朗司核酸提取仪配套磁珠法核酸提取试剂盒演示.ppt

磁珠法核酸提取试剂盒,背景,DNA提取技术是分子生物学研究的基础技术。提取DNA的纯度及结构的实验，是进行基因工程各项研究所必须的条件，DNA提取技术是DNA检验的第一步骤，也是最关键的步骤。能否成功地进行DNA检验，完全取决于能否从生物检材中获得纯量的DNA。DNA提取技术的优劣，将直接关系下游实验的安全与成败。,提取核酸的方法,1、PC 抽提是去除蛋白质有效的手段，但超过了该饱和度，裂解体系中的蛋白质不会被一次去除，必须靠多次抽提，方可彻底去除。PC抽提最大的优势是成本低廉，对实验条件要求较低，对于经费紧张的实验室较为实用。 2、高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法，同样也是一个非常不错的方法。与 PC 抽提方法相比，除了纯度的稳定性可能要低一点外，该方法几乎克服了 PC 抽提的所有缺点。更快、更轻松的去除蛋白质所可以用于大规模抽提，但其不足之处是纯度 (蛋白质残留) 不够稳定，蛋白质的沉淀效率在4会更好一些。,核酸提取的方法,3、离心柱法是目前试剂盒提取广泛应用的方法。其最大特点是受人为操作因素影响小，纯度的稳定性很高 (虽然纯度不一定比PC 纯化方法更高)。加入的液体通过离心后会进入另外一个离心管中，与含有核酸的柱子完全是分开的，所以洗涤更彻底。其致命弱点是样品过量，提取效率较低，且需要反复离心，操作复杂，成本也较高。 4、生物磁珠法是将纯化介质包被在纳米级生物磁珠表面，通过介质对核酸的吸附，在外加磁场下使核酸附着于磁珠定向移动，从而达到固液分离纯化的作用。与其他几种方法相比，生物磁珠法具有很多无法比拟的优势。,生物磁珠的概述,概念：生物磁珠是指具有细小粒径的超顺磁微球，一般具有超强的顺磁性。 1、有超强的顺磁性，在磁场中能够迅速聚集，离开磁场后又能够有助于磁分离地均匀分散。 2、有合适的且差别较小的粒径，保证了足够强的磁响应性又不会沉降。 3、有丰富的表面活性基团，以便可以和生化物质偶联，并在外磁场的作用下实现与被待测样品的分离。,生物磁珠的用途,1、核酸提取 2、细胞分离（CD4、CD8） 3、蛋白、抗体分离（氨基磁珠、羧基磁珠、环氧基磁珠） 4、重金属检测（巯基磁珠） 5、核磁共振（无包被磁珠）用于造影剂等。,生物磁珠的分类,按功能用途：环氧基磁珠、氨基磁珠、羧基磁珠、醛基磁珠、硅基磁珠等。 按直径：纳米级、微米级、亚微米级 按包被情况：裸珠、包被磁珠 按磁珠形态：磁流体、磁粉,磁珠法核酸提取试剂盒的原理,磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。不同性质的磁珠微珠所对应的纯化原理是不一致。使用磁珠法来纯化核酸的最大优点就是自动化。磁珠在磁场条件下可以发生聚集或分散，从而可彻底摆脱离心等所需的手工操作流程。 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂，可使动植物的细胞裂解，并使与DNA结合的蛋白质变性，DNA游离释放，磁珠可以特异地吸附DNA，通过洗涤，去除DNA以外的蛋白质、多糖等杂质，再用洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA，得到纯度和浓度均很高的DNA，可用于PCR模板、基因工程等。,磁珠法核酸提取试剂盒适用范围,磁珠法核酸提取试剂盒是纳米技术、分子生物学技术、生物医学技术和法医学技术的综合高科技产品。可广泛应用于分子生物学中的基因组研究、分子进化研究、医学中遗传病的研究、突变基因的检测、肿瘤的筛查、HPV等的检测、HLA分型、移植配型等、法医学生物样本血斑、精斑、头发、烟蒂等现场证物的检测、和司法上的亲子鉴定、血缘关系的鉴定等提供证据、考古学、大中小学的生物试验等许多领域。,磁珠法核酸提取试剂盒的优势,简便快捷：与传统提取方法相比耗时更短，效果更好，简化了离心步骤。 高通量：适用于全自动机械化多样品平台操作。 安全无毒：不含酚、氯仿等有机试剂。 纯度高：纯化得到的DNA可直接用于酶切、PCR、文库构建、杂交等分子生物学实验。,磁珠法核酸提取试剂盒的组成,裂解液：破坏细胞结构，使核酸充分的游离出来。 结合液：使核酸和生物磁珠结合。 洗涤液：去除残留杂质。 洗脱液：分离DNA与磁珠，得到高质量的DNA溶液。 生物磁珠,磁珠法核酸提取试剂盒的提取过程,2、加入磁珠 磁珠起到吸附DNA分子的作用，此时大部分蛋白质等杂质在裂解液中,1、裂解 使样品细胞破碎，胞内dna、rna及蛋白质等杂质释放到液体中,3、洗涤 用洗涤剂洗去可能附着在磁珠上的杂质,4、洗脱 将磁珠转移到新离心管，用洗脱剂将吸附在磁珠上的DNA冲到离心管中，离心管中的液体就是我们所需的DNA,朗司磁珠法核酸提取试剂盒,