多潘立酮片人体生物等效性得发展研究.docx

多潘立酮片人体生物等效性得发展研究【中图分类号】R914.1 【文献标识码】A【文章编号】1002-3763（2014）02-0007-01多潘立酮片是一种针对呕吐症状能产生强力抵抗性的促动药，主要是通过拮抗外周多巴胺D2受体，对胃肠道产生作用，从而增强胃蠕动，排空肠胃，预防出现胆汁反流的情况，保护胃液的分泌不受到影响，同时对消化不良症状以及饮食、感染或是放射性治疗引发的呕吐恶心症状有很好的治疗作用。临床实践证明，多潘立酮能够在人体内迅速吸收，很少出现不良反应，但是利用率却较低。本研究对此展开探讨，以提供更多的临床参考依据。资料与方法1.1一般资料本研究的受试制剂是多潘立酮片，参比制剂是多潘立酮对照品、文拉法辛对照品，以超纯水作为试验用水，色谱纯取甲酸、甲醇、醋酸等，其余的是分析纯。选用API4000LC-MS/MS联用仪作为实验仪器，此外还包括电子天平、高速离心机、超纯水机以及离心浓缩仪。1.2方法1.2.1质谱色谱形成条件：（1）ESI源作为离子源，其电压保持在5500V，温度为500，采用正离子式进行检测，多反应监测进行扫描，多潘立酮+，（m/z）426/175.1为质荷比。（2）AgilentZOBAXSBC18（3.0mmx100mm，3.5μm），流动相甲醇4mmol/L，含1%0甲酸的醋酸铵为55：45，流速为400μl/min，保持30的柱温【1】。1.2.2受试者条件要求：选取30例健康的男性，年龄在23岁32岁之间，身高在159cm186cm之间，体重在50kg77kg之间，经过检查发现30例受试者在肝功能和肾功能、心电图等方面都显示正常，达到了受试者的要求。经过签署知情同意书，审批以后成为合格受试者。1.2.3用药情况和样品采集：30例受试者在进行实验的前两周要禁烟禁酒，不能服用其他的药物。交叉实验的设计要符合单剂量以及二乘二原则，也就是将30例受试者随机分成2组，保证以1周为交叉间隔时间，让受试者在早上8点200mL温水口服20mg参比制剂或是试验制剂，2小时以后饮水，4小时以后进食，在进行服药和取血的时候让受试者在I期临床的病房中进行密切观察。在进行药物的服用之前要对受试者取4ml的空白血样，服药以后进行4ml静脉采血分为为0.1667、0.333、0.5、0.75、1、1.5、2、3、5、8、12、24、30、36小时，采用肝素抗凝试管收集，离心分离血浆并将其存于-75的待测血药浓度【2】。1.2.4血浆样品的存放条件：加入0.5ml的血浆样品到10ml的具塞玻璃试管当中，加入1.026μg/ml内标文拉法辛溶液50μl，进行10s旋涡并加入0.5mol/L的氢氧化钠碱液100μl混匀，4ml乙酸乙酯并振荡3min，保持10min300r/min离心，将上层有机相3.5ml取下，在40的浓缩离心仪挥干，同时加入100μl含50%的甲醇溶液进行复溶，1min旋涡，5min2000r/min离心，将上层清液吸取以后做LC-MS/MS分析取5μl。1.3统计学方法本研究采用BAPP3.0软件进行处理，计算相对生物利用度以及药动学参数，测出被试制剂和参比制剂的浓度，通过梯形法计算出转换后的双单侧和方差，t检验，最后对参比制剂以及被试制剂是否生物等效进行评价。结果2.1方法学考证2.1.1特异性分析在LC-MS/MS条件下，将多潘立酮保留2.5min的时间，而内标文拉法辛则保留3min时间，保证多潘立酮以及内标峰形良好，不受到杂峰影响，并保持平稳的基线。2.1.2标准线性及曲线范围以0.321μg/L82.24μg/L为标准曲线范围，其中0.321μg/L为最低定量限。2.1.3准确度和精密度0.648μg/L表示低，6.48μg/L表示中，64.8μg/L表示高，这三种浓度的日内相对标准偏差分别是7.04%，2.91%，1.90%，日间相对标准偏差分别是9.25%，7.81%，6.18%，因此，这三种浓度的多潘立酮准确度保持在97.29%101.75%之间。2.1.4回收率提取三种浓度的多潘立酮回收率分别为88.24%、79.78%以及67.77%，内标文拉法辛的回收率则是92.19%。2.1.5介质效应经过LC-MS/MS介质效应分析，三种浓度的多潘立酮介质效应分别是100%、96.63%、99.25%，而内标文拉法辛的介质效应则为98.09%。2.1.6样品稳定性分析从上述的实验可以得出，低、中、高三种浓度的多潘立酮血浆样品处在室温下放置了24小时的情况下，经过反复的3次冻融，并在-75条件下放置15天，稳定性都能保持良好。2.2人体药动学2.2.1药动学参数经过BAPP3.0进行程序处理后，参比制剂以及受试制剂的血浆药物浓度用非房室模型估算药动学参数，30例健康受试者的详细情况见下表1。2.2.2生物等效性研究对两种制剂中多潘立酮参数进行转换以后进行方差分析，t检验，得出可信区间为95.17%124.31%，T1=5.34，T2=3.28，t0.1（22）=1.69，而AUC90%可信区间为101.98%121.13%，T1=6.73，T2=2.54，t0.1（22）=1.69，上述结果与SFDA相关要求相符，因此两种制剂参数生物等效。讨论对于多潘立酮血药浓度的分析方法很多的文献都有记载，包括高效液相色谱法等，但是很多方法操作比较繁琐，线性的范围比较窄，灵敏度也比较低，而且实验的周期比较长。在本研究中采用的是高效LC-MS/MS联用法检测，操作比较简单，具有很高的灵敏度，可以将其广泛应用于多潘立酮的临床药动学研究工作中。本研究选择的两种制剂药动学参数与参考文献报道的一致，但是因为多潘立酮血药浓度具有时间曲线，并且在不同的受试者中具有一定的差异性，所以普遍表现是受试制剂在对应浓度方面要大于参比制剂，导致的原因很有可能是因为受试制剂在溶出度方面比参比制剂要大。此外，在本研究的I期临床观察中医疗监护受试者，并没有任何的药物不良反应发现，试验效果良好。参考文献：