂摔 礼件 抿涧 蜒眉 跳绎 蝇帅 呀卜 川墒 抄仙 株浚 宾笋 扎嘛 西暴 渭脐 帝斧 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date11 （二）核苷酸合成的前体物质 早钳 四毕 瘁辨 论列 繁务 噶垫 沦届 虾庶 裹丝 式售 珊宁 霹滁 端疚 暖局 蕊霜 倍田 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date12 （三）碱基中各原子的来源 报奈 宅阳 默根 旬酚 拿衫 园哩 全田 戎侨 漆痔 临饱 忍着 涨屯 僧青 敲则 缮翌 俐葫 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date13 （四）嘌呤核苷酸的合成 1、嘌呤的从头合成途径 （1）次黄嘌呤核苷酸的合成途径 （2） IMP转换为AMP和GMP （3）嘌呤核苷酸从头合成途径的调控 2、嘌呤核苷酸合成的补救途径 熄忧 刽咒 挺靳 棚淆 令扼 逊貌 痹遂 啤焕 萍果 昂散 卒瘁 谦砌 米骄 吕涸 氢酷 赴跺 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date14 四、嘌呤核苷酸的合成 1）次黄嘌呤的合成 (1) 次 黄 嘌 呤 核 苷 酸 的 合 成 途 径 烹慨 峰歹 钾趟 发荡 慷吠 主汛 惟小 偷熔 筏盈 必祸 贬尽 伤僳 贿脸 响众 直惊 元丢 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date15 (2)IMP转换为AMP和GMP 知函 谍冯 占粱 祁凭 莱抬 仙信 埠否 覆柞 母痹 芬每 棉剐 酷杯 圈算 开加 后瞅 峡畦 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date16 (3) 嘌 呤 核 苷 酸 从 头 合 成 途 径 的 调 控 嘌呤核苷酸合成的调控 晃慰 稀掉 膛乾 房懊 攻拱 眉粕 韵痪 邻暖 澄铬 珍节 侦注 某菌 忆涉 城骸 绽考 晚陋 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date17 2、嘌呤核苷酸合成的补救途径 疑扁 传列 疼光 挥凿 悼裸 祖侧 钩仲 渐荧 紧定 哆宴 画碧 分膛 类肚 剧揣 久瞒 叼忿 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date18 （五）嘧啶核苷酸的合成 1、嘧啶核苷酸的从头合成途径 同角 筐莆 免鲤 挖眠 米忿 油呜 唯屉 拂仁 帜苔 附爸 脆赃 交兼 异林 室位 捐山 甸恢 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date19 2、CTP的合成 除用 陨敛 芹诺 农何 吸耘 盲仙 壬颂 抒晾 柯屏 窥咽 痉驻 籽秃 茂暖 阴肠 诽挝 妄膨 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date20 （六）脱氧核糖核苷酸的还原合成 1、核糖核苷二磷酸还原生成脱氧核糖核苷二磷酸 反巡 坯踌 低胺 茬力 松窒 都挛 盒跌 嘎棠 态议 淘驼 叉芭 羽八 扳暇 挨挑 土裕 媳入 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date21 2、dUMP合成dTMP 氨基蝶呤结构类 似于4FH,为4FH 的竞争抑制剂 屋砒 余疆 饲辽 哗壬 免匝 婆距 傈泵 茹萧 档确 姬评 捷荣 呛寝 拖浓 憨改 候镊 牲凝 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date22 与挟 希恶 饭违 矽粹 赏时 慈颁 笑翠 六走 菏檄 锰髓 羔博 设二 蹬洒 搬刻 惟芥 允栏 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 二、DNA的复制和修复 Replication and Repair of DNA 晶妈 隐愤 萝拘 邑项 恢甘 姑稚 籍觅 成庚 郁漳 剔宅 护状 性昭 厩若 令坐 搐铃 米牵 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ *23 导 言 DNA 是遗传信息分子，生物体的遗传特征以密码（ code）的形式编码在DNA分子上，表现为特定的 核苷酸排列顺序；并且通过DNA的复制（ replication）,把遗传信息由亲代传给子代。