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实验室实习的总结报告 实验室实习的总结报告 一、近X 个月的实习工作概括总结 1.进入的糖化学领域。 针对糖醇类进行了系统的学习和认识，了解学 习了多种糖醇的理化性质。 2.学习掌握稀有糖的浓缩、 纯化、 结晶工艺。 亲自参与了木糖醇母液的 纯化、 脱色、 浓缩到结晶、 干燥的各项工作，对糖醇的生产加工有了一 定的认识和了解。 3.学习了解了各种实验分析用仪器的使用方法。尤其是液相色谱和 ABS 葡萄糖生物检测器的熟练操作对我今后的学习和工作又都很大 的帮助，受益匪浅。 二、实习工作总结及今后的工作计划 1.糖化学知识的充实 2.小肠蔗糖酶提取纯化初探 2.1 实验材料：XXX。 试剂：磷酸-柠檬酸缓冲液 硫酸铵 氯化钠 磷酸 3，5-二硝 基水杨酸 考马斯亮蓝G-250 牛血清蛋白 2.2 实验器材：试管 胶头滴管 手套 口罩 组织捣碎机 离心机 冷 冻箱 分光光度计 2.3 实验步骤： 1 2.3.1.XXXX 酶的粗提取 XX 清洗绞碎缓冲液处理组织破碎冷处理离心盐析。 (第一批已经完成) 具体操作步骤： 2.3.1.1 样品粗提 配置 XXXX 缓冲液。 A 液（0.2mol/L 的 XXXXX12H2O 溶液）：称取 XXXXO412H2O 72.628g，用去离子水定容到1L。 B 液 （ 0.1mol/L 的 C4H2O7H2O 溶 液 ） ： 称 取 C4H2O7H2O 21.014g，用去离子水定容到1L。 缓冲液（PH=6.6）：A 液：B液=1：1 最好先用现配，若是事先配好，就盖盖，在0-4下进行保存。 取新鲜的 XXXX100g，清晰干净，切成小块。 加入500ml 的缓冲 液(固 w：液 v=1：5)，用组织捣碎机绞碎至匀浆，搅大约 5min。 取出匀浆，放置于冰箱 12个小时左右。 （此期间进行（此期间进行 XXX 的预的预 处理。）处理。） 取上清液，加入 60%XXX 和液进行盐析。 60%XXX 饱和液配制方法：1L H2O+390g XXXX 室温25 取出盐析物，溶解于 XXXX 缓冲液，放入预先处理好的 XXX，在 X下进行透析。 2.3.1.2 粗提液的活力测定与分离纯化。 在进行下一步分离纯化之前，先对粗提液的酶活力进行检测， 确定粗提液中是否含有目标酶，若是含有，确定其初始活力。 2.3.2.XXXX 酶的分离纯化 2 2.3.2.1 该步骤涉及到层析分离技术，目前计划如下步骤进行由粗 糙到精细的分离： 吸附层析纤维素层析凝胶层析 吸附层析固相:活性炭、树脂（型号待分析）流动相：磷酸-柠檬 酸缓冲液 纤维素层析固相： 凝胶层析：固定相：sephadex G-200 流动相：0.5M NaCl Sepharose 4B 0.5M NaCl 以上的未进入实行阶段，效果待查。 2.3.2.2.XXXX 酶的含量测定 采用 XXXX 法对分离后的样品进行含量检测。方法如下： 以牛血清蛋白为标准制作标准曲线，测定样品分光光度。 （具体方 法附件一） 2.3.2（2）XXXX 酶的活力测定 采用 DNS 试剂测定法，测定酶活力。 （具体方法见附件二）（第 一批活力测定进行一半） 2.3.3 各物理因素（温度、PH 值、压力等）对酶活力的影响。 2.3.4 XXX 糖、 XXXX 酮糖、 XX 醇等功能糖对XXX 酶的活力影响测 定。 三、实验成果 已经完成第一批的粗提工作，目前已经装瓶，可进行一些糖醇对其 活力影响效果测试的功能试验。（具体实验数据见附表三） 四、就业要求 希望继续从事 XXXX 酶的进一步纯化分离工作，争取再最短的一 段时间内将其商品化，同时进行XXXX 酶与酵母、 XXXX 酶的功能对 比试验，及一些XXXXX 对其活性的影响效果实验。希望能有自己的 研究实验室及研究小组，能真正的深入的将这个课题研究下去，预 计其经济效益是十分可观的，同时也是可以成为 XXX 的生物学价值 的很好论证条件。 3 期望待遇：目前XXXX-XXXXRMB 五险一金 解决吃住。 五、小结及心得体会 在为期三个半月的实习过程中，我深深的感觉到成为一个社会人 我还有很多的东西需要向 XXXXXX 这些有阅历的前辈学习，在一 些待人接物方面还需要各位领导的指导和帮助，我还刚刚的步入到 社会上，但是我想，我应该是在不断学习和进步的，也许还有各种 各样的不如意不成熟，但是幸好我还年轻，我可以认真的学慢慢的 学，适应集体适应公司，成为一名公司真正需要的全方面人才。 