IL—17与IL—4基因遗传多态性与儿童哮喘易感性及外周血IL—17、IL—4和IgE的发展效果.docx

IL17与IL4基因遗传多态性与儿童哮喘易感性及外周血IL17、IL4和IgE的发展效果目的 探讨白细胞介素-17（L-17）与白细胞介素-4（IL-4）基因遗传多态性与儿童哮喘易感性及外周血IL-17、IL-4和IgE的关系。方法 通过采用PCR-RFLP技术检测分析60例哮喘儿童（哮喘组）和72例体检正常儿童（对照组）的IL-17以及IL-4基因的多态性， 以及采用免疫组化ELISA方法检测血清中IL-17、IL-4以及总IgE的含量， 对两组患儿的检测数据进行统计比较。结果 在单个基因位点多态性分析时， 发现两组儿童的IL-17基因rs763780（TT， TC， cc）位点以及IL-4基因-33C/T位点的基因型和等位基因频率分布， 差异有统计学意义（P0.05）， 具有可比性。见表1。1. 2 方法1. 2. 1 DNA样品提取 采用EDTA抗凝管采集两组儿童的外周静脉血2 ml， 并按说明书使用DNA提取试剂盒提取基因组DNA， 通过电泳检测其是否完整， 并采用紫外分光光度仪检测其浓度以及纯度后， 置于-70保存备用。剩余全血离心分离血浆后分装冷冻， 用于检测外周血IL-4、IL-17和IgE含量。1. 2. 1 IL-4与IL-17基因型分析 IL-4基因型引物序列为IL-4基因启动子区-33位点引物：5-TGAA GATATCTTT GTCAGCATT-3"， 引物：5-AG ACCCA TTAATAGGTGTCG-3"。IL-17基因型引物序列为IL-17/rs763780位点引物：5- CATTTCTA CAGCTTCTTCAGCTG-3"， 引物：5"-AGAAGGTGCTGG TGACTGTT-3"。并行PCR扩增， 取PCR产物5 &mu;l， 加限制性内切酶， 37消化8 h， 对PCR产物和酶切产物的检测应用凝胶电泳的方法， 进而参照DNA marker确定其基因型。1. 2. 3 外周血IL-4、IL-17和总IgE水平检测 采用ELISA技术测定外周血IL-4、IL-17和总IgE含量。1. 3 统计学方法 用SPSS18.0统计学软件处理数据。计量资料以均数&plusmn;标准差（ x-&plusmn;s）表示， 实施t检验；计数资料以率（%）表示， 实施&chi;2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。2 结果2. 1 IL-4与IL-17基因内切酶PFLP与哮喘的关系 IL-17基因rs763780位点以及IL-4基因-33C/T位点的基因型分布在哮喘组和对照组内分布， 差异具有统计学意义（P<0.05）。见表2。2. 2 两组外周血IL-17、IL-4和IgE水平的比较 外周血IL-17、IL-4和IgE水平3组数据中哮喘组均明显高于对照组， 差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。3 讨论哮喘是一种临床常见的疾病， 然而其病因十分复杂。哮喘的发生往往是由患者本身的遗传因素以及外界的环境因素引起的， 其在遗传上具有明显的易感性【3】。在患儿哮喘的发病过程中， 遗传因素往往起着重要的作用。为了探查出哮喘人群的易感基因， 更好的帮助临床医师了解哮喘的病理发生， 提高患者的治疗效率， 越来越多的学者开始注重关于哮喘病遗传病基因的研究。Th1/Th2失衡理论被广泛接受， 两种细胞因子之间既相互拮抗又相互促进， 行使各自不同的生理功能。然而在哮喘发生时， 机体自身的免疫反应发生， 导致Th0细胞主要向Th2分化， 其功能发生相对的亢进， 导致Th1的功能则相对受到抑制， 从而使得这种动态的平衡状态遭到破坏。IL-4是诱导Th2细胞分化的关键因子， 国内有研究发现IL-4位点与哮喘易感性以及血清IgE升高有着密切的关系【4】。然而由于Th1/Th2失衡理论并不能够完全用来解释哮喘的某些实验以及临床现象。随着医学技术以相关检测手段的不断发展， 越来越多的研究显示IL-17以及IL-4在哮喘的发生发展中能够起到一定的作用。本研究中IL-17在哮喘患儿外周血中表达增高， 说明IL-l7同样也参与了哮喘的发病过程， 从而可以弥补Th1/Th2失衡这个机制的不足。 哮喘的主要特点是气道高反应性和气道慢性炎症， 而且细胞因子在气道炎症的形成方面有着十分重要的作用。血清中IgE的含量水平与哮喘的发病和气道高反应高度相关【5】。以血清中总IgE或者特异性IgE升高为特点。许多细胞因子介导了哮喘发病的生物学反应， 其中IL-4和IL-17就是最强的调节因子， 在哮喘的发生中扮演者重要角色。哮喘患者的气道黏膜中IL-4mRNA和蛋白水平均增高， IL-4促进IgE的合成。亦有研究发现， 哮喘患者血清IL-4水平高于正常对照组【6】。赵凯姝等【7】的研究证实支气管哮喘发生与IL-17呈正相关， 而与IL-23以及IFN-&gamma;无明显关系。我国研究哮喘相关基因多态性起步较晚， 但是随着分子生物技术以及遗传技术的逐步发展， 对其的研究也渐渐深入， 进一步阐明哮喘的发病机制。IL-4基因以及IL-17基因与儿童哮喘的发生有着密切关系， 明确哮喘易感个体， 为哮喘的临床治疗提供新的思路。参考文献【1】王阿芳， 钱粉红， 周林福， 等. IL-4、IL-13单核苷酸多态性与中国东南方汉族人群哮喘关系的研究.中华哮喘杂志电子版， 2012， 6（6）：1561-1565.【2】郑莎莎， 朱晓萍， 李波， 等.贵阳地区哮喘患儿IL-4R&alpha;基因多态性及其与血清总IgE水平的相关性.中华医学杂志， 2014， 94（36）：2822-2827.【3】黄花荣， 吴敬芳. IFN-&gamma;与IL-4基因多态性与儿童哮喘易感性及外周血IFN-&gamma;、IL-4和IgE的关系.中国病理生理杂志， 2010， 26（9）：1769-1775.【4】王修海， 赵炜， 刘世国， 等.白细胞介素4和13基因多态性对支气管哮喘患者易感性及血清总IgE水平的影响.中华结核和呼吸杂志， 2009， 32（3）：161-164.【5】郭彤， 赵宏霞， 杨勇， 等.白细胞介素-23基因多态性与儿童哮喘易感性的关系.广东医学， 2012， 33（13）：1975-1977.【6】黄永富， 余世庆， 杭杲， 等.哮喘患者血清中IL-4， IL-12， IL-13， IFN-&gamma;， IgE水平的测定及其临床意义.现代检验医学杂志， 2009， 24（5）：120-123.【7】赵凯姝， 张云峰， 成焕吉， 等.白细胞介素-23、白细胞介素-17在支气管哮喘小鼠发病中的作用.实用儿科临床杂志， 2010， 25（9）：639-642.