血清中碱性磷酸酶活力的测定.pptx

血清中碱性磷酸酶活力的测定,问题 酶活力的测定就是测定酶促反应的速度。本实验的酶促反应速度是如何测定的？ 影响酶促反应速度的因素很多。本实验是如何控制各种因素对酶促反应速度的影响的？ 对于无可见光吸收的被测物，如何使用可见光光度计进行测定？实验中又是如何消除各种新增加因素的影响的？,实验目的,掌握酶活性测定的一般方法 熟悉血清碱性磷酸酶活性的测定方法 掌握血清碱性磷酸酶测定的临床意义,如何测定酶活性的大小?,酶促反应速度: 常用单位时间内底物的减少量或产物的生成量来表示。,酶活性： 酶催化某一化学反应的能力，其衡量的标准是酶促反应速度的大小。,酶活性的测定方法,固定时间法（或定时法）：通常是酶作用一段时间后，加入强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止酶促反应，测定这段时间内底物的减少量或产物的生成量，计算酶促反应的平均速度。 连续监测法：连续监测法是指每隔一定时间（260s），连续多次测定酶反应过程中某一反应产物或底物量随时间变化的数据，求出酶反应初速度，间接计算酶活性浓度的方法。 适用于自动生化分析仪 目前已取代固定时间法而成为临床实验室测定酶活性浓度最常用的方法,实验原理,二是测定底物解离磷酸根后的羟基化合物，这种方法又可分为： 酚化合物在显色剂的作用下显色比色测定。 生成的酚化合物本身在一定的条件下就可显色，如对硝基苯磷酸二钠（PNPP）法。,测定ALP的方法主要分为两种,一是测定底物解离下的磷酸根来计算酶活力，如-甘油磷酸钠法，但存在血清本身有磷酸根的缺点；,ALP ( alkaline phosphatase ),红色醌类衍生物,实验原理,测定酶活性时的注意事项:,控制反应条件: 底物，温度，pH，激活或抑制剂,控制反应时间： 起始，终止,测定产物的生成量： 光度法，显色反应,1）生理性增加： 见于生长中的儿童及妊娠中晚期妇女。 2）病理性增加：主要见于（1）肝胆疾病。阻塞性黄疸，急、慢性黄疸性肝炎，肝癌等均可引起血清ALP活力不同程度的升高，其中以癌性梗阻最明显。 （2）各种骨骼疾病如佝偻病、纤维性骨病、成骨不全症、骨转移癌和骨折修复愈合期等，由于骨损伤或病变使骨细胞内高浓度的ALP释放入血，引起血清ALP升高。 降低：主要见于呆小症，磷酸酶过少症，维生素C缺乏症。,【临床意义】,