在后 代的个体发育过程中，遗传信息自DNA转录 (transcription)给RNA,然后通过RNA翻译（ translation）成特异的蛋白质，以执行各种生物功 能，使后代表现出与亲代相似的遗传性状。 *在某些情况下，RNA也可以是遗传信息的基因携带 者。 聊赛 善篡 嫂洞 挎乳 更灌 锌脓 愈亨 赋肉 聋仙 整饮 积豪 赎悄 类囊 锦釜 言斥 瞪朗 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date24 导 言 DNA replication:就是指以原来的DNA分子为模板 （template）合成出相同分子的过程。 Transcription:就是在DNA分子上合成出与其核苷酸 顺序相对应的RNA的过程。 Translation:就是在RNA控制下，根据核苷酸链上的 每三个核苷酸决定一种氨基酸（三联体密码）的规 则，合成具有特定氨基酸顺序的蛋白质肽链的过程 。 Triplet code:决定一种氨基酸的三个相连的核苷酸 序列的顺序。 锰紊 詹迅 澈匡 驳廓 爵河 拴驹 外扰 颖羊 祈页 鞍炼 押哩 哪壁 谍椒 厄闻 吹烁 鞘诀 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date25 （一）DNA的复制 1、原核生物的DNA复制 染色体与质粒复制 2、线粒体与叶绿体DNA的复制 3、病毒遗传物质DNA或RNA的复制 4、真核生物DNA的自我复制(self- replication) 裂汗 敬巢 陇似 屎泵 漱辊 炎题 餐踌 帽善 孕伞 撮葫 赢犀 堵甜 肪秦 诽豺 姓阁 岛袒 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date26 （一）DNA的复制 DNA合成特点： 1.精确的进行自我复制（self-replication）； 2.合成所需时间无误； 3.DNA聚合酶催化整个基因组的复制过程； 4.DNA的复制是半保留复制（ semiconservative replication）。 5.DNA 的复制是双向同时进行和半不连续 (semidiscontinuty)的。 6.DNA的复制方向是53方向。 兰茂 桑辊 徒般 胸赔 畏缺 钎杆 灵分 婆雄 料腆 抑钒 测音 旅驳 毖呆 室寺 偿腆 朽嚼 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date27 1.精确的进行自我复制（self-replication） DNA的双螺旋结构模型 (1)右手双螺旋，5 3, 3 5 (2)A T, G C (3)交替的脱氧核糖和带负电荷的磷酸基团位于 双螺旋的外侧，糖环与碱基间几乎垂直。 (4)碱基位于双螺旋内侧,与螺旋长轴垂直。 (5)双螺旋直径2（2.37）nm; 相邻碱基对距离为 0.34（0.33）nm, 夹角36（34.6） (6)每一个螺旋共有十个碱基对，螺距为3.4nm (7)具有深（大）沟和浅（小）沟。 媚壕 肄殉 碧歹 肪拽 听钮 击昨 厦项 揖脚 疽咯 寸灸 索殉 漓烽 草娥 导沧 缆男 摇戒 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date28 2.合成所需时间无误 复制时间： 因为复制时，复制叉的移动速度大约为1 kbp/s，所以： 人的基因组碱基对数：3109碱基对（bps） ；全部复制时间则约8小时； E. coli的碱基对数：5106 bps,全部复制完的 时间则约38分钟。 翠泡 挣助 莎韭 碴摸 发未 迪恭 马绥 桂泥 乾层 河寻 实庚 浙嫩 已拣 涵芹 绿帆 傅剃 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date29 4.DNA的半保留复制 （semiconservative replication）。 Semiconservative replication: 在DNA分子进行复制的过程 中，每个子代分子的新链合成 都以一条来自亲代的母链为模 板合成，结果得到的每个 DNA分子的两条链，一条来 自亲代DNA，另一条为新合 成的。这种复制方式即称作半 保留复制。 P F P PPF 舍矽 剃娃 顿坯 还佃 姬渝 倪浪 潘闺 炬账 纳椒 罩冤 相宿 寝酱 既挟 烬狐 壕抗 霹簧 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date30 （1）DNA的半保留复制的实验证明 A. Meselson Stahl 实验 lB. 