普鲁卡因半数致死量_LD50的测定.ppt
小组成员：周瑞琪、宋文欣、吴迪、车远、王楠,普鲁卡因(LD50)的测定,毒性试验,特殊毒性试验（致畸、致癌、致突变） 长期（慢性）毒性试验 急性毒性试验：17d,半数致死量（lethal dose 50%, LD50）：是指能够引起试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量的对数值表示。 测定LD50意义 (1)是衡量药物毒性大小的指标，评价药物优劣的重要参数 (2)评价药物安全性-治疗指数 TI=LD50/ED50 (3)申报新药过程中必须提供的药理学资料,根据物质的半致死剂量LD50值，美国科学院把毒性物质危险划分为五个等级 “0”：无毒性，LD5015 g/kg； “1”：实际无毒性，5 g/kg<LD50<15 g/kg； “2”：轻度毒性，0.5 g/kg<LD50<5 g/kg； “3”：中度毒性，50 mg/kg<LD50<500 mg/kg； “4”：高度毒性，LD50<50 mg/kg,普鲁卡因产生毒性作用的原理: 普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产生全身性毒性反应，主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑制，初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。 患者可因呼吸衰竭而死亡。,LD50的测定方法有很多。如：目测机率单位法、加权机率单位法(Bliss法)、寇氏法、序贯法等。 Bliss法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分组无严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，是目前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐，故现多采用计算机程序计算。 改良寇试法简便而计算较为精确。,【实验目的】 1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。 2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度。,实验部分,实验动物：小白鼠50只，体重18g，各半。 实验器材：计算机、电子秤、注射器、小鼠笼。 实验药品：1%普鲁卡因，苦味酸溶液（标记）,【实验材料】,1.体重相近（202g）。 2.健康，雌雄各半。 3.怀孕雌鼠剔除不用。,实验小鼠选择,随机原则：是指在抽样时排除主观上有意识地抽取调查单位，每个受试单位以概率均等的原则，随机地分配到实验组与对照组。,随机原则,【随机】,1.将小鼠雌雄分开，分别称重，一重量段放入一笼。（18.19.20.21.22） 2.标记小鼠：同一笼小鼠标记同一符号。 3.雌雄按重量顺序随机分为5组，保证不同性别体重小鼠均匀分配于各组。,小鼠随机分组处理,分组方式： 组号 1* 2* 3* 4* 5* 鼠号 1 2 3 4 5 5 1 2 3 4 4 5 1 2 3 3 4 5 1 2 2 3 4 5 1 ,1. 按剂间比1：0.85，腹腔注射1%普鲁卡因，5组剂量分别为130mg/kg,153mg/kg,180mg/kg,212mg/kg和249mg/kg。 2.观察30min统计小鼠死亡数。 3. 用改良寇试法和bliss法计算普鲁卡因的LD50和95%可信限。,【实验步骤】,抓好后将小鼠保持头低位,改良寇试法 Bliss法,计算LD50及其95%可信限,基本要求 1.反映情况符合或接近对数正态分析。 2.相邻两计量比值相等。 3.各组动物数相等或相近。 4.不要求死亡率包括0%和100%，但二者和最好再80%120%范围内。,改良寇试法,计算LD50 1. 最小剂量组死亡率0%，最大剂量组死亡率100%： LD50=lg-1（Xm-i（p-0.5） p 各组动物死亡率 Xm最大剂量的对数 i -相邻两组对数剂量差值,改良寇试法,2. 0%<最小剂量组死亡率<30%，或70%<最大剂量组死亡率<100%时： LD50=lg-1Xm-i(p-(3-Pm-Pn)/4) Pm-剂量最大组死亡率 Pn-剂量最小组死亡率,改良寇试法,3.标准物 SlgLD50=i(p-p2)/(n-1) 4.LD50的95%可信区间 Lg-1(lgLD501.96SlgLD50),改良寇试法,传统计算方法,Bliss法,采用Bliss法程序计算LD50及其95%可信限步骤： 启动微机，运行相应程序，进入其数据处理选项，再进入半数有效量选项。 一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数据。 单击“计算”按钮，计算LD50等参数。 相关软件spass，sas，还有专门LD50数据处理程序。,Bliss法,给药从中剂量组开始。 动物的饥饱，实验室温度、实验时间应尽量保持一致。 精密测量LD50应先摸索出合适剂量范围。,【注意事项】,1.徐叔云，卞如濂，陈修：药理实验方法学 2.蔡七雄等；半数致死量（LD50）Bliss法的评价及计算；数理药学杂志，1995，8（4） 3.黄卓, 唐黎明, 王依婷：采用SAS软件包进行半数致死量(LD50)的计算：药学服务与研究，2002 Sep; 2(3) 4.钱之玉：药理学试验方法与指导,【参考文献】,谢谢大家！,
