新型反相限进材料对蛋白质的排阻特性分析(3).docx

新型反相限进材料对蛋白质的排阻特性分析(3)1. 3. 2 Silica-Br-C18-GMMA 对 SDM 和 OTC 的吸附。取 20 mg Silica-Br-C18-GMMA 于 50 mL 具塞锥形瓶中，以甲醇为溶剂分别配制一系列不同质量浓度的 SDM 和 OTC 溶液，25 下振荡吸附 12 h,离心，取上清液过 0. 45 μm 滤膜，用紫外分光光度计在270 nm 处检测溶液中的 SDM,在365 nm 处检测溶液中的 OTC,重复实验 3 次。根据吸附前后溶液中质量浓度的变化，计算出该新型反相限进材料对 SDM 和 OTC 的平衡吸附量。平衡吸附量按公式（1）计算：（1）。其中，Q 为吸附量（mg/ g），Co和 Ce分别为初始浓度和平衡浓度（g/ L），V 为溶液体积（mL），m 为反相限进材料的质量（g）。1.4 实际样品测定方法。1.4.1 样品处理。取 10. 0 mL 牛奶样品置于 50 mL 离心管中，加入一定量 OTC,加 20 mL 乙腈，振荡混合均匀，超声20 min,以 4 000 r / min 的速度离心 10 min,上清液过 0. 22 μm 滤膜，备用。准确配制一系列质量浓度为 4 10 mg/ L 的OTC 标准溶液。牛奶样品中 OTC 加标量分别为 3、5 和 9 mg / L,以新型反相限进材料作为萃取基质对样品进行分离纯化，用 HPLC 检测牛奶中 OTC 的含量。1.4.2 色谱条件。色谱柱：Diamonsil C18柱（150 mm×4. 6 mm,5μm）；流动相：质量分数为 0. 1% 的乙酸铵水溶液-乙腈（87 13,v/ v）；检 测 波 长：353 nm;流 速：1mL / min;进样量：20 μL.2 结果与讨论。2.1 新型反相限进材料的制备。新型反相限进材料采用二步 SI-ATRP 技术在硅胶内外表面分别接枝甲基丙烯酸十八烷基酯和GMA 链，合成路线见图 2.以硅胶为基质，表面引入氨基后，与 2-溴异丁酰溴反应得到溴代引发剂硅胶。选择 CuBr/2,2-联吡啶为催化体系，甲基丙烯酸十八烷基酯和 GMA 分别为功能单体，分别在无水甲苯和异丙醇中进行二步自由基引发聚合，水解得到表面含二醇基的一种新型反相限进材料。得益于 SI-ATRP 技术，新型反相限进材料的疏水层和亲水层接枝均匀，两种功能单体接枝密度高，提高了对小分子的萃取能力和排阻蛋白质的能力。2.2 新型反相限进材料的表征。2.2.1 红外光谱分析。