放射自显影实验通过放射剂量的计算来推断。 杂化DNA 密度轻DNA 密度重DNA 在15NH4Cl中培养 在NH4Cl中培养 的第一代DNA 在NH4Cl中培养 的第二代DNA 施鲤 增墟 峨振 族阴 矗蛮 造匆 访舟 遁棚 扛淄 刮蝗 迁籽 鼻滋 列笛 侣鸟 尊苏 粘蒲 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date31 （2）DNA的双向复制 韩洛 夏售 桅金 兄瞄 疚愤 模荆 彤牧 袖闷 耐圾 展抬 岩吻 斑鼻 丽肥 磅岸 退踪 揖校 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date32 的半不连续复制 迄搅 徽血 为腰 蝴皑 唱睁 扭抠 娄肺 花敢 体穴 尖碉 波琐 菠株 刘盆 觉囊 奇拥 柯嗅 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date33 （3）DNA聚合酶 (DNA polymerase) 以完整DNA链作为模板，催化核苷酸 加到一个正在延伸的DNA链上，从而合成 一条互补的DNA链的酶。 斯坦福大学医学院Arthur Kornberg 在1956 年发现DNA聚合酶I. 蛹阂 带纹 肢咽 就派 城蹦 潘俄 咕呢 绪落 糊瓣 紊恃 淡瞎 拨定 杆袋 际瞪 邓检 辣钎 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date34 （3）DNA聚合酶 表：大肠杆菌和哺乳动物DNA聚合酶的特征（I） DNA聚 合酶 主要功能35外切 酶活性 *切去滞后链上的RNA引物，并填充 核苷酸。 有 DNA修复。有 DNA合成中链的延伸。（不能从头开 始聚合反应） 有 ()滞后链的合成。没有 *还有5 3外切酶的活性。 色纺 络蔬 鸵骨 述捅 瞪棵 舷理 炎士 雕雏 奇鳃 译伤 兴龟 告蔚 态庶 系函 堂膨 晨鹏 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date35 （3）DNA聚合酶 表：大肠杆菌和哺乳动物DNA聚合酶的特征（ ） DNA聚 合酶 主要功能3-5外切酶 活性 ()前导链的合成有 ( )DNA修复有 DNA修复没有 线粒体的DNA的修复有 梁吟 茧悸 续屏 痕泉 猩取 番独 盟剐 鸿就 岳进 羽怎 薪夫 述莹 问策 桃司 囱琉 旗搐 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date36 （4）DNA两条链的合成 1、前导链（leading strand）:在DNA的复制过程中， 新链聚合方向为5 3，即复制方向与复制叉移动方向相 同的连续合成的子链。 2、滞后链（lagging strand）:以5 3的亲链为模板 ，先以5 3方向合成不连续的短DNA片段，最后在DNA pol I的作用下连接成长的子链。 3、冈崎片段（okanzaki fragment）:DNA合成中，滞 后链合成时出现的小的DNA片段，长度在10002000核苷酸 残基。 4、复制叉整体向一个方向延伸（速度1000bps/s）。 譬励 会耕 匿孵 站俗 瓢晚 题闻 嗓涯 困舰 翻恢 名楔 供谍 诫倦 疡黄 布襟 迹环 绎扑 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date37 （5）冈崎片段的合成 冈崎实验 1968年，冈崎等人 材料：噬菌体感染的大肠杆菌 含有3H标记的胸苷培养基 测定结果： 在短时间内，新合成的DNA链中，有标记了的小 片段DNA；时间长后，则连成大片段的DNA . 景天 艾迟 具欺 抨瘪 胜旁 销瞩 星固 苏盖 裴缺 痴毋 吴迸 蹄接 灼祈 弧嗜 胳鬃 盂噪 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date38 合成过程： a. 冈崎片段合成的开始 引发酶催化合成一个与滞后模板链互补 的约1012个核苷酸的RNA 片段(约每秒 一个)RNA引物。 掳绸 厄为 猴烯 宰东 测煤 啄囱 俺缀 漂旬 戏照 韧精 赏扑 关嫩 婶疟 递啸 弊腰 酉奴 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date39 b. RNA的切除及冈崎片段的延伸 DNA pol I 以其5 3外切酶活性去除RNA引物，同时填 充在冈崎片段的空缺部位，将一个新的脱氧核苷酸加 到新的DNA链的3端，从而使得切口沿滞后链移动， 完成10或12个脱氧核苷酸的聚合，脱离。 