在几个月各位同事还有张工给与了我很多的帮助，在此我表示衷 心的感谢，在科研方面，我很感谢 XXX 将我领进了 XXX 的领域， 让我对生物化学研究有了一个新的认识，我想，这些知识一定会让 我在今后的学习生活中受用终身，而对于 XXX 酶的提取工作，我真 的是投入了我极大的热情来做，可以说是我人生的第一次如此全身 心的独自一个人来完成完善一个课题，从完全不知道如何下手，到 找资料，学方法，买仪器、 买药品到动手做实验，遇到问题解决问题， 一步一步，可以说每一个数据的诞生对让我产生极大的成就感。 而到 了现在，我回头看一看这个实验过程，我觉得我学到的最多的不是 关于这个酶的提取、 研究，而是在这个过程中我锻炼出来的勇于面对 问题解决问题的能力和决心，这个课题在一个从未接触它的人看来， 她像一个危险系数未知的老虎，但是当我真正有勇气去接触他认识 他了解他的时候，我便发现，其实什么问题都没有想象的严重，只 要真正的去面对去思考就能找到解决的方法，对此，我深感谢意。 附件一 考马斯亮蓝法附件一 考马斯亮蓝法 1. 标准方法 （1）取 16 支试管，1 支作空白，3 支留作未知样品，其余试 管分为两组按表中顺序，分别加入样品、 水和试剂，即用1.0mg/ml 的 标 准 蛋 白 质 溶 液 给 各 试 管 分 别 加 入 ： 0、 0.01、 0.02、 0.04、 0.06、 0.08、 0.1ml，然后用无离子水补充到 0.1ml。最后各试管中分别加入 5.0ml 考马斯亮兰 G250 试剂， 每加完一管，立即在旋涡混合器上混合（注意不要太剧烈，以免产 生大量气泡而难于消除）。 未知样品的加样量见下表中的第8、 9、 10 管。 4 （2）加完试剂 25 分钟后，即可开始用比色皿，在分光光度 计上测定各样品在 595nm 处的光吸收值 A595，空白对照为第 1 号试管，即0.1mlH2O 加 5.0mlG250 试剂。 注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），可用塑料或 玻璃比色皿，使用后立即用少量 95%的乙醇荡洗，以洗去染色。塑 料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。 （3）用标准蛋白质量（mg）为横坐标，用吸光度值 A595 为 纵座标，作图，即得到一条标准曲线。 由此标准曲线，根据测出的未 知样品的A595值，即可查出未知样品的蛋白质含量。 0.5mg 牛血清蛋白/ml 溶液的 A595约为0.50。 附件二 附件二 DNS 试剂法测定酶活力试剂法测定酶活力 准备工作 1. 精确称取 1 g 酶粉，用蒸馏水定容到 200ml，配制 5g/L 的稀 释酶液。 2. 准备好新华1号滤纸条，规格：1cm 6cm。 3. 配备pH = 4.8 的醋酸缓冲溶液。 4. 按照下表配备3，5-二硝基水杨酸试剂（DNS 试剂）： 药 品 名 称 用 量 3，5-二硝基水杨酸 试剂 1% 苯酚 0.2% 亚硫酸钠 0.05% 氢氧化钠 1% 5 酒石酸钾钠 20% 二 标准蔗糖曲线绘制（吸光度值与葡萄糖含量线性回归） 按下表 1-1 各取 1 mg/ml 标准蔗糖糖液、3，5-二硝基水杨酸试剂 （DNS 试剂）： 表 1-1 管号 蔗 糖 溶 液 （ 1mg/ml ） (ml) 水 （ml） DNS 试剂（ml） 1 0 1 3 2 0.2 0.8 3 3 0.4 0.6 3 4 0.6 0.4 3 5 0.8 0.2 3 6 1.0 0 3 在沸水浴中反应 15 min，冷却后定容到 25 ml，在max = 550nm 下，用分光光度计测量吸光度值，以吸光度值为纵坐标，蔗糖量为 横坐标，绘制标准曲线。或用Excel 进行相应的线性回归。 三滤纸酶活力测定 1. 将新华1号滤纸一条放入有标准刻度的试管中。 2. 精确加入1.8 ml pH = 4.8 醋酸缓冲溶液。 3. 精确加入5g/L 的稀释酶液0.2 ml，摇匀。 6 4. 在501水浴中保温反应60min。 5. 保温反应结束，精确加入3ml DNS 试剂。 6. 放入沸水浴中反应 15min（注意：将 8 空白对照液同浴反 应）。 7. 冷却后加入蒸馏水定容到25ml。 8. 空白对照液的配制： 报告人：XXX 报告时间：20XX.XX.XX 7