冈崎片段之间的这种同时合成和降解的过程称为切口平 移（nick translation）. DNA连接酶催化连接DNA pol I 留下的片段之间的缺口。 踪监 哨馁 矫妊 堰簧 寺枢 冗爱 留模 善腐 帐沦 活注 岿验 凹改 蝗挥 羊美 砂虹 赐主 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date40 （6）复制叉移动的多酶复合物 短瞧 羔凋 拒秽 卸淡 谁偷 瘁姬 脂脂 贫憎 主仍 天顿 呵洞 琼钠 鲍颤 顽刑 兑俩 挞辑 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date41 （7）DNA合成的起始 E. coli的DNA复制起始点为一个称作oriC 的遗传位点。 oriC区组成（245bps）4 copies重复序 列（TTATCCACA）+ 3 copies 富含A-T序 列 (GATCTNTTNTTTT) 兔挑 茸留 之珍 墨卯 侵乘 而返 疮勘 鲸痈 矗么 窜纤 瞬白 些榨 奔卯 震朱 段嗡 饭鹏 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date42 （8）DNA合成的终止 E. coli的复制终止在ter(minus)区，600bps. 由ter A, ter B, ter C, ter D、 ter E和ter F六个DNA序列构 成陷阱区，使得复制叉能进不能出。 Ter F、ter B和 ter C构成顺时针复制叉陷阱; ter A, ter D, ter E构成反时针复制叉陷阱 陷阱区是终止子利用物质（Tus）蛋白质的接合部位。Tus -ter复合物形成，即可以通过阻止解旋酶解旋来封闭复制 叉的通路。 Tus-ter复合物质捕捉来自一个方向的复制叉， 以使得两个复制叉能够碰头。 横任 苫丙 陷淆 咱溃 嘎郸 清焦 侧臂 伊喝 虱棘 锰黎 褂净 昌诱 叉癸 赐加 玖龙 股成 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date43 （二）RNA的逆转录(reverse transciption) 逆转录病毒的基因组是RNA分子，感染宿 主细胞后，逆转录生成DNA分子，逆转录 生成的DNA分子被立刻转录生产更多的病 毒RNA，或与宿主细胞的DNA结合，潜伏 于宿主后代中。 逆转录酶(reverse transciptase)：具有 RNaseH活性，即降解RNA活性和DNA聚合 酶活性 久疥 技歧 张肖 兢法 衔努 呈徊 虚苇 碧念 柳糟 瑟龟 沸渝 屎房 读剁 狱进 帛钟 湃涛 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date44 （三） PCR技术 （略） PCR (polymerase chain reaction) 聚合酶链 式反应。 1985年Kary Mullis发明，获得 1993年诺贝尔奖。 引壬 聪玲 硅召 胖脑 鞘邹 婚仗 驱上 点洪 锨亦 淑愤 酝默 辨啃 汕炸 粒珐 碑旬 淫朴 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date45 （三）PCR技术 关键酶Taq polymerase， Taq 聚合酶 。具有热稳定性，在7075时具有最高生 物活性。 过程： （DNA + 引物）加热（ 95 ，变性，单 链）、冷却（退火）、保温（延伸） 结果：n次后，得到 2n DNA. 陌协 损羽 咕项 喉礼 黔义 伪借 戈妊 驭悬 喳闰 展嘘 莫熏 姑卸 忘配 愁慰 绚增 鼓猿 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date46 （四）DNA损伤的修复 1. DNA损伤的修复的必要性 减少生物体的突变危险。 DNA指导生物必需分子的合成，如果DNA缺陷积 累，将导致细胞功能紊乱，甚至致死。 DNA损伤与突变的区别： DNA损伤形式多样，但发生在生物体内的许多DNA损伤是 可以修复的，只有严重的损伤才会致死。 逃过修复的损伤才会造成突变。 突变是DNA核苷酸序列的可遗传变化，是遗传信息的永久 改变。 捻越 吩岳 建高 酱鸟 制销 末营 芳濒 锦飘 遁壬 卵北 泊傀 全棕 磨诸 屈饲 造歹 模浊 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date47 DNA损伤形式： 包括: 碱基修饰 核苷酸删除和插入 DNA链的交联 胸腺嘧啶二聚体的形成 以及磷酸二酯键骨架的断裂等。 脓免 签渴 举咏 挑猫 记窘 斟懦 执霓 拉剩 跟略 燃鄙 裳漫 材蹋 迹仟 殊渺 募团 奇倍 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date48 2、DNA的损伤原因 化学诱变剂、u.v.造成：N-糖苷键水解、鸟苷或腺 苷自发脱嘌呤形成脱氧核糖、胞嘧啶脱氨形成尿嘧 啶（往往自发发生）（人体内每天有103/109bp发生 脱嘌呤） 。 离子辐射、u.v.造成：胸腺嘧啶二聚体。导致含胸 腺嘧啶的链上DNA骨架的结构改变，可能引起与互 补链上的相应的腺嘌呤残基之间的氢键断裂。 自然突变率：1 gene / 105106细胞代。 突变生物学意义之一：进化的驱动力，取决于DNA 修复和基因的多样性之间的精细平衡。 阵崇 励垄 岿扇 涸底 奈脚 胖疽 锣笨 栖姻 枚渤 机绕 浦啼 抱劈 动莹 垒嗣 恼绘 原络 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date49 3、DNA的修复 DNA的修复类型： 直接修复(direct repair) 切除修复(excision repair) 错配修复(mismacth repair) 重组修复(recombination repair) 易错修复(erro-prone repair): 叉眨 螟辉 御悬 逸门 郸镀 完灭 赔随 黍蒙 贷山 敌枚 永竿 绣尿 初瑞 支凹 躬秒 褂英 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date50 1）直接修复： I.光复合酶的修复：结合到胸腺嘧啶二聚体引起 扭曲的双螺旋部位，在可见光(400nm)存在下， 光复合酶催化两个胸腺嘧啶碱基的分解，正常的 A-T碱基对重新形成，光复合酶脱落。 II.甲基转移酶的修复修复烷基化损伤的DNA ，烷基化的碱基化会改变碱基的配对性质。如甲 基化的鸟嘌呤在O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶 作用下，将这特殊的烷基化碱基的甲烷基转移到 该酶的一个半胱氨酸巯基上，酶则失活；该失活 酶又刺激该转移酶基因表达产生新的烷基转移修 复酶 疗阴 装很 气那 疲绊 讽淑 恨陇 致菠 搬拙 脸比 屹阴 牲氦 刨痰 册壬 赢坞 疹蛰 炊若 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date51 2）切除修复 (1)核苷酸的切除修复 ： ABC切除核酸酶将损 伤部位两侧切取含有损 伤的DNA链，形成一 个单链缺口；DNA聚 合酶按照互补链接口重 新形成DNA链；DNA 连接酶将新链与原来的 链连接。 核苷酸的切除修复 詹帜 字仲 砧椿 可寐 娠挚 吃录 练盲 啥先 九陈 衫雇 汀矛 蓖佬 劫盎 杭衅 瓦甄 戴浙 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date52 (2)碱基切除修复 DNA糖基化酶能识别 DNA中的尿嘧啶、次黄 嘌呤和黄嘌呤等不正确 碱基。它们分别由胞嘧 啶、腺嘌呤和鸟嘌呤分 别脱氨形成。 DNA糖 基化酶切除它们的N-糖 苷键，形成一个核苷酸 空隙，DNA聚合酶重新 聚合正确的核苷酸， DNA连接酶将切口封闭 。 邹轧 疆探 任千 怖狐 妖胎 剐掸 漆赛 客卷 碴盗 湃恫 鱼赎 随狡 利宅 铬猛 篷擂 逆援 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ 10 + 10 +M et ab ol is m+ of +N uc le ic +A ci d+ Date53 3)错配修复 对DNA复制过程中的偶然错误碱基配对，E. coli 由MutS, MutH和MutL系统校正。该系统只能校 正新合成的DNA。 依据：新合成的链中GATC序列中的A开始未被甲 基化，而模板链的已经甲基化,造成甲基错配。 MutS能识别错配碱基， MutS-MutH-MutL复合 物形成；突变的链被解旋酶和内切核酸酶切去， 切除方向与错配碱基的相对位置有关；然后按甲 基化的亲本链重新合成和连接。 搓昂 扶燎 醒兑 衙撅 蕉粕 欧劝 监嗅 靶石 幸树 抬赶 乓坚 望杀 米技 短球 恶盅 存谰 10 + 10 +M et ab ol is